Оценка апоптоза лимфоцитов крови, пролиферации и апоптоза клеток яичника у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

УДК 618+612.1

ОЦЕНКА АПОПТОЗА ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ, ПРОЛИФЕРАЦИИ И АПОПТОЗА КЛЕТОК ЯИЧНИКА У ЖЕНЩИН С ТРУБНО-ПЕРИТОНЕАЛЬНЫМ БЕСПЛОДИЕМ

Л.Ф. Зайнетдинова ЧГМА, г. Челябинск

У пациенток с трубно-перитонеальным бесплодием, сочетающимся с генитальной герпетической инфекцией, локализованной в яичниках происходит рост абсолютного числа лимфоцитов с готовностью к Еав-зависимому апопто-зу, однако, при этом не происходит увеличения количества лимфоцитов с признаками фрагментации ядра. Растворимый вГаэ рецептор в сыворотке крови существенно ниже, а в перитонеальной жидкости вдвое выше у пациенток с трубно-перитонеальным бесплодием, ассоциированным с генитальной герпетической инфекцией. Уровень эффекторной каспазы 3 в лимфоцитах крови существенно выше у женщин с бесплодием, имеющих ВПП,2 инфекцию. В секреторной фазе менструального цикла в яичниках на фоне локальной герпетической инфекции достоверно повышается количество клеток, экспрессирующих маркер пролиферации Кл67. Увеличение пролиферирующих клеток в яичнике не сопровождается ростом клеток, экспрессирующих белок р53.

Ключевые слова: апоптоз, маркеры пролиферации, трубно-перитонеальное бесплодие, генитальная герпетическая инфекция.

Введение. Апоптоз или программированная гибель клетки в многоклеточном организме регистрируется в условиях нормы и при патологии. В физиологических условиях процессы апоптоза лежат в основе обеспечения генетического гомеостаза клеток организма, уничтожения генетически уклоняющихся в своем развитии мутантных клеток. Fas-зависимый апоптоз участвует также в завершении иммунного ответа посредством делеции активированных зрелых Т-лимфоцитов, кроме того, он также важен для предупреждения развития воспаления в «иммунопривилегированных» тканях: глазах, мозге, гонадах и т.д., где экспрессия FasL очень высока [1]. В патологии важной биологической функцией апоптоза является уничтожение клеток, инфицированных вирусом или другими внутриклеточными патогенами [1-4]. Мембранными рецепторами готовности клеток к апоп-тозу являются Fas (CD95, АРО-1), TNF-R1 (tumor necrosis factor receptor 1) и соответствующие им лиганды (Fas-лиганд и TNF-a) [5]. Fas-рецепторы (Fas-R) присутствуют на множестве клеток, в то время как FasL, в основном, расположены на Т-лимфоцитах. При развитии рецептор-зависимого апоптоза происходит связывание рецептора готовности к апоптозу и лиганда, например, Fas-R и FasL, далее активируется внутриклеточный домен смерти (Fas-associated death domain), что приводит к активации каскада каспаз и, в конечном счёте, к гибели клетки-мишени [1, 5]. Единственной функ-

цией каспаз является участие в апоптозе [6]. При этом, каспаза 8 активирует каспазу второго эшелона (эффекторную каспазу 3). после чего процесс, запущенный программой смерти, оказывается необратимым. К наиболее важным участникам этого процесса относятся не только Fas, каспазы, но и другие регуляторные белки, в т.ч. растворимые формы sFas и sFasL, проапоптогенный белок р53 и др. [7, 8, 9].

Причиной устойчивости различных типов клеток к Fas-зависимому апоптозу может быть повышенная продукция растворимых рецепторов (sFas, sFasL), которые блокируют и предотвращают клеточно-клеточные взаимодействия через соответствующие мембранные рецепторы. Согласование процессов пролиферации и апоптоза клеток каждого органа и системы лежит в основе постоянства клеточного состава тканей. В связи с этим до сих пор мало изученные процессы апоптоза лимфоцитов, а также пролиферации и апоптоза клеток яичников при трубно-перитонеальном бесплодии, развивающемся на фоне генитальной герпетической инфекции с локализацией вируса в яичниках и без герпетической инфекции, представляют интерес для анализа патогенеза данной патологии.

Цель исследования: оценить апоптоз лимфоцитов крови и пролиферативно-апоптотические маркеры в клетках яичника при трубно-перитонеальном бесплодии (ТПБ).

