CC BY
4
•малой токсикологии промышленных ядов. М., 1947. — Сперанский С. В. — «Фар" :макол. и токсикол.», 1965, Ns 1, с. 123. — ЧеркинскийС. Н., Тугарино" в а В. Н. — В кн.: Санитарная охрана водоемов от загрязнения промышленными сточны" ми водами. Вып. 5, М., 1962, с. 399. — ЧеркинскийС. Н., Ф р и д л я н д С. А,-К а г а н Г. Э. — «Гиг. и сан.>, 1974, № 1, с. 14.
Поступила 26/IX 1975 г.
УДК 614-777-078:576.851.49.07
Е. К■ Гипп
ОЦЕНКА РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДОВ ВЫДЕЛЕНИЯ САЛЬМОНЕЛЛ ИЗ ВОДЫ ПОВЕРХНОСТНЫХ ВОДОЕМОВ
¿Московский научно-исследовательский институт гигиены им. Ф. Ф. Эрнсмана
Эффективность выделения сальмонелл из объектов внешней среды в значительной степени была повышена после внедрения в практику эффективных сред накопления (тетратионатной среды Кауфмана, селенитовой среды Лейфсона и магниевой среды Раппапорта, Конфорти и Навон).
Г. П. Калиной и В. Л. Шигановой (1972) была разработана модификация среды Раппапорта, Конфорти и Навон, которая успешно используется для выделения сальмонелл из объектов внешней среды, в том числе и из воды поверхностных водоемов. Однако отрицательный результат исследований при применении указанных сред не "всегда свидетельствует о безусловном отсутствии сальмонелл в изучаемом объекте.
В последнее время предложены различные методы, способствующие повышению высеваемости сальмонелл. Помимо посева воды дробными порциями и увеличения объема исследуемых проб, к ним относятся аэрация питательного субстрата (Alford и Knight; Mossel и Ratto; С. А. Анатолий), инкубация посевов при повышенной температуре (Harvey и Thomson; Yameson; Deaks; Spino; Cheng и соавт.; Nabbut Nassim), увеличение сроков инкубации (Harvey и Philips; Taylor) и предварительное подращивание посевов (North; Montford; Galton и соавт.).
Нашей целью явилась апробация перечисленных методов исследования на магниевой среде накопления. В экспериментальных и натурных условиях изучено влияние аэрации магниевой среды на высеваемость сальмонелл. Аэрирование проводили с помощью шуттель-аппарата, помещенного в термостат при 37° в течение первых 5 ч инкубации посевов. Были взяты представители разных групп сальмонелл по схеме Кауфмана—Уайта: S. typhi murium, S. derby, S. newport и S. typhi. В экспериментальных условиях высевы производили сразу после внесения взвеси культур, через 2, 4, 6, 8, 24, 48 и 72 ч инкубации посевов при 37°. Установлено, что аэрация магниевой среды не увеличивала концентрации сальмонелл по сравнению с контролем (посевы этих же культур, находящиеся в стационарном положении при тех же условиях) независимо от сроков инкубации посевов. Экспериментальные данные подтверждены в натурных условиях.
Следующим этапом наших исследований явилось изучение влияния повышенной температуры инкубации посевов. В опыт были взяты микроорганизмы, наиболее часто вырастающие при посеве воды в магниевую среду накопления: Prot. mirabilis, Ent. aerogenes, Kl. aerogenes, Esch. coli, S. typhimurium, S. anatum, S. typhi. Все культуры выделены из речной воды и обладали типичными биохимическими свойствами. S. typhi получена из сальмонеллезного центра (№ 1049).
