CC BY
11
врачами Алтая, достойно быть отмеченным в анналах истории отечественной медицины.
Поступила 19/VI 1975 г.
Методы исследования
УДК 614.7-07:612.82-087.5
С. М. Павленко, Л. В. Кудрин
СРАВНИТЕЛЬНЫЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ДАННЫЕ ИЗУЧЕНИЯ СОСТОЯНИЯ ЦЕНТРАЛЬНОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ МЕТОДОМ УСЛОВНЫХ РЕФЛЕКСОВ И МЕТОДОМ СУММАЦИОННО-ПОРОГОВОГО ПОКАЗАТЕЛЯ ПРИ ГИГИЕНИЧЕСКОМ НОРМИРОВАНИИ
Московский научно-исследовательский институт гигиены им. Ф. Ф. Эрнсмана
При гигиеническом нормировании токсических веществ в различных объектах внешней среды в токсикологическом эксперименте широко используются методы изучения центральной нервной системы.
В хроническом токсикологическом эксперименте наиболее часто применяется метод условных рефлексов, а также метод суммационно-порогово-го показателя (СПИ). На основании опыта работ многих исследователей установлено, что оба метода являются чувствительным показателем, хотя и характеризуют развитие интоксикации в центральной нервной системе на разных уровнях: условные рефлексы — на уровне коры головного мозга, а СПИ преимущественно — подкорки.
Метод условных рефлексов имеет ряд преимуществ перед другими методами изучения функционального состояния коры головного мозга. Он высокочувствителен, доступен, дает возможность изучать как возбудительные, так и тормозные процессы в нервных клетках (Н. С. Правдин; Н. В. Лазарев, и др.). Наиболее широко метод условных рефлексов используется в практике гигиенического нормирования допустимого содержания химических загрязнений в водоемах (С. Н. Черкинский и соавт., 1962, 1974). Но метод этот трудоемок.
Чувствительность различных методов исследования суммации пороговых импульсов также достаточно высока для веществ, влияющих на высшие отделы центральной нервной системы (В. В. Закусов, и др.). Наибольшее распространение получил метод СПП (С. В. Сперанский). Однако его чувствительность по сравнению с методом условных рефлексов в достаточной степени еще не оценена.
Учитывая это, мы провели работу, в задачу которой входило сравнительное изучение изменений в центральной нервной системе при воздействии одних и тех же доз вещества в хроническом опыте с помощью метода СПП и условных рефлексов. Для эксперимента было выбрано вещество, оказывающее наркотическое действие на центральную нервную систему,— флотореагент Т-66, в состав которого входят диоксановые спирты.
Условные рефлексы изучали по общепринятой двигательно-пищевой методике в камере системы Л. И. Котляревского с автоматической регистрацией показателей условнорефлекторной деятельности. Использовали метод с выработкой условных рефлексов и формированием стереотипа на фоне интоксикации. Как показали исследования В. Г. Лаппо, Я. С. Дво-скнна и др., выработка условных рефлексов на фоне интоксикации является более чувствительным методом, чем ранее применявшаяся классиче-
екая методика изучения условиорефлекторной деятельности крыс с хорошо закрепленным стереотипом. С учетом этих данных выработка условных рефлексов была начата на 4-м месяце хронического опыта.
Исследование СПИ проводили по методу С. В. Сперанского в модификации С. М. Павленко. В этой модификации изменения касались регистрации характера двигательной реакции у крыс и их размещения на электродах. Для этого была сделана деревянная приставка к прибору, на которой располагались 2 пластинчатых электрода, соединяющихся с импульсным стимулятором. Опыт проводят следующим образом. Крысу, придерживая рукой, ставят в вертикальном положении. Ее задние лапы помещают на электроды, сверху которых кладут марлю, смоченную физиологическим раствором. Ток подают при переключении клеммы на переменный ток. Подачу его прекращают после того, как животное поднимает одну из лап. При этом регистрируют наблюдаемое в тот момент напряжение (в вольтах). Метод СПП менее трудоемок.
Исследования по сравнительной оценке 2 методов изучения состояния центральной нервной системы проводили при пероральном воздействии флотореагента Т-66 в 7-месячных опытах. В опыт взяли 56 крыс, которых разбили на 4 группы по 14 особей (на 7 животных применялся метод СПП, на 7 — метод условных рефлексов). Животные одной группы служили контролем, они получали воду. Остальные подвергались ежедневному перораль-ному воздействию флотореагента Т-66 в дозах 1, 0,1 и 0,01 мг/кг.
СПП у крыс исследовали 2 раза до начала хронического опыта и 14 раз в течение его.
Как можно судить по полученным материалам, от наибольшей из исследованных доз (1 мг/кг) флотореагента Т-66 (1-я группа животных) систематически отмечались достоверные изменения СПП, выраженные в условных единицах (15,6±0,48—16,8±0,43 в опыте, 10,6±0,36—12,4±0,61 — в контроле; Р<.0,05 и <0,02). Эти изменения наблюдались 9 раз в течение опыта на 1, 2, 3 и 5-м месяцах. Кроме того, 3 раза они были на границе достоверности (Р=0,05).