Материал и методы исследования. Проведено обследование 29 пациенток с трубно-перито-неальным бесплодием. Первую группу составили 16 женщин, у которых установлена атипичная форма генитальной герпетической инфекции с верификацией ВПГ 1,2 в яичниках. Вторую - 13 женщин с ТПБ, у которых герпетические вирусы в половой системе женщин ПЦР методом не были обнаружены. В третью группу (контрольную) включены 14 здоровых женщин репродуктивного возраста.

Критериями включения в первую группу были:

■ репродуктивный возраст;

■ трубно-перитонеальное бесплодие;

■ наличие ВПГ 1,2 в яичниках, верифицированное с помощью ПЦР;

■ отсутствие других инфекций, передающихся половым путем.

Критериями включения во вторую группу были:

■ репродуктивный возраст;

■ трубно-перитонеальное бесплодие;

■ отсутствие инфекций, передающихся половым путем.

Методы обследования включали: сбор анамнеза, общий и гинекологический осмотры пациенток, общее клинико-лабораторное обследование, проведение инструментального (УЗИ, лапароскопия), микробиологического, иммунологического и иммуногистохимического исследований. Микробиологическое исследование проводилось путем обследования пациенток методом ПЦР на инфекции, передающиеся половым путём, включая вирус простого герпеса (ВПГ 1,2) в биоптатах яичников.

Иммунологическое исследование включало определение на лимфоцитах крови маркеров готовности к апоптозу (CD95+), морфологическую оценку апоптоза, активность каспазы 3 и 8, уровень sFas в крови и перитонеальной жидкости.

Лимфоциты крови выделяли методом градиентного центрифугирования по Boyum А. (1968). Число лимфоцитов крови, экспрессирующих CD95 рецептор, определяли с помощью непрямого им-мунофлюоресцентного метода на основе моноклональных антител производства НПО «Препарат» (Новосибирск). Морфологическую оценку фрагментации ядра лимфоцитов проводили с помощью окрашивания Hoechst 33342 (Boehringer Mannheim), который накапливается в ядрах окрашиваемых клеток. Учет осуществляли на микроскопе ЛЮМАМ-И1 при длине волны возбуждения ЗбОнм и эмиссии 470 нм. Подсчитывали процент клеток с морфологическими признаками апоптоза (Vermes I. et al., 2000).

Оценку активности каспазы 3 и 8 проводили флюориметрическим методом (Nicholson et al., 1995) со стандартной тест-системой ApoTarget Caspase-3, 8 Protease Assay Kit (KHZ0051, BIOSOURCE, Бельгия). В качестве флюорогенного субстрата для оценки активности эффекторной каспазы 3 использовали Ac-DEVD-AFC (Asp-Glu-

Val-Asp). В качестве субстрата для каспазы 8 применяли Ac-IEHD-AFC. Измерение флюоресценции после инкубации проводили на Versa Fluor (# 170-2402) фирмы BioRad при фильтре возбуждения 400 ± 10 нм, фильтре эмиссии 505 ± 5 нм. Расчет ферментативной активности в условных единицах флюоресценции субстрата проводили по формуле: AS = [S(tj) - B(ti)] - [S(to) - B(to) ] / At, где S - сигнал измеряемого образца на момент времени t; В - сигнал реагент-бланка на момент времени t; ti - время завершения измерения; to - время начала измерения; At = (t; - to). Растворимый Fas[sFas] определяли в сыворотке крови и перитонеальной жидкости пациенток иммуноферментным методом с помощью тест-системы: Austria. Beuder Med Systems Gimble numan sAPO lfFas BMS 245 LOT 335 35230, регистрация результатов - на «Multiscan Plus» [Labsystem] при длине волны 450 нм. Определение экспрессии белков р53, Ki67 и PCNA в гистологических срезах яичника проводили иммуногисто-химическим методом с применением тест-систем «Нафтол AS-MX-фосфат Free acid (№4875 Sigma)» (USA); «RTU-Ki-67-MMl», «NCL-L-PCNA» (Великобритания) и системы мечения Immu-mark (ICN) на парафиновых гистологических срезах.

Полученные материалы исследования статистически обработаны с помощью программы «Statistica 6» с использованием параметрических и непараметрических методов. Результаты исследования в таблицах представлены в виде средней арифметической (М) и ошибки средней (т), а также в виде медианы (Me) и квартального размаха (Q25-Q75). Минимальный уровень достоверности при р < 0,05.