После приготовления ряда децимальных разведений посевы инкубировали при 37 и 43°, а также при комбинации температур (первые 5 ч при -43°, после чего продолжали инкубацию при 37°). Учитывали наличие роста в магниевой среде непосредственно сразу после заражения, через 8 и 24 ч инкубации. При 43° не происходило развития Prot. mirabilis, Ent. aerogenes, Kl. aerogenes и S. typhi, тогда как на развитие Esch. coli эта тем-
3'
67
пература инкубации не оказывала влияния (индексы составляли 7 и 6,26, а при температуре 37°—7,8 и 6,8)- Индексы S. typhi murium и S. anatum были несколько ниже при 43°, чем при 37°, в пределах 1 логарифма. При температуре инкубации 37° индексы S. typhi были меньше, чем у S. ty-phimurium и S. anatum, тем не менее развитие сальмонелл происходило достаточно эффективно (так, индексы S. typhi murium составляли 8,18 и 7,76, индексы S. anatum — 8,43 и 7,55, индексы S. typhi — 6,49 и 6,35).
В натурных условиях (5 проб воды реки) проверены следующие температуры инкубации посевов воды в магниевой среде: 37, 41 и 43°, а также комбинация температур (43 и 37°). Самая высокая высеваемость сальмонелл (100%) получена при температуре инкубации 37°, несколько ниже (87,5%)— при комбинации температур. При температуре инкубации 41 и 43° высеваемость сальмонелл соответственно составляла 60 и 66,6%. Таким образом, лучшие результаты получены при температуре инкубации 37°. К таким же выводам в отношении магниевой среды пришли Harvey и Thomson, Spino. Мы изучили влияние сроков инкубации посевов (24, 48 и 72 ч) при разных температурах инкубации. Установлено, что увеличение сроков инкубации посевов в магниевой среде, накопления до 48 и 72 ч независимо от температуры инкубации не повышает высеваемости сальмонелл из воды поверхностных водоемов.
Помимо перечисленных исследований, проведено изучение влияния предварительного подращивания посевов в лактозном бульоне в течение 16—18 ч при 37°, после чего производили пересев в магниевую среду обычной концентрации. Этим методом исследовано 10 проб речной воды сравнительно с обычным «экспедиционным» методом. Методом предварительного подращивания посевов в лактозном бульоне сальмонеллы выделены в 7 пробах, «экспедиционным» методом — в 9 пробах. Таким образом, предварительное подращивание посевов в лактозном бульоне с последующим пересевом в магниевую среду накопления не повышает высеваемости сальмонелл из воды поверхностных водоемов. Полученное преимущество «экспедиционного» метода по сравнению с методом подращивания в лактозном бульоне статистически достоверно, т. е. разница показателей 20% больше, чем удвоенная средняя ошибка разности (3,464). Индексы сальмонелл, как и процент обнаружения сальмонелл, был выше при исследовании «экспедиционным» методом (22,87 и 5,08 соответственно).
В качестве вторичного этапа обогащения применяли пересев из магниевой среды накопления в магниевую среду с повышенной концентрацией хлористого магния (5%). Одним из недостатков магниевой среды является способность некоторых сопутствующих энтеробактерий после некоторого периода торможения развива ся в ней и иногда достигать к концу суточной инкубации концентраций близких к концентрациям сальмонелл. Это приводит к тому, что при пос дующем высеве на среду Вильсона и Блэр наряду с колониями сальмоне-.л развиваются колонии других микробов, иногда симулирующие колонии сальмонелл. Учитывая, что сальмонеллы могут без вреда переносить концентрацию хлористого магния в пределах до 5% (Padrón и Dockstader), мы попытались модифицировать магниевую среду путем увеличения содержания хлористого магния до 5%. Однако, поскольку такая концентрация для попадающих в среду из исследуемой воды сальмонелл может оказаться ингибиторной, был введен дополнительный этап накопления: после 16—18 ч инкубации исследуемой воды в магниевой среде обычного состава переносили небольшое количество развившейся культуры (в пределах 1 петли — 1 капли) в среду с 5% хлористого магния, рассчитывая, что накопившиеся к тому времени в первой магниевой среде сальмонеллы без вреда вынесут повышенную концентрацию де-гидранта. Изучена возможность различных видов микроорганизмов развиваться на такой среде. На последней развивались только сальмонеллы, рост остальных микроорганизмов был заторможен. Однако повышения эффективности этой модификации в натурных условиях мы не наблюдали.