От дозы флотореагента Т-66, равной 0,1 мг/кг (2-я группа животных), зарегистрировано достоверное увеличение СПП 3 раза на протяжении опыта, на 1-м и 5-м месяцах (15,3±0,36—14,8±0,62 в опыте, 10,6±0,3—12,4± ±0,38 — в контроле; Р<0,05); 1 раз увеличение СПП было на границе достоверности. Все выявленные изменения носили однонаправленный характер и выражались в увеличении СПП. Это свидетельствует о том, что флотореагент Т-66 оказывает некоторое тормозящее влияние на высшие отделы центральной нервной системы.
Флотореагент Т-66 при длительном ежедневном введении его в желудок белым крысам в наименьшей из испытанных доз (0,01 мг/кг), т. е. животным 3-й группы, не оказал влияния на организм подопытных животных.
Необходимо отметить, что при изучении действия яда на центральную нервную систему методом СПП на 1-ми 2-м месяцах, а также в конце эксперимента была применена функциональная проба — анодизация головного мозга. Согласно данным одного из нас (С. М. Павленко, 1973), метод ано-дизации головного мозга является специфической функциональной нагрузкой на центральную нервную систему, позволяющей выявлять скрытое действие токсических веществ — наркотиков. При действии флотореагента Т-66 в дозе 1 и 0,1 мг/кг на фоне анодизации головного мозга изменения СПП обнаружились уже в начале 1-го и 2-го месяцев опытов. Так, у животных 1-й группы на 1-м месяце исследования при анодизации установлено выраженное увеличение СПП (22,6±0,36 в опыте и 12,2±0,41 в контроле; Р<0,01). На 2-м месяце СПП составлял 19,8±0,26 в опыте и 13,6±0,34 в контроле (Р<0,02). У животных 2-й группы также зафиксировано действие яда на фоне анодизации головного мозга (21,2±0,28 в опыте и 15,1± ±0,52 в контроле; Р<0,01). У животных 3-й группы при применении функциональной нагрузки действие ядра не выявлялось (15,2±0,38 в опыте
3 Гигиена и санитария К> 8
65
и 14,6±0,42 в контроле; Р>0,05). Как видно из приведенных данных, чувствительность метода СПП резко возрастает при применении специфической функциональной нагрузки.
Таким образом, доза флотореагента Т-66, равная 1 мг/кг, является действующей дозой, доза 0,1 мг/кг — пороговой, а доза 0,01 мг/кг — недействующей по влиянию на нервную систему, регистрируемому по СПП.
На 4-м месяце хронического опыта у 7 других животных каждой группы была начата выработка условных рефлексов на звонок и свет. Положительные рефлексы на эти сигналы были выработаны и закреплены, после чего была образована и закреплена дифференцировка. В конце опыта произведено угашение, а затем восстановление условного рефлекса на звонок.
Показано, что у животных, получавших флотореагент в дозе 1 мг/кг, наблюдаются довольно выраженные нарушения условнорефлекторной деятельности, т. е. усиление процессов торможения в виде удлинения сроков закрепления условных рефлексов на звонок и свет. Имеются также нарушения в скорости закрепления дифференцировки и угашении условного рефлекса. У крыс, получавших флотореагент в дозе 0,1 мг/кг, установлены те же изменения, что и в предыдущей группе животных, но они были выражены меньше. Выявлена статистически достоверная разница по сравнению с контролем в скорости закрепления условных рефлексов на звонок и свет и при угашении условного рефлекса на звонок. У животных, получавших флотореагент в дозе 0,01 мг/кг, никаких изменений условных рефлексов не обнаружено. Эту дозу вещества можно считать недействующей.
Следовательно, с помощью метода условных рефлексов установлено, что доза 1 мг/кг является действующей, доза 0,1 мг/кг — пороговой и доза 0,01 мг/кг — безвредной для организма подопытных животных. Аналогичными были данные изучения сравнительной чувствительности обоих методов при действии других веществ (четыреххлористого углерода, метилового и бутилового эфира метакриловой кислоты, формальдегида).
Выводы
1. Сравнительное изучение состояния центральной нервной системы белых крыс методом условных рефлексов и СПП в хроническом эксперименте показало, что метод СПП может быть применен в качестве показателя функционального состояния центральной нервной системы экспериментальных животных.
2. С помощью одного и другого метода исследования центральной нервной системы удалось выявить близкие уровни доз вещества (действующие, пороговые и недействующие).
3. Чувствительность метода СПП резко возрастает при применении специфической функциональной нагрузки — анодизацни головного мозга.
4. Метод условных рефлексов более информативный, чем метод СПП, и более специфичен для клеток коры головного мозга. С его помощью удается получить большую информацию о состоянии не только раздражительного, но и тормозного процесса в центральной нервной системе, а также о развитии в головном мозге фазовых состояний.