Результаты исследования. Для анализа процессов программированной клеточной гибели лимфоцитов крови у женщин с ТПБ на первом этапе данного исследования было определено общее число лимфоцитов крови и количество лимфоцитов, экспрессирующих рецепторы готовности к апоптозу, число лимфоцитов с морфологическими признаками апоптоза в виде фрагментации ядра клеток, уровень растворимого sFas рецептора в крови. Данные, полученные у пациенток с ТПБ в сочетании с верифицированной с помощью ПЦР генитальной герпетической инфекцией, локализованной в яичниках, а также у пациенток с ТПБ без этой инфекции и у здоровых женщин приведены в табл. 1.

Из табл. 1 следует, что в группе пациенток с трубно-перитонеальным бесплодием, сочетающимся с герпетической инфекцией, локализованной в тканях яичника, общее число лимфоцитов, а также количество лимфоцитов с готовностью к апоптозу (CD95+) оказалось существенно выше в сопоставлении с больными, имеющими данную форму бесплодия без ассоциации с генитальной герпетической инфекцией, а также с группой здоровых женщин репродуктивного возраста. Рост общей численности лимфоцитов в крови следует

Проблемы здравоохранения

Таблица 1

Анализ маркёров апоптоза лимфоцитов крови у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием

Показатели 1 группа (больные с ТПБ и генитальной герпетической инфекцией) п = 16 2 группа (больные с ТПБ) п = 9 3 группа контрольная (здоровые женщины) п= 14 Р

Ме оь-ои Ме оь-ои Ме оь-ои

Лейкоциты 5,6 4,8-6,0 4,8 4,3-5,8 4,65 4,2-5,1 0,09

Лимфоциты 29,5 26,0-33,0 28,0 25,0-30,0 26 23-27 0,031_з

СБ95 % 12% 12-15 % 12% 10-12 % 10% 8-12 %

С095 (абс.) 0,19 0,17-0,23 0,15 0,2-0,21 0,14 0,1-0,21 0,04,_2, 0,04 !_3

Клетки с фрагментацией ядра(%) 2,5% 1,5-5 % 3 % 2-7% 3% 3-4%

Клетки с фрагментацией ядра (абс.) 0,03 0,01-0,085 0,03 0,02-0,07 0,045 0,02-0,07 0,08

ИРА 15,8 20 32,14 0,2

Брав (пг/мл) 52,72 49,14-56,94 74,78 50,57-93,62 - - 0,04

Примечание. Достоверность различий по критерию Вальда-Вольфовица.

рассматривать как адекватную реакцию иммунной системы на герпетическую инфекцию, связанную с формированием клеточного иммунного ответа. Параллельно увеличению общего количества лимфоцитов в крови происходит рост абсолютного числа лимфоцитов с готовностью к Газ-зависи-мому апоптозу (СБ95 клеток). Однако рост числа лимфоцитов с готовностью к апоптозу у пациенток 1 группы не сопровождался увеличением количества лимфоцитов с признаками фрагментации ядра, свидетельствующими о необратимости процесса апоптоза. Индекс реализации апоптоза, т.е. процент лимфоцитов с завершенным процессом программированной клеточной смерти от общего числа лимфоцитов с готовностью к апоптозу (ИРА) оказался минимальным у женщин с генитальной герпетической инфекцией, хотя разница между группами статистически не достоверна.

Дальнейший анализ изменений механизмов апоптоза лимфоцитов был проведен на основе определения растворимого ^Баз) рецептора в сыворотке крови пациенток, который оказался существенно ниже у пациенток с ТПБ, ассоциированным с генитальной герпетической инфекцией, чем у

пациенток с аналогичной патологией без герпетической инфекции.

Далее нами было проведено параллельное определение Брав рецептора в сыворотке крови и перитонеальной жидкости у пациенток 1 группы с наличием вируса герпеса в яичниках (табл. 2).

В перитонеальной жидкости у женщин с ТПБ, сочетающимся с наличием ВПГ 1,2 в яичниках, уровень ББаз рецептора был приблизительно вдвое выше, чем в сыворотке крови тех же пациенток. Можно предполагать, что наличие вируса в тканях яичника способствует локальному увеличению в серозной жидкости брюшной полости уровня Брав, что может быть связано со сбрасыванием рецептора с мембран инфицированных клеток, либо с усилением продукции растворимой формы рецептора инфицированными клетками по механизму альтернативного сплайсинга.

