CC BY
17
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммунология репродукции Immunology of reproduction
сведений о факторах, вызывающих апоптоз половых клеток и, как следствие, нарушение фертильности. Известными маркёрами апоптоза являются белки мембраны клеток — рецептор Fas (CD95) и его лиганд FasL, через которые реализуется рецепторный (мембранный) механизм апоптоза. Мнение исследователей касаемо экспрессии Fas и FasL на поверхности зрелых эякуляторных сперматозоидов неоднозначно, что диктует необходимость дальнейших исследований в этом направлении. Кроме того, нет данных об индукции рецепторного апоптоза через Fas-рецептор на сперматозоидах человека.
Цель. Выявить экспрессию Fas-антигена на сперматозоидах мужчин разной фертильности и попытаться индуцировать апоптоз гамет при помощи рекомбинант-ного FasL.
Материалы и методы. Исследованы эякуляты 46 фер-тильных и 78 субфертильных мужчин. Определение на сперматозоидах Fas проводили меченными фикоэритри-ном (РЕ) моноклональными антителами CD95 (Caltag Lbs.), с последующей флуоресцентной микроскопией. Эякуляты, положительные по Fas, делили на две части: 1) отмытые сперматозоиды инкубировали 4 ч в среде В-2 с 5% СО2 при 37°С (контроль); 2) сперматозоиды инкубировали 4 ч при тех же условиях, только с добавлением 1 мг/мл рекомбинантного FasL (Kamiya Bi-omedical Company, USA) (опыт). После инкубации документировали апоптоз при помощи конъюгированного с флуорох-ромом Аннексина-V (AnV-FITC) и йодида пропидия (PI), подсчитывая количество (А^+/РГ)-сперматозоидов на флуоресцентном микроскопе МИКРОМЕД 3 ЛЮМ (Санкт-Петербург).
Результаты. Выявлено, что Fas-экспрессия на сперматозоидах фертильных мужчин наблюдалась почти в 90% случаев (у 41 из 46 мужчин), но количество (Fas+)-гамет оказалось менее 10%. У 53% обследованных субфертильных мужчин (у 41 из 78) более 10% сперматозоидов оказались Fas-положительными.
Далее эксперимент по индукции рецепторного апоп-тоза проводили с эякулятами мужчин, в которых выявлены (Fas+)-гаметы. После 4-часовой инкубации клеток с 1 мг/мл рекомбинантного FasL (опыт) изменение количества (А^+/РГ)-сперматозоидов по сравнению с контролем было стастистически не достоверно (р > 0,05).
Заключение. Таким образом, у сперматозоидов мужчин разной фертильности не удалось индуцировать ре-цепторный апоптоз. Вероятно, Fas-рецепторы на гаметах не активны или не функционируют после эякуляции, а экспрессия Fas-антигена произошла ещё в период сперматогенеза, и (Fas+)-клетки должны были быть устранены в процессе апоптоза, но по каким-либо причинам механизмы рецепторного апоптоза не были закончены, либо были отложены, либо функционировали неправильно.
Однако выявленные различия в экспрессии Fas-антигена на сперматозоидах фертильных и субфер-тильных мужчин могут представлять интерес для практической андрологии, так как позволят дополнить диагностический арсенал при исследовании мужской репродуктивной функции.
FAS-АНТИГЕН КАК ПОКАЗАТЕЛЬ КАЧЕСТВА СПЕРМАТОЗОИДОВ
Плосконос М.В.1, 2, Николаев А.А.1, Зульбалаева Д.Ф.3, Бондаренко С.К.3
1ФГБОУ ВО «Астраханский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ, Астрахань, Россия
2 ФГБОУ ВО ВГУВТ«Каспийский институт морского и речного транспорта», Астрахань, Россия
3 ГБУЗ Астраханской области «Центр охраны здоровья семьи и репродукции», Астрахань, Россия
Введение. Fas(CD95) — клеточный рецептор, по наличию которого судят о готовности клеток к Fas-индуцированному апоптозу. В мужском репродуктивном тракте функции Fas-рецепторно-лигандной системы заключаются в регуляции численности половых клеток на уровне сперматогенеза, в отслеживании разнообразных повреждений и сбоев в процессе сперматогенеза и обеспечении удаления повреждённых клеток, а также в выполнении защиты половых клеток от иммунологических реакций в яичках. При различных нарушениях сперматогенеза могут наблюдаться изменения экспрессии Fas-антигена на половых клетках, отражая активность патологических процессов, протекающих в мужской репродуктивной системе. Данные относительно корреляции между наличием Fas-рецептора на сперматозоидах и некоторыми функционально-морфологическими параметрами эякулятов мужчин, рекомендованными к исследованию Всемирной организацией здравоохранения в доступной нам литературе не встречались.
