CC BY
11
86
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
проточной цитометрии с использованием клеток, гипер-экспрессирующих антиген HER2 — SK-BR-3. Оценивалось связывание меченых анти-HER2-антител с клетками SK-BR-3, предварительно обработанных анти-HER2-фи-тоантителами или трастузумабом.
результаты и заключение. В данной работе нами показано, что антитела, экспрессированные в Nicotiana bentha-miana, не уступают аналогам, полученным из клеток млекопитающих, в связывании антигена HER2 на поверхности мембран клеток SK-BR-3. Полученные нами анти-НЕК2-фитоантитела ингибируют связывание трастузума-ба с эпитопом IV субдомена рецептора HER2, как тра-стузумаб ингибирует связывание фитоантител. Обобщая данные проведенных экспериментов, можно сделать вывод о том, что полученные анти-НЕК2-фитоантитела связывают тот же эпитоп, что и трастузумаб.
А.И. Щербаков1, Е.Н. Кособокова1, М.В. Пинюгина1, Е.В. Шешукова2, В.С. Косоруков1
аффинные свойства AHTИ-HER2-AHTИTEЛ, полученных из растительного источника
ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия;
2НИИФХБ им. А.Н. Белозерского МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
введение. Рецептор HER2 является важной мишенью противоопухолевой терапии при лечении рака молочной железы (РМЖ). В настоящее время в клинической практике применяют препарат на основе анти-НЕК2-монокло-нальных антител — трастузумаб. Использование тра-стузумаба снижает риск развития отдаленных метастазов и увеличивает выживаемость пациентов. Трастузумаб производится в культуре животных клеток и стоит достаточно дорого. Альтернативой может быть получение рекомби-нантных лекарственных препаратов, в частности терапевтических антител, в растениях методом транзиторной экспрессии.
Цель исследования. Сравнение специфического связывания с антигеном HER2 и с IV субдоменом рецептора НЕК2-рекомбинантных антител, полученных классическим способом в культуре клеток и полученных в растительной биомассе.
материалы и методы. Фитоантитела получали в листовой пластине Nicotiana benthamiana методом транзиторной экспрессии. Для внедрения вирусных векторов в клетки листьев Nicotiana benthamiana применяли методику агро-инфекции. Инфицирование осуществляли культурами клеток штамма A. tumefaciens GV-3101, которые были предварительно трансформированы конструкциями VTM-PT-HC и PVX-PT-LC. Эти конструкции обеспечивали экспрессию тяжелых и легких цепей рекомбинантного анти-НЕК2-антитела в клетках растения. Собранные листья гомогенизировали и подвергали экстракции. Затем экстракт фильтровали и очищали хроматографическими методами. Контроль и оценка уровня экспрессии анти-НЕК2-фитоантител осуществлялись с помощью метода ИФА. Для исследования активности полученных анти-НЕК2-фитоантител использовали иммуноцитохимический тест. Работу проводили с НЕК2-положительными клетками
РМЖ SK-BR-3. Специфичность связывания тестировали с помощью кроличьих антител против антител человека, конъюгированных с пероксидазой хрена. Для оценки биологической активности анти-HER2-фитоантител был использован метод проточной цитофлуориметрии. Оценивалось связывание анти-HER2-антител с клетками SK-BR-3. Для анализа связывания полученных анти-НЕК2-фитоантител с IV субдоменом внеклеточного домена рецептора НЕЯ2 была разработана методика анализа конкурентного связывания с антигеном НЕЯ2 между анти-НЕК2-фитоантителами и трастузумабом. Эксперимент осуществляли методом проточной цитометрии с использованием клеток, гиперэкспрессирующих антиген НЕЯ2, — SK-BR-3. Оценивалось связывание меченых анти-НЕК2-антител с клетками SK-BR-3, обработанными анти-НЕК2-фитоантителами или трастузумабом.
результаты. В данной работе нами показано, что антитела, экспрессированные в Nicotiana benthamiana, не уступают аналогам, полученным из клеток млекопитающих, в связывании антигена НЕЯ2 на поверхности мембран клеток SK-BR-3. Полученные нами анти-НЕК2-фитоан-титела связываются с IV субдоменом рецептора НЕЯ2.