Отсюда следует, что метод условных рефлексов имеет преимущества перед методом СПП, так как с его помощью удается установить функциональное состояние ряда процессов в деятельности центральной нервной системы.
ЛИТЕРАТУРА. ДвоскинЯ. с. — «Гиг. и сан.», 1961, № 10, с. 41—47. — Закусов В. В. — «Физиол. ж. СССР», 1939, т. 26, № 6, с. 668. —Лазарев Н. В. Методы исследования порогового действия токсических веществ на центральную нервную систему. Л., 1954. — Лаппо В. Г. — «Учен, записки Московского научно-исслед. ин-та гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана», 1960, № 3, с. 29—31. — Павленко С. М. — В кн.: Санитарно-токсикологические методы исследования. М., 1975, с. 2—4; 4—8. — Па в-л е н к о С. М. — «Гиг. и сан.», 1973, № 8, с. 71—74. —Правдин Н. С. Методика
•малой токсикологии промышленных ядов. М., 1947. — Сперанский С. В. — «Фар" макол. и токсикол.», 1965, Ns 1, с. 123. — ЧеркинскийС. Н., Тугарино" в а В. Н. — В кн.: Санитарная охрана водоемов от загрязнения промышленными сточны" ми водами. Вып. 5, М., 1962, с. 399. — ЧеркинскийС. Н., Ф р и д л я н д С. А,-К а г а н Г. Э. — «Гиг. и сан.>, 1974, № 1, с. 14.
Поступила 26/IX 1975 г.
УДК 614-777-078:576.851.49.07
Е. К■ Гипп
ОЦЕНКА РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДОВ ВЫДЕЛЕНИЯ САЛЬМОНЕЛЛ ИЗ ВОДЫ ПОВЕРХНОСТНЫХ ВОДОЕМОВ
¿Московский научно-исследовательский институт гигиены им. Ф. Ф. Эрнсмана
Эффективность выделения сальмонелл из объектов внешней среды в значительной степени была повышена после внедрения в практику эффективных сред накопления (тетратионатной среды Кауфмана, селенитовой среды Лейфсона и магниевой среды Раппапорта, Конфорти и Навон).
Г. П. Калиной и В. Л. Шигановой (1972) была разработана модификация среды Раппапорта, Конфорти и Навон, которая успешно используется для выделения сальмонелл из объектов внешней среды, в том числе и из воды поверхностных водоемов. Однако отрицательный результат исследований при применении указанных сред не "всегда свидетельствует о безусловном отсутствии сальмонелл в изучаемом объекте.
В последнее время предложены различные методы, способствующие повышению высеваемости сальмонелл. Помимо посева воды дробными порциями и увеличения объема исследуемых проб, к ним относятся аэрация питательного субстрата (Alford и Knight; Mossel и Ratto; С. А. Анатолий), инкубация посевов при повышенной температуре (Harvey и Thomson; Yameson; Deaks; Spino; Cheng и соавт.; Nabbut Nassim), увеличение сроков инкубации (Harvey и Philips; Taylor) и предварительное подращивание посевов (North; Montford; Galton и соавт.).
Нашей целью явилась апробация перечисленных методов исследования на магниевой среде накопления. В экспериментальных и натурных условиях изучено влияние аэрации магниевой среды на высеваемость сальмонелл. Аэрирование проводили с помощью шуттель-аппарата, помещенного в термостат при 37° в течение первых 5 ч инкубации посевов. Были взяты представители разных групп сальмонелл по схеме Кауфмана—Уайта: S. typhi murium, S. derby, S. newport и S. typhi. В экспериментальных условиях высевы производили сразу после внесения взвеси культур, через 2, 4, 6, 8, 24, 48 и 72 ч инкубации посевов при 37°. Установлено, что аэрация магниевой среды не увеличивала концентрации сальмонелл по сравнению с контролем (посевы этих же культур, находящиеся в стационарном положении при тех же условиях) независимо от сроков инкубации посевов. Экспериментальные данные подтверждены в натурных условиях.
Следующим этапом наших исследований явилось изучение влияния повышенной температуры инкубации посевов. В опыт были взяты микроорганизмы, наиболее часто вырастающие при посеве воды в магниевую среду накопления: Prot. mirabilis, Ent. aerogenes, Kl. aerogenes, Esch. coli, S. typhimurium, S. anatum, S. typhi. Все культуры выделены из речной воды и обладали типичными биохимическими свойствами. S. typhi получена из сальмонеллезного центра (№ 1049).
После приготовления ряда децимальных разведений посевы инкубировали при 37 и 43°, а также при комбинации температур (первые 5 ч при 43°, после чего продолжали инкубацию при 37°). Учитывали наличне роста в магниевой среде непосредственно сразу после заражения, через 8 и 24 ч инкубации. При 43° не происходило развития Prot. mirabilis, Ent. aerogenes, Kl. aerogenes и S. typhi, тогда как на развитие Esch. coli эта тем-
3'
67
