Аффинные свойства анти-HER2-антител, полученных из растительного источника Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

86

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

проточной цитометрии с использованием клеток, гипер-экспрессирующих антиген HER2 — SK-BR-3. Оценивалось связывание меченых анти-HER2-антител с клетками SK-BR-3, предварительно обработанных анти-HER2-фи-тоантителами или трастузумабом.

результаты и заключение. В данной работе нами показано, что антитела, экспрессированные в Nicotiana bentha-miana, не уступают аналогам, полученным из клеток млекопитающих, в связывании антигена HER2 на поверхности мембран клеток SK-BR-3. Полученные нами анти-НЕК2-фитоантитела ингибируют связывание трастузума-ба с эпитопом IV субдомена рецептора HER2, как тра-стузумаб ингибирует связывание фитоантител. Обобщая данные проведенных экспериментов, можно сделать вывод о том, что полученные анти-НЕК2-фитоантитела связывают тот же эпитоп, что и трастузумаб.

А.И. Щербаков1, Е.Н. Кособокова1, М.В. Пинюгина1, Е.В. Шешукова2, В.С. Косоруков1

аффинные свойства AHTИ-HER2-AHTИTEЛ, полученных из растительного источника

ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия;

2НИИФХБ им. А.Н. Белозерского МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия

введение. Рецептор HER2 является важной мишенью противоопухолевой терапии при лечении рака молочной железы (РМЖ). В настоящее время в клинической практике применяют препарат на основе анти-НЕК2-монокло-нальных антител — трастузумаб. Использование тра-стузумаба снижает риск развития отдаленных метастазов и увеличивает выживаемость пациентов. Трастузумаб производится в культуре животных клеток и стоит достаточно дорого. Альтернативой может быть получение рекомби-нантных лекарственных препаратов, в частности терапевтических антител, в растениях методом транзиторной экспрессии.

Цель исследования. Сравнение специфического связывания с антигеном HER2 и с IV субдоменом рецептора НЕК2-рекомбинантных антител, полученных классическим способом в культуре клеток и полученных в растительной биомассе.

материалы и методы. Фитоантитела получали в листовой пластине Nicotiana benthamiana методом транзиторной экспрессии. Для внедрения вирусных векторов в клетки листьев Nicotiana benthamiana применяли методику агро-инфекции. Инфицирование осуществляли культурами клеток штамма A. tumefaciens GV-3101, которые были предварительно трансформированы конструкциями VTM-PT-HC и PVX-PT-LC. Эти конструкции обеспечивали экспрессию тяжелых и легких цепей рекомбинантного анти-НЕК2-антитела в клетках растения. Собранные листья гомогенизировали и подвергали экстракции. Затем экстракт фильтровали и очищали хроматографическими методами. Контроль и оценка уровня экспрессии анти-НЕК2-фитоантител осуществлялись с помощью метода ИФА. Для исследования активности полученных анти-НЕК2-фитоантител использовали иммуноцитохимический тест. Работу проводили с НЕК2-положительными клетками

РМЖ SK-BR-3. Специфичность связывания тестировали с помощью кроличьих антител против антител человека, конъюгированных с пероксидазой хрена. Для оценки биологической активности анти-HER2-фитоантител был использован метод проточной цитофлуориметрии. Оценивалось связывание анти-HER2-антител с клетками SK-BR-3. Для анализа связывания полученных анти-НЕК2-фитоантител с IV субдоменом внеклеточного домена рецептора НЕЯ2 была разработана методика анализа конкурентного связывания с антигеном НЕЯ2 между анти-НЕК2-фитоантителами и трастузумабом. Эксперимент осуществляли методом проточной цитометрии с использованием клеток, гиперэкспрессирующих антиген НЕЯ2, — SK-BR-3. Оценивалось связывание меченых анти-НЕК2-антител с клетками SK-BR-3, обработанными анти-НЕК2-фитоантителами или трастузумабом.

результаты. В данной работе нами показано, что антитела, экспрессированные в Nicotiana benthamiana, не уступают аналогам, полученным из клеток млекопитающих, в связывании антигена НЕЯ2 на поверхности мембран клеток SK-BR-3. Полученные нами анти-НЕК2-фитоан-титела связываются с IV субдоменом рецептора НЕЯ2.

Заключение. Обобщая данные проведенных экспериментов, можно сделать вывод о том, что полученные анти-НЕК2-фитоантитела функционально соответствуют тра-стузумабу.

Т.Г. Щербатюк, Е.С. Плеханова, И.А. Чернигина

оценка повреждения днк лейкоцитов крови после фотодинамической терапии с локальным введением фотосенса

ФГБОУВО НижГМА Минздрава России, Нижний Новгород, Россия

введение. Известно, что генерируемыми продуктами действия фотодинамической терапии (ФДТ) являются активные формы кислорода, в частности синглетный кислород, который обладает цитотоксическим и мутагенным действием, повреждая органеллы клетки и ДНК.

Цель исследования. Оценить уровень повреждений ДНК в лейкоцитах цельной крови организма-опухолено-сителя после ФДТ при локальном введении фотосенсибилизатора.

материалы и методы. Белые нелинейные крысы возрастом 3 мес были разделены на 3 группы: 1) «интактные» — здоровые животные (п = 10), 2) «без воздействия» — живот-ные-опухоленосители с подкожно трансплантированной карциномой почки РА без лечения (п = 10) и 3) «ФДТ» — жи-вотные-опухоленосители, которым проводили фотодинамическое воздействие (п = 10). В 2 последних группах выделили подгруппы с исходными объемами опухоли до 0,3 см3 (А) и >0,5 см3 (В). При ФДТ интратуморально вводили 0,3 % раствор препарата фотосенс (ФГУП «ГНЦ «НИОПИК», Россия) и в течение 6—12 ч после инъекции воздействовали светодиодным лазером (X = 660 ± 10 нм, Р = 100 мВт/см2, плотность энергии 60 Дж/см2). Всего проведено 2 сеанса ФДТ на 15-е и 19-е сутки после перевивки. Противоопухолевый эффект оценивали по коэффициенту абсолютного прироста опухоли (К). Определение спонтанного уровня повреждений ДНК лейкоцитов цельной крови лабораторных животных

Спецвыпуск / том 17 / 2018

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