Заключение. Обобщая данные проведенных экспериментов, можно сделать вывод о том, что полученные анти-НЕК2-фитоантитела функционально соответствуют тра-стузумабу.
Т.Г. Щербатюк, Е.С. Плеханова, И.А. Чернигина
оценка повреждения днк лейкоцитов крови после фотодинамической терапии с локальным введением фотосенса
ФГБОУВО НижГМА Минздрава России, Нижний Новгород, Россия
введение. Известно, что генерируемыми продуктами действия фотодинамической терапии (ФДТ) являются активные формы кислорода, в частности синглетный кислород, который обладает цитотоксическим и мутагенным действием, повреждая органеллы клетки и ДНК.
Цель исследования. Оценить уровень повреждений ДНК в лейкоцитах цельной крови организма-опухолено-сителя после ФДТ при локальном введении фотосенсибилизатора.
материалы и методы. Белые нелинейные крысы возрастом 3 мес были разделены на 3 группы: 1) «интактные» — здоровые животные (п = 10), 2) «без воздействия» — живот-ные-опухоленосители с подкожно трансплантированной карциномой почки РА без лечения (п = 10) и 3) «ФДТ» — жи-вотные-опухоленосители, которым проводили фотодинамическое воздействие (п = 10). В 2 последних группах выделили подгруппы с исходными объемами опухоли до 0,3 см3 (А) и >0,5 см3 (В). При ФДТ интратуморально вводили 0,3 % раствор препарата фотосенс (ФГУП «ГНЦ «НИОПИК», Россия) и в течение 6—12 ч после инъекции воздействовали светодиодным лазером (X = 660 ± 10 нм, Р = 100 мВт/см2, плотность энергии 60 Дж/см2). Всего проведено 2 сеанса ФДТ на 15-е и 19-е сутки после перевивки. Противоопухолевый эффект оценивали по коэффициенту абсолютного прироста опухоли (К). Определение спонтанного уровня повреждений ДНК лейкоцитов цельной крови лабораторных животных
Спецвыпуск / том 17 / 2018
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 87
проводили согласно протоколу метода ДНК-комет (А.И. Чер- материалы и методы. Работа выполнена на половозре-нигина и др., 2016). Обработка данных осуществлялась с ис- лых кроликах-самцах породы шиншилл. Активность белка-пользованием методов непараметрической статистики. транспортера оценивали по фармакокинетике его маркер-результаты. В опытной группе «без воздействия» спон- ного субстрата — фексофенадина. До начала исследования, танная регрессия карциномы не установлена. Коэффици- а также после курсового введения изучаемых веществ кро-ент абсолютного прироста опухоли (К) в подгруппе В был ликам перорально вводили фексофенадин в дозе 67,5 мг/кг статистически значимо выше 7,57 [3,57; 11,63], чем в под- и оценивали его фармакокинетику. Экспрессию Pgp в пе-группе А 1,29 [1,20; 1,37] (р = 0,011). При этом уровень чени и тощей кишке оценивали иммуногистохимически. спонтанных повреждений ДНК в лейкоцитах цельной кро- Мексидол вводили перорально в дозе 50 мг/кг 3 раза в день ви крыс с исходно большими объемами опухоли (В) в течение 10 дней, ноопепт — перорально в дозе 10 мг/кг (%ТДНК = 5,65 [3,55; 6,95]) в 2 раза превышал значение 3 раза в день в течение 14 дней, афобазол — перорально у животных с исходно меньшими объемами опухоли (А) в дозе 3,8 мг/кг 3 раза в день в течение 14 дней. (%ТДНК = 2,45 [2,36; 2,75]) (p = 0,044). При корреляцион- результаты. Введение ноопепта не влияло на фармако-ном анализе выявлена прямая зависимость между коэф- кинетику фексофенадина, что свидетельствует о том, фициентом прироста опухоли и уровнем спонтанного по- что ноопепт не действует на активность белка-транспор-вреждения ДНК (г = 0,85 (p = 0,006)). После проведения тера. Также не было выявлено изменений экспрессии Pgp ФДТ при локальном введении препарата фотосенс полная в печени и почках под влиянием ноопепта. Введение мек-регрессия трансплантированной неоплазии (К = —1) на- сидола в течение 10 дней кроликам вызывало достоверное блюдалась только у 50 % крыс