Цель. Обнаружить взаимосвязь между содержанием в эякулятах бесплодных мужчин Fas-положительных сперматозоидов и нарушениями некоторых функционально-морфологических параметров гамет.
Материалы и методы. Сперматозоиды выделяли из образцов эякулятов 78 субфертильных мужчин (возраст от 25 до 45 лет) отмыванием от семенной плазмы в фос-фатно-солевом буфере с рН 7,4. Для обнаружения Fas использовали моноклональные антитела (CD95-PE, IgG1, Caltag Lbs.), согласно инструкции производителя, с последующей флуоресцентной микроскопией. В качестве основных характеристик сперматозоидов были исследованы подвижность, морфология и концентрация сперматозоидов в эякуляте. Оценка взаимосвязи между исследуемыми показателями осуществлялась путём подсчёта коэффициента корреляции (г) Пирсона.
Результаты. Выявлена достоверная отрицательная корреляция между количеством сперматозоидов, экс-прессирующих Fas, и концентрацией гамет (г = -0,46; p < 0,001); подвижность сперматозоидов положительно коррелировала с содержанием в эякуляте (Fas+)-клеток (г = 0,31; p < 0,05); отмечена положительная корреляция количества (Fas+)-клеток и содержания в эякуляте патологических форм сперматозоидов (г = 0,4; p < 0,01).
Заключение. Представленные данные показывают, что содержание в эякулятах субфертильных мужчин сперматозоидов с маркёром апоптоза Fas коррелирует с концентрацией, подвижностью и дефектами морфологии гамет. Этот факт позволяет считать экспрессию рецептора апоп-тогенного сигнала Fas на клетках — фактором, снижающим качество сперматозоидов. Положительная корреляция между количеством (Fas+)-клеток и подвижностью гамет говорит о том, что часть тех сперматозоидов, которые оценены как активно подвижные у субфертиль-ных пациентов, маркированы Fas и предрасположены
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
при наличии дополнительных факторов к смерти через апоптоз. (Fas+)-клетки потенциально уготовлены к гибели по рецепторному механизму апоптоза, когда сигналы к его запуску поступят извне и опосредованы через Fas-рецепторы. Такие меченые клетки способствуют плохому качеству спермы и обнаруживаются раньше нарушений подвижности гамет, что даёт возможность использовать диагностическое определение Fas-антигена для прогнозирования качества половых клеток.
ОСОБЕННОСТИ ЛЕЙКОЦИТАРНОГО СОСТАВА ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У БОЛЬНЫХ С ОБОСТРЕНИЕМ ХРОНИЧЕСКОГО ЭНДОМЕТРИТА, САЛЬПИНГООФОРИТА ПРИ СОПУТСТВУЮЩЕЙ ДЕПРЕССИИ
Правдин Е.В.
Южно-Уральский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения РФ, Челябинск, Россия
Введение. Хронические воспалительные заболевания матки и придатков (ХВЗМП) занимают лидирующее положение в структуре гинекологической патологии, сопровождаются многочисленными жалобами, приводят к хронизации воспалительного процесса, серьезным осложнениям и последствиям. Это формирует основу для развития соматогенной депрессии. Установлено, что аффективные расстройства такого типа во многом обусловлены развитием синдрома системного воспалительного ответа (ССВО) и чаще всего сопровождаются изменениями лейкоцитарного состава периферической крови.
Цель и задачи. Представленная работа посвящена изучению особенностей лейкоцитарного состава периферической крови больных с обострением ХВЗМП в зависимости от тяжести сопутствующей депрессивной симптоматики.