Учитывая, что растворимая форма рецептора (эРав) может блокировать БавЬ и тем самым препятствовать процессу клеточно-клеточного взаимодействия через соответствующие мембранные рецепторы (БаБ-РазЬ), можно предполагать, что лимфоциты, находящиеся в перитонеальной жид-

Таблица 2

Уровень эРаэ в сыворотке крови и в перитонеальной жидкости у пациенток с трубно-перитонеальным бесплодием, сочетающимся с генитальной герпетической инфекцией

Показатели Перитонеальная жидкость п= 12 Сыворотка крови п = 16 Р

Ме оь-ои Ме оь-ои \V-\V КБ

Брав (пг/мл) 112,3 106,4-124,6 52,725 49,14-56,94 0,01 0,01

Примечание. Достоверность различий по критерию Вальда-Вольфовица, Колмогорова-Смирнова.

кости в условиях высокого содержания Брав, в меньшей степени способны к инициации программированной клеточной гибели, чем лимфоциты крови. Можно далее предполагать, что эти лимфоциты и другие клетки, находящиеся в верхних отделах половой системы, в результате избытка Брав в серозной жидкости в меньшей степени способны реализовать свою готовность к апоптозу, что определяет условия для персистирования ВПП,2 в

клетках, омываемых серозной жидкостью перито-неума, в том числе в клетках яичников, в ткани которых нами обнаруживался с помощью ПЦР материал вирусов у женщин с ТПБ и генитальной герпетической инфекцией. Это предположение подтверждается литературными данными. Множественные исследования in vitro и in vivo показали, что апоптоз хорошо представлен в норме в клетках гранулезы яичников. У женщин клетки гранулезы антральных фолликулов экспрессируют Fas в ранней стадии атрезии [10]. Экспрессия Fas может быть изменена различными факторами роста, гормонами, цитокинами [11].

Следующим этапом работы стала оценка активности каспазы 8 и эффекторной каспазы 3 в лимфоцитах крови женщин с ТПБ, ассоциированным с генитальной герпетической инфекцией, в сопоставлении со здоровыми женщинами (табл. 3). В данной таблице средние значения активности каспаз даны в виде медианы и квартального размаха. Однако более чем у половины пациенток уровень активности каспазы равен 0, поэтому при пользовании универсальной средней (медианой), которая является серединой ряда при расположении значений переменной в порядке её убывания или нарастания, сама медиана в сравниваемых выборках чаще всего оказывалась равной 0, хотя с помощью непараметрических критериев выявляются достоверные различия между сравниваемыми группами. Чтобы более наглядно представить различия в средних величинах, мы выражали активность каспаз не только в виде медианы, но и в виде средней арифметической и ее ошибки (М ± ш), что представлено в той же табл. 3.

Из табл. 3 следует, что у здоровых женщин уровень активности каспазы 8 оказался существенно выше, чем у пациенток с трубно-перитоне-

альным бесплодием при обнаружении ВПП,2 в биоптатах яичника. Напротив, уровень эффекторной каспазы 3 в лимфоцитах крови оказался существенно выше у женщин с ТПБ, имеющих генитальную герпетическую инфекцию, в сравнении с группой здоровых женщин. Эти показатели отражают изменение баланса активности каспазы 3 и каспазы 8 у больных в сравнении со здоровыми женщинами.

Был проведен корреляционный анализ между активностью каспаз лимфоцитов и уровнями растворимых Fas рецепторов в крови женщин с ТПБ. Эти данные приведены в табл. 4.

Как видно из табл. 4, выявлена положительная достоверная связь между активностью каспазы 3 и каспазы 8, что подтверждает известную закономерность о последовательной и зависимой активации эффекторной каспазы 3 после активации каспазы 8. Установлена также отрицательная связь между активностью каспазы 8 и уровнем раство-

Таблица 4 Коэффициент корреляции [Kendall] между активностью каспаз лимфоцитов и уровнем sFas в сыворотке крови пациенток с трубно-перитонеальным бесплодием

Показатели R Р

casp3-casp8 0,51 0,01

casp8-sFas -0,45 0,03

римого Fas рецептора в крови, свидетельствующая, что снижение уровня sFas закономерно сопровождается ростом активности каспазы 8. Механизм этой связи может быть следующим: при снижении уровня sFas создаются условия для кле-точно-клеточных взаимодействий (sFas - FasL), что и инициирует через домен смерти превращение неактивной каспазы 8 (прокаспазы) в активную форму, т.е. сопровождается ростом активности данной каспазы.

В соответствии с целью исследования проведен иммуногистохимический анализ процессов пролиферации и апоптоза клеток в тканях яичника у женщин с ТПБ в сочетании с генитальной герпетической инфекцией. Оценивалось количество клеток, экспