CC BY
100
Семенова Анна Борисовна - к.м.н., зав. лабораторно-диагностической службой ГБУЗ ЧОКОД. Адрес: 454082, г. Челябинск, ул. Блюхера, 42. E-mail: asemenova81@mail.ru.
Шишкова Юлия Сергеевна - д.м.н., профессор кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии и клинической лабораторной диагностики ГБОУ ВПО ЮУГМУ Минздрава России. Адрес: 454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64. Казачков Евгений Леонидович - д.м.н., профессор, зав. кафедрой патологической анатомии с секционным курсом ГБОУ ВПО ЮУГМУ Минздрава России. Адрес: 454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64.
Шаманова Анна Юрьевна - врач-патологоанатом ГБУЗ ЧОКОД. Адрес: 454082, г. Челябинск, ул. Блюхера, 42. Важенин Андрей Владимирович - д.м.н., профессор, член-корр. РАН, главный врач ГБУЗ ЧОКОД. Адрес: 454082, г. Челябинск, ул. Блюхера, 42.
ЛИТЕРАТУРА
1. Долгушин, И.И. Нейтрофильные внеклеточные ловушки и методы оценки функционального статуса нейтрофилов / И.И. Долгушин, Ю.С. Андреева, А.Ю. Савочкина - М.: Издательство РАМН, 2009. - 208 с.
2. Нейтрофильные экстрацеллюлярные сети ДНК сдерживают рост опухолевых клеток / И.И. Долгушин [и др.] // Российский иммунологический журнал. - 2013. - Т. 7, №2-3. - С.130.
3. Маянский, Д.Н. Фагоцитарные реакции в патологии / Д.Н. Маянский, А.А. Цырендоржиев, Д.Д. Зубахина // Первый Российский конгресс по патофизиологии. - М., 1996. - 269 с.
4. Пигаревский, В.Е. Гипотеза о резорбтивной клеточной резистентности как особой форме антимикробной защиты организма / В.Е.Пигаревский, // Арх. патологии. - 1992. - Т. 54, № 8. - С. 40-45.
5. Сафронова В.Г. Неоднозначность роли нейтрофила в генезе опухоли / В.Г. Сафронова, В.Н. Мальцева // Цитология. - 2009. - Т. 51, № 6 -С.469-474.
6. Brinkmann V. Neutrophil extracelllulartraps kill bacteria / Brinkmann V. [et al.] // Sciense. - 2004. - Vol. 303. - P. 1532-1535.
7. A proposed role for neutrophil extracellular traps in cancer immunoediting / S. Berger-Achituv, [et al.]// Frontiers in immunology. -2013. - Vol.4. - P. 48.
8. Neutrophil extracellular traps sequester circulating tumor cells and promote metastasis / J. Cools-Lartigue [et al.]// J Clin Invest. - 2013. - Vol. 123(8). - P. 3446-3458.
9. Neutrophil extracellular DNA networks restrain growth of tumor cells, Internationaler Medizinischer Kongress «Moderne Aspekte der Prophylaxe,behandlung und rehabilitation» / I.I. Dolgushin [et al.] //Euromedica Hannover. - 2013. - P.62-63.
УДК 57.089.32:577.121.7:618.177-089.888.11 © И.Р. Исхаков, Р.С. Исхакова, Р.Р. Фархутдинов, 2014
И.Р. Исхаков, Р.С. Исхакова, Р.Р. Фархутдинов ОЦЕНКА СОСТОЯНИЯ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ НА ЭТАПАХ РАННЕГО ЭМБРИОГЕНЕЗА
ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России, г. Уфа
Около 15% супружеских пар во всем мире имеют проблемы с естественным наступлением беременности. Исследование причин бесплодия показывает, что на долю только мужского фактора приходится около 20% случаев, только женского - 39%, и мужского, и женского - 26%, а в 15% случаев нет каких-либо явных причин. В последнее время уделяют большое внимание роли свободных радикалов в репродуктивной функции. Свободные радикалы отличаются высокой химической активностью. Наиболее часто встречаются активные формы кислорода и радикалы, образующиеся при перекисном окислении липидов. Роль свободных радикалов при оплодотворении и развитии эмбриона малоизучена.
Ключевые слова: экстракорпоральное оплодотворение, дробление, бластоциста, культуральная среда.
I.R. Iskhakov, R.S. Iskhakova, R.R. Farkhutdinov FREE RADICAL PEROXIDATION DURING EARLY EMBRIOGENESIS
About 15% of couples around the world have problems with the natural onset of pregnancy. Research into the causes of infertility shows that the share of male factor only accounts for about 20% of cases, only female - 39%, and male and female 26%, and in 15% of cases there are no obvious reasons. In recent years, a great attention has been paid to the role of free radicals in the reproductive function. Free radicals are highly reactive. The most frequently occurring reactive oxygen radicals are formed during lipid peroxidation. The role of free radicals in fertilization and embryo development has not been widely studied.
