CC BY
17
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Таким образом, успешная имплантация при проведении программы ЭКО с применением аппликации СП происходит на фоне снижения содержания Treg периферической крови в день трансвагинальной пункции, возможно, обусловленной усилением миграции Treg в региональные лимфоузлы или матку. Изменения Т-клеточного звена иммунитета, в свою очередь, определяются цитоки-новым профилем СП, поступающей в репродуктивный тракт женщины. Необходимы дальнейшие исследования для подтверждения клинической значимости полученных результатов.
ВЛИЯНИЕ АНТИГИПЕРТЕНЗИВНОЙ ТЕРАПИИ НА ЭКСПРЕССИЮ L-СЕЛЕКТИНА И CX3CR1 ЛЕЙКОЦИТАМИ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БЕРЕМЕННЫХ ЖЕНЩИН С ГИПЕРТЕНЗИВНЫМИ РАССТРОЙСТВАМИ
Панова И.А., Кудряшова А.В., Рокотянская Е.А., Парейшвили В.В.
ФГБУ«Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н. Городкова» Министерства здравоохранения РФ, Иваново, Россия
Введение. Проведение адекватной антигипертензив-ной терапии в период беременности должно способствовать максимальному снижению общего риска сердечно-сосудистых и церебрально-сосудистых заболеваний в будущем, неблагоприятных перинатальных исходов. В настоящее время появляется все больше данных об ассоциации различных форм гипертензивных расстройств с развитием внутрисосудистой воспалительной реакции. Это определяет необходимость оценки влияния антиги-пертензивной терапии у беременных на функциональную активность клеток врожденного иммунитета, в том числе миграционную.
Цель. Оценить изменения в экспрессии L-селектина и рецептора фракталкина моноцитами и нейтрофилами у беременных женщин с артериальной гипертензией при различных видах антигипертензивной терапии.
Материалы и методы. Обследовано 55 женщин с артериальной гипертензией в сроке от 22 до 36 недель беременности: 1 группу составили 25 пациенток с существовавшей ранее АГ (код по МКБ-Х 010.0); 2 — 30 женщин с преэклампсией средней степени тяжести (код по МКБ-Х 014.0) и с ХАГ и присоединившейся ПЭ (код по МКБ-10 011). Группу контроля составили 50 женщин без АГ. Исследование проводилось до и на 5-е сутки после начала гипотензивной терапии. В каждой группе были выделены подгруппы: 1 — получавшие монотерапию (альфа2-адреномиметики), 2 — получавшие комбинацию препаратов (альфа2-адреномиметики, блокаторы кальциевых каналов и/или ß-адреноблокаторы). В периферической крови беременных определяли относительное содержание моноцитов и нейтрофилов экспресси-рующих рецептор фракталкина CX3CR1, а также молекулы L-селектина — CD62L.
Результаты. В группе женщин с ХАГ исходный уровень CD62L-позитивных клеток в популяциях моноцитов и нейтрофилов не отличался от показателей в контроль-
ной группе, но имел тенденцию к повышению в популяции нейтрофилов на 5 день лечения независимо от вида терапии. В популяции моноцитов в группе ХАГ только комплексная терапия определяла тенденцию к повышению уровня CD62L+ моноцитов. В группе с преэклампсией исходный уровень CD62L+ моноцитов и нейтрофилов был достоверно снижен по сравнению с показателями в контрольной группе. Проводимое лечение не оказывало значительного влияния на относительное содержание CD62L+ моноцитов, но определяло тенденцию к повышению уровня CD62L+ нейтрофилов при монотерапии и достоверно повышало данный показатель до нормативных значений при комбинированной терапии. Исходное содержание CX3CR1 клеток в группе ХАГ имело тенденцию к снижению в популяции моноцитов, и было достоверно сниженным в популяции нейтрофилов. В этой группе оба вида терапии не вызывали значимых изменений в содержании CX3CR1+ моноцитов и нейтрофилов. В группе с ПЭ до лечения уровень CX3CR1+ клеток был сниженным только в популяции нейтрофилов. Монотерапия при ПЭ определяла достоверное снижение уровня CX3CR1+ моноцитов и тенденцию к снижению в популяции нейтрофилов, в то время как комплексная терапия сочеталась с достоверным снижением содержания CX3CR1+ нейтрофилов и тенденцией к снижению в популяции моноцитов.
Заключение. Выбор антигипертензивного препарата для беременной женщины с учетом влияния на плацентарный кровоток, требует анализа всех плюсов и минусов предполагаемого лечения. Полученные результаты позволяют оценить воздействие терапии на процессы инициации воспаления, определяемые адгезией клеток к эндотелию сосудов и последующему хемотаксису. Известно, что элюция L-селектина под действием медиаторов воспаления позволяет лейкоцитам разорвать связь с клетками эндотелия и мигрировать в подлежащие ткани. Отмеченные нами изменения могли определяться противовоспалительным эффектом альфа2-адреномиметиков, приводящему к ослаблению адгезии нейтрофилов при всех формах гипертензивных расстройств у беременных и ослаблению хемотаксиса нейтрофилов и моноцитов при ПЭ. Применений комплексной терапии ПЭ позволяло проявляться позитивным эффектам, в максимальной степени. Таким образом, лучшее понимание ключевых моментов регуляции трансмиграции лейкоцитов может помочь в разработке персонифицированных схем лечения гипертензии у беременных.
ОЦЕНКА ИНДУКЦИИ РЕЦЕПТОРНОГО АПОПТОЗА У FAS-ЭКСПРЕССИРУЮЩИХ СПЕРМАТОЗОИДОВ
Плосконос М.В.
ФГБОУ ВО «Астраханский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ, Астрахань, Россия ФГБОУ ВО ВГУВТ «Каспийский институт морского и речного транспорта», Астрахань, Россия
Введение. Апоптозу, как фундаментальному процессу регулирования иммунной системы, принадлежит важная роль в регуляции сперматогенеза. Однако, недостаточно
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммунология репродукции Immunology of reproduction
сведений о факторах, вызывающих апоптоз половых клеток и, как следствие, нарушение фертильности. Известными маркёрами апоптоза являются белки мембраны клеток — рецептор Fas (CD95) и его лиганд FasL, через которые реализуется рецепторный (мембранный) механизм апоптоза. Мнение исследователей касаемо экспрессии Fas и FasL на поверхности зрелых эякуляторных сперматозоидов неоднозначно, что диктует необходимость дальнейших исследований в этом направлении. Кроме того, нет данных об индукции рецепторного апоптоза через Fas-рецептор на сперматозоидах человека.
Цель. Выявить экспрессию Fas-антигена на сперматозоидах мужчин разной фертильности и попытаться индуцировать апоптоз гамет при помощи рекомбинант-ного FasL.
Материалы и методы. Исследованы эякуляты 46 фер-тильных и 78 субфертильных мужчин. Определение на сперматозоидах Fas проводили меченными фикоэритри-ном (РЕ) моноклональными антителами CD95 (Caltag Lbs.), с последующей флуоресцентной микроскопией. Эякуляты, положительные по Fas, делили на две части: 1) отмытые сперматозоиды инкубировали 4 ч в среде В-2 с 5% СО2 при 37°С (контроль); 2) сперматозоиды инкубировали 4 ч при тех же условиях, только с добавлением 1 мг/мл рекомбинантного FasL (Kamiya Bi-omedical Company, USA) (опыт). После инкубации документировали апоптоз при помощи конъюгированного с флуорох-ромом Аннексина-V (AnV-FITC) и йодида пропидия (PI), подсчитывая количество (А^+/РГ)-сперматозоидов на флуоресцентном микроскопе МИКРОМЕД 3 ЛЮМ (Санкт-Петербург).
Результаты. Выявлено, что Fas-экспрессия на сперматозоидах фертильных мужчин наблюдалась почти в 90% случаев (у 41 из 46 мужчин), но количество (Fas+)-гамет оказалось менее 10%. У 53% обследованных субфертильных мужчин (у 41 из 78) более 10% сперматозоидов оказались Fas-положительными.
Далее эксперимент по индукции рецепторного апоп-тоза проводили с эякулятами мужчин, в которых выявлены (Fas+)-гаметы. После 4-часовой инкубации клеток с 1 мг/мл рекомбинантного FasL (опыт) изменение количества (А^+/РГ)-сперматозоидов по сравнению с контролем было стастистически не достоверно (р > 0,05).