как в подгруппе А, так (p <0,05) увеличение Cmax фексофенадина на 47,0 %, AUC0 24 — и в подгруппе В. У животных, оставшихся резистентными на 86,5 %, что свидетельствует о том, что мексидол яв-к фотодинамическому воздействию, наблюдалось более ляется ингибитором Pgp. В то же время экспрессия бел-интенсивное увеличение объемов карциномы при исходно ка-транспортера достоверно не изменялась. Введение малых и незначительное увеличение — при исходно боль- афобазола в течение 14 дней сопровождалось повышением ших размерах опухоли по сравнению с животными-опухо- AUC0 24 фексофенадина на 105,1 % и снижением его обще-леносителями без воздействия. После ФДТ уровень спон- го клиренса на 56,8 % (p <0,05), что является признаком танного повреждения ДНК в лейкоцитах крови крыс ингибирующего действия препарата на активность Pgp. с исходно малыми размерами опухолевого узла возрастал При этом отмечалось снижение экспрессии Pgp в печени. в 3 раза по сравнению с животными без терапии (p = 0,021) Заключение. Мексидол и афобазол являются ингиби-и не изменялся у животных с исходно большими объемами торами Pgp, а ноопепт не влияет на активность белка-тран-опухоли. спортера. Заключение. Таким образом, спонтанный уровень повреждений ДНК в лейкоцитах крови, регистрируемый ще- Б.К. Эрназарова1, А.Е. Бармашов2, Т.Н. Апрышко2, лочной версией метода ДНК-комет, можно использовать В.В. Поройков3 для косвенной оценки интенсивности роста злокачествен- ГликоЗЩЦнЫЕ ПроиЗводныЕ мочЕвин ного новообразования и ответа опухоли на ФДТ с локаль- кАк Потенциальные противоопухолевые ным введением фотосенсибилизатора. соединения 1Жалал-Абадский государственный университет, Жалал-А.В. Шулькин1, Н.С. Косицына2, И.В. Черных1, Абад, Кыргызстан; П.Ю. Мыльников1, Е.Н. Якушева1 2ФГБУ«НМИЦонкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава влияние отечественных России, Москва, Россия; нЕйроПротЕкторов нА Активность 3ФГБНУ«ИБМХим. В.Н. Ореховича», Москва, Россия и экспрессию белка-транспортера введение. В настоящее время остается актуальным по-р-ГликоПротЕинА иск новых веществ с противоопухолевой активностью сре-ФГБОУ ВО РязГМУ им. акад. И.П. Павлова» ди различных классов химических соединений. Минздрава России, Рязань, Россия; Цель исследования. Оценить методами скрининга 2ГБУРО ОКОД, Рязань, Россия in silico и in vitro возможность создания новых противоопу-введение. Р-гликопротеин (Pgp) — АТФ-зависимый холевых лекарств на основе новых гликозидных производ-белок-транспортер, участвующий в выведении химиотера- ных мочевин. певтических препаратов — его субстратов (колхицин, то- материалы и методы. Использована компьютерная потекан) из опухолевых клеток. Повышенную активность система PASS, разработанная в ИБМХ им. В.Н. Ореховича, данного белка связывают с развитием множественной ле- прогнозирующая 6400 видов биологической активности карственной устойчивости опухолей. Pgp также обнаружен на основе сравнения структурных формул новых химиче-в гепатоцитах, энтероцитах кишечника, эпителии почеч- ских соединений с формулами из обучающего массива, ных канальцев, эндотелии гистогематических барьеров, где содержащего информацию о строении и активности он играет важную роль в фармакокинетике лекарственных 313 345 изученных ранее химических соединений. Прогно-препаратов. Ряд веществ (индукторы) могут повышать ак- зирование биологической активности проведено для тивность Pgp, а ряд препаратов (ингибиторы) ее снижают. 57 виртуальных соединений из класса гликозидных произ-Цель исследования. Изучить влияние мексидола, афо- водных мочевин, представленных Б.К. Эрназаровой (ка-базола и ноопепта на активность и экспрессию Pgp. федра медико-биологических дисциплин медицинского
Спецвыпуск / том 17 / 2018 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