Key words: in vitro fertilization, cleavage, blastocyst, culture medium.
В настоящее время одним из актуальных вопросов репродуктологии и эмбриологии является отбор лучшего по качеству эмбриона, обладающего наибольшей способностью к имплантации. При этом основная задача - повышение частоты наступления беременности [2].
Несмотря на большое число методик, разработанных для селекции эмбрионов, на практике применяется только отбор по морфологическим критериям. Система оценки
качества морфологических признаков, впервые предложенная Гарднером и Скулкрафтом более 10 лет назад, широко применяется при отборе бластоцист для переноса в полость матки [4]. Основной недостаток при этом заключается в том, что качество эмбриона оценивается только по внешним признакам.
Одним из перспективных направлений для отбора лучшего эмбриона может стать изучение метаболизма при его культивировании. Суммарное проявление изменения обме-
на веществ может отражаться и на процессах свободнорадикального окисления (СРО), происходящих в средах после оплодотворения и культивирования эмбрионов.
Цель исследования - оценить состояние процессов свободнорадикального окисления в средах, применяемых при оплодотворении и культивировании эмбрионов человека.
Задачи исследования:
1. Изучить влияние сред, используемых при оплодотворении и культивировании эмбриона, на процессы СРО.
2. Изучить влияние сред на процессы СРО до и после проведения искусственного оплодотворения и культивирования.
3. Сравнить активность процессов СРО в средах после проведения оплодотворения и культивирования с эмбриологическими показателями.
Материал и методы
Было обследовано 1200 пар с диагнозом бесплодие, проходивших диагностику и лечение на базе медицинского центра «Семья» г. Уфы. Для выявления причин бесплодия женщинам проводили общеклиническое и гинекологическое обследования, УЗИ органов малого таза, эндоскопическое исследование по показаниям, определяли концентрацию половых гормонов в крови. Мужчинам - общеклиническое и урологическое обследования, анализ спермограммы, а также проверяли уровень половых гормонов.
Индукцию суперовуляции в лечебных циклах экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) осуществляли по стандартным протоколам [3].
Оплодотворение проводили в среде Fertilization medium (SAGE) и оставляли на 18-20 часов в условиях инкубатора. На следующий день эмбрионы пересаживали в Cleavage medium (SAGE) и оценивали их качество. На 3-й день эмбрионы пересаживали в Blastocyst medium (SAGE) и вновь оценивали их качество. После забора эмбрионов из чашки оставшуюся среду забирали на исследование свободно-радикальных процессов.
Интенсивность СРО измеряли методом регистрации хемилюминесценции (ХЛ) - свечения, возникающего при взаимодействии
свободных радикалов, на хемилюминометре ХЛ-003 (Россия) [1]. Уровень продуктов пере-кисного окисления липидов определяли по содержанию малонового диальдегида (МДА) в исследуемой среде набором фирмы «Агат». Общую антиоксидантную активность оценивали при помощи набора фирмы «Randox».
Математическая обработка полученных результатов производилась с помощью программы Microsoft Excel 2000.
Результаты и обсуждение Запись ХЛ модельной системы, в которой вызывается образование активных форм кислорода (АФК), характеризуется следующими параметрами: спонтанное свечение, быстрая вспышка в момент введения инициатора, латентный период, переходящий в медленную вспышку [1]. Наиболее показательным параметром является общая интенсивность свечения за время измерения. Регистрация ХЛ была проведена в средах до и после проведения оплодотворения и культивирования эмбрионов.
Интенсивность ХЛ модельной системы, генерирующей АФК, была максимальной при добавлении среды Fertilization medium. Уровень ОАА во всех средах после проведения оплодотворения и культивирования эмбрионов понизился, а содержание МДА повысилось (см. таблицу).
,127*
140 120 100 80 60 40 20 0
115*
135* 116^-
117*;
12В*
Ш
_Контроль
100%
12 3
ПИЮ <70% В >70%!_I низкое кач-во
| I среднее кач-во I I высокое кач-во Рис. Влияние сред, применяемых при оплодотворении и культивировании эмбрионов, на процессы СРО в модельной системе, генерирующей АФК, и эмбриологические показатели: 1 -частота оплодотворения, 2 - качество дробления, 3 - выход в бластоцисты.
На приведенном рисунке показано, что при высокой частоте оплодотворения, дроблении и выходе в бластоцисты высокого качества влияние сред на интенсивность ХЛ модельной системы, генерирующей АФК, было выше.
Показатели СРО в средах после проведения оплодотворения и последующего культивирования эмбрионов
Таблица
Показатели Контроль Среды
Fm (n=59) Cm (n=59) Bm (n=55)
Интенсивность ХЛ от контроля, % 100 147* 122* 121*
ОАА, ммоль/л 3,4±0,09 1,9±0,07* 2,1±0,03* 2,4±0,06*
МДА, Д532 нм 0,19±0,05 0,29±0,04 0,27±0,03 0,26±0,04
* Статистически достоверные различия (p<0,05).