Заключение. Таким образом, у сперматозоидов мужчин разной фертильности не удалось индуцировать ре-цепторный апоптоз. Вероятно, Fas-рецепторы на гаметах не активны или не функционируют после эякуляции, а экспрессия Fas-антигена произошла ещё в период сперматогенеза, и (Fas+)-клетки должны были быть устранены в процессе апоптоза, но по каким-либо причинам механизмы рецепторного апоптоза не были закончены, либо были отложены, либо функционировали неправильно.
Однако выявленные различия в экспрессии Fas-антигена на сперматозоидах фертильных и субфер-тильных мужчин могут представлять интерес для практической андрологии, так как позволят дополнить диагностический арсенал при исследовании мужской репродуктивной функции.
FAS-АНТИГЕН КАК ПОКАЗАТЕЛЬ КАЧЕСТВА СПЕРМАТОЗОИДОВ
Плосконос М.В.1, 2, Николаев А.А.1, Зульбалаева Д.Ф.3, Бондаренко С.К.3
1ФГБОУ ВО «Астраханский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ, Астрахань, Россия
2 ФГБОУ ВО ВГУВТ«Каспийский институт морского и речного транспорта», Астрахань, Россия
3 ГБУЗ Астраханской области «Центр охраны здоровья семьи и репродукции», Астрахань, Россия
Введение. Fas(CD95) — клеточный рецептор, по наличию которого судят о готовности клеток к Fas-индуцированному апоптозу. В мужском репродуктивном тракте функции Fas-рецепторно-лигандной системы заключаются в регуляции численности половых клеток на уровне сперматогенеза, в отслеживании разнообразных повреждений и сбоев в процессе сперматогенеза и обеспечении удаления повреждённых клеток, а также в выполнении защиты половых клеток от иммунологических реакций в яичках. При различных нарушениях сперматогенеза могут наблюдаться изменения экспрессии Fas-антигена на половых клетках, отражая активность патологических процессов, протекающих в мужской репродуктивной системе. Данные относительно корреляции между наличием Fas-рецептора на сперматозоидах и некоторыми функционально-морфологическими параметрами эякулятов мужчин, рекомендованными к исследованию Всемирной организацией здравоохранения в доступной нам литературе не встречались.
Цель. Обнаружить взаимосвязь между содержанием в эякулятах бесплодных мужчин Fas-положительных сперматозоидов и нарушениями некоторых функционально-морфологических параметров гамет.
Материалы и методы. Сперматозоиды выделяли из образцов эякулятов 78 субфертильных мужчин (возраст от 25 до 45 лет) отмыванием от семенной плазмы в фос-фатно-солевом буфере с рН 7,4. Для обнаружения Fas использовали моноклональные антитела (CD95-PE, IgG1, Caltag Lbs.), согласно инструкции производителя, с последующей флуоресцентной микроскопией. В качестве основных характеристик сперматозоидов были исследованы подвижность, морфология и концентрация сперматозоидов в эякуляте. Оценка взаимосвязи между исследуемыми показателями осуществлялась путём подсчёта коэффициента корреляции (г) Пирсона.
Результаты. Выявлена достоверная отрицательная корреляция между количеством сперматозоидов, экс-прессирующих Fas, и концентрацией гамет (г = -0,46; p < 0,001); подвижность сперматозоидов положительно коррелировала с содержанием в эякуляте (Fas+)-клеток (г = 0,31; p < 0,05); отмечена положительная корреляция количества (Fas+)-клеток и содержания в эякуляте патологических форм сперматозоидов (г = 0,4; p < 0,01).
Заключение. Представленные данные показывают, что содержание в эякулятах субфертильных мужчин сперматозоидов с маркёром апоптоза Fas коррелирует с концентрацией, подвижностью и дефектами морфологии гамет. Этот факт позволяет считать экспрессию рецептора апоп-тогенного сигнала Fas на клетках — фактором, снижающим качество сперматозоидов. Положительная корреляция между количеством (Fas+)-клеток и подвижностью гамет говорит о том, что часть тех сперматозоидов, которые оценены как активно подвижные у субфертиль-ных пациентов, маркированы Fas и предрасположены