При исследовании 13 проб речной воды «экспедиционным» методом сальмонеллы выделены в 76,92% случаев, дополнительный пересев в 5% хлористо-магниевую среду не увеличил высеваемости сальмонелл, хотя несколько повысились индексы (усредненные индексы ко всем пробам составляли 150,9 и 165,14 соответственно).
В дальнейшем при исследовании 13 проб воды реки была использована комбинация методов: воду исследовали «экспедиционным» методом и методом фильтрации через вату. Параллельно из каждого флакона через 24 ч инкубации посевов при 37° производили дополнительный пересев в 5% хлористо-магниевую среду. Каждым методом сальмонеллы были выделены в 10 пробах, или в 76,92% случаев, тогда как в комплексе оба использованных метода дали увеличение высеваемости сальмонелл по сравнению с «экспедиционным» методом до 92,3%. Увеличение высеваемости сальмонелл при применении комплекса методов мы объясняем повышением объема исследуемых проб до 2 л (каждым методом исследовали пробу воды в объеме 1 л). Преимущество использования суммы данных методов статистически достоверно (ошибка разности равна 95%). Дополнительный пересев в 5% хлористо-магниевую среду при использовании метода фильтрации через вату повысил индексы сальмонелл в 3 раза (с 14,59 до 47,76).
Таким образом, аэрация магниевой среды, увеличение сроков и температуры инкубации и предварительное подращивание в лактозном бульоне не повышают высеваемости сальмонелл. При фильтрации воды через вату при применении вторичного пересева в 5% хлористо-магниевую среду может быть достигнуто увеличение индексов сальмонелл. Исследования показывают, что не всегда данные эксперимента подтверждаются в натурных условиях; при отработке методических приемов обязательно проводить экспериментальные и натурные исследования (на основе определения оптимального температурного режима и применения 5% хлористо-магниевой среды).
ЛИТЕРАТУРА. Анатолий С. А. Различия в размножении микробов кишечной и кокковой групп в жидких средах при усиленной аэрации. — «Ж- микробиол.», 1958, № 2, с. 135. — К а л и н а Г. П., Ш и г а"н о в а В. Л. Среда с хлористым магнием для обнаружения сальмонелл. — «Лабор. дело», 1972, №4, с. 240—243. — Alio г d J., К n i g h t N. Applicability of aeration and delayed addition of selenite to the isolation of salmonellae. — «Appl. Microbiol.», 1969, v. 18, p. 1060—1064.—Chen С. M., Boyle W., Goeppert I. Rapid quantitative method for salmonella detection in polluted waters. — Ibid., 1971, v. 21, p. 662. — D e a k z W. Kulonbozo salmonella dusitasi el arasok alkalmazasa a higienes mikrobiologia teruleten. — «Egeszsegtudomany», 1970, v. 14, p. 342—348. — Harvey R., P h i 1 1 i p s W. An environmental servey of bakehouses and abattoirs for salmonella.—«J. Hyg. (London)», 1961, v. 59, p. 93—103. — Y a meson J. A discussion of the dynamics of Salmonella enrichment. — Ibid., 1962, v. 60, p. 193—207. — MontfortJ., Thatcher F. Comparison of four methods of isolat-hing Salmonella from foods and elaboration of a preferred procedure. — «J. Food. Sci»., 1961, v. 26, p. 517—519. -Mossel D. A. A., RattoM. A. Rapid detection of sub-lethally impaired cell of enterobacteriaceae in dried foods. — «Appl. Microbiol.», 1970, v. 20, p. 273—275. — Nabbut Nassim H. Elevated temperature technique for the isolation of Salmonallas from sewage and human faeces.—«J. Hyg. (London)», 1973, v. 71, p. 49—54.— North W. R. Lactose pre—enrichment method for isolation of Salmonella from dried egg albumen. Its use in a survey of commercially produced albumen. — «Appl. Microbiol.», 1961, v. 9, p. 188—195. — S p i n i D. Elevated-temperature technique for the isolation of Salmonella from stream. — «J. appl. Microbiol.», 1971, v. 21, p. 662.
Поступила 20/Ш 1975 r.