Таким образом, питательные среды, в которых проводили оплодотворение и культивирование эмбрионов, усиливают генерацию радикалов кислорода в модельных системах. Это может свидетельствовать об ускорении метаболических процессов. В среде, применяемой при оплодотворении, уровень СРО был выше, чем в средах, используемых при культивировании эмбрионов. Уровень ОАА во всех исследуемых средах после проведения оплодотворения и культивирования эмбрионов понижался, а содержание МДА повышалось. При хороших эмбриологических показателях влияние исследуемых сред на интенсивность ХЛ модельной системы, генерирующей АФК, было выше.
Выводы
1. Среды, применяемые при оплодотворении и культивировании эмбрионов, повышают интенсивность хемилюминесценции
в модельной системе, генерирующей активные формы кислорода.
2. После проведения экстракорпорального оплодотворения и дальнейшего культивирования эмбрионов в питательной среде снижается уровень общей антиокси-дантной активности, а уровень ТБК-активных продуктов увеличивается. Одновременно повышается влияние исследуемых сред на интенсивность хемилюминесценции модельной системы, генерирующей активные формы кислорода.
3. После проведения оплодотворения и культивирования эмбрионов влияние сред на интенсивность хемилюминесценции модельной системы, генерирующей активные формы кислорода, было выше при хороших эмбриологических показателях: высокой частоте оплодотворения, хорошем дроблении и выходе в бластоцисты.
Сведения об авторах статьи: Исхаков Ильдар Ринатович - аспирант ЦНИЛ ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава России. Адрес: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3. E-mail: i1987@rambler.ru.
Исхакова Римма Сагдулловна - эмбриолог медицинского центра «Семья». Адрес: 450006, г. Уфа, ул. Салавата, 13. Фархутдинов Рафагат Равильевич - д.м.н., профессор, зав. ЦНИЛ ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава России. Адрес: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3.
ЛИТЕРАТУРА
Фархутдинов, Р.Р. Воздействие биофлафоноидов прополиса на процессы липопероксидации в гонадах крыс при интоксикации полихлорированными бифенилами / Р.Р. Фархутдинов, Д.С. Громенко // Вопросы питания. - 2006. - №6. Elder, K. In vitro fertilization / K. Elder, B. Dale. - М.: МЕДпресс-информ, 2008. - 304 с.
Global variations in the uptake of single embryo transfer / Maheshwari A. [et al.] // Human reproduction update. - 2011. - Vol. 17, №1. - P. 107-120.
Single blastocyst transfer: a prospective randomized trial / Gardner D.K. [et al.] // Fertil.Steril. - 2004. - Vol. 81, №3. - P. 551-555.
1.
4.
УДК 61 1.36:615.277.3:615.32
© О.В. Калинина, B.C. Полякова, A.M. Шехтман, Б.А. Фролов, 2014
О.В. Калинина1, B.C. Полякова1, A.M. Шехтман2, Б.А. Фролов1 ВЛИЯНИЕ МИЛИАЦИНА НА СТРУКТУРНУЮ РЕОРГАНИЗАЦИЮ ПЕЧЕНИ МЫШЕЙ (CBAXC57BL6)F1, ПОДВЕРГНУТЫХ ВОЗДЕЙСТВИЮ МЕТОТРЕКСАТА
'ГБОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия»
Минздрава России, г. Оренбург 2ГУЗ «Оренбургская областная клиническая больница», г. Оренбург
Проведена экспериментальная оценка гепатопротекторного действия милиацина в условиях гепатотоксичности, индуцируемой метотрексатом. На основании изучения морфометрических и морфологических показателей прослежена динамика патологического процесса в органе, характеризующаяся нарастанием повреждений гепатоцитов в течение 2-х недель после введения метотрексата и незавершенностью репаративной регенерации к концу 3 недели наблюдения. Милиацин демонстрировал защитный эффект, уменьшая выраженность клеточных повреждений и обеспечивая полное восстановление структуры печени к концу наблюдения.
Ключевые слова: морфология печени; гепатопротекция; цитостатики; тритерпеноиды.
O.V. Kalinina, V.S. Polyakova, A.M. Shekhtman, B.A. Frolov MILIACIN INFLUENCE ON STRUCTURAL REORGANIZATION OF MICE LIVER (CBAXC57BL6)F 1 EXPOSED TO METHOTREXATE EFFECT
The experimental assessment of hepatoprotective miliacin action in conditions of hepatotoxity induced by methotrexate was performed. The dynamics of the pathological process in the liver was characterized by an increase of hepatocyte damage within 2 weeks after methotrexate injection and by incomplete reparative regeneration by the end of 3 week' s observation. The dynamics