Материалы и методы. Для исследования было отобрано 124 женщины репродуктивного возраста, экстренно поступивших в гинекологическое отделение с диагнозом обострение хронического эндометрита, сальпинго-офорита. В первые сутки госпитализации в стационар всем больным проведено комплексное унифицированное гематологического обследование. Кроме того, у всех женщин была проведена количественная оценка аффективных расстройств с помощью шкалы депрессии Бека (ШДБ). Показатель ШДБ > 12 баллов и более свидетельствует о наличии депрессии. Диапазон от 12 до 19 баллов по ШДБ говорит о легкой депрессии. Значения показателя ШДБ 20 баллов и более отражают средне-тяжелые и тяжелые депрессивные расстройства. На основании вышеизложенных критериев, все пациентки были распределены на 3 группы в зависимости от наличия клинически значимой депрессивной симптоматики и ее тяжести. Статистический анализ выполнен с использованием пакета прикладных программ SPSS-17.0.
Результаты. Изучение аффективного статуса больных, включенных в исследование, выявил наличие депрессии (ШДБ > 12 баллов) у большинства пациентов (73%). Чаще всего (63 случая, 51%) встречалась легкая депрессия (от 12 до 19 баллов по ШДБ). В 27 случаях (22%) выраженность депрессивной симптоматики соответствовала уровню среднетяжелой и тяжелой депрессии (суммарный балл ШДБ > 20 баллов). Лишь у 34 женщин (27%) показатель ШДБ соответствовал диапазону нормы. Данный
факт согласуется с известными представлениями о причинно-следственных связях развития депрессивных состояний у больных с инфекционной патологией. Анализ лейкоцитарного состава крови в общей совокупности обследованных женщин продемонстрировал увеличение относительного и абсолютного содержания палоч-коядерных НГ в лейкоцитарной формуле (8,23±0,16%; 0,68±0,02 х 109/л), снижение относительного содержания сегментоядерных НГ (54,24±0,22%), ускорение СОЭ (17,44±0,25 мм/час). Результаты корреляционного анализа, проведенные на общей совокупности больных, включенных в обследование, продемонстрировали существенную зависимость тяжести депрессивных расстройств от содержания большинства категорий циркулирующих лейкоцитов и СОЭ. Это проявилось нарастанием бальных оценок ШДБ по мере увеличения общего содержания циркулирующих лейкоцитов (г8 = 0,18, p = 0,04), процентного и абсолютного содержания эозинофилов, (г = 0,20, p = 0,03; г, = 0,25, p = 0,005 соответственно), процентного и абсолютного содержания палочкоядерных НГ (г, = 0,22, p = 0,02; г, = 0,20, p = 0,02 соответственно) и ускорением СОЭ (г = 0,18, р = 0,04). Процент содержания сегментоядерных НГ, наоборот, отрицательно коррелировал с общей тяжестью депрессивных расстройств (г = -0,24, р = 0,008). Справедливость этого положения подтвердилось в процессе сопоставительного анализа групп пациентов, сформированных в зависимости от тяжести депрессивных расстройств на фоне обострения ХВЗМП.
Заключение. В целом полученные данные свидетельствуют о том, что развитие среднетяжелой и тяжелой депрессии у больных с неосложненным обострением ХВЗМП связано с изменением лейкоцитарного состава крови (эозинофилией, нейтрофилезом, сдвигом лейкоцитарной формулы влево и нарастанием количества лимфоцитов).
ХАРАКТЕРИСТИКА СИСТЕМЫ «ПЕРЕКИСНОЕ ОКИСЛЕНИЕ ЛИПИДОВ - АНТИОКСИДАНТНАЯ ЗАЩИТА» У БОЛЬНЫХ С ОБОСТРЕНИЕМ ХРОНИЧЕСКИХ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ МАТКИ И ПРИДАТКОВ
Правдин Е.В.
Южно-Уральский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения РФ, Челябинск, Россия
Введение. Хронические воспалительные заболевания матки и придатков (ХВЗМП) относятся к числу наиболее распространенных форм генитальной патологии женщин и нередко характеризуются тяжелым течением обострений с развитием многочисленных осложнений. Неблагоприятное протекание обострений ХВЗМП обусловлено эскалацией локального экссудативно-деструктивного процесса с тенденцией к его генерализации вплоть до развития гнойного перитонита и даже абдоминального сепсиса. Подобные состояния нередко сопровождаются ок-сидативным стрессом, приводящим к накоплению продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в крови. Высокий биодеструктивный потенциал продуктов ПОЛ и их хемоатрактантная активность в отношении нейтро-фильных гранулоцитов (НГ) свидетельствуют о важной роли переокисленных липидов в развитии вторичной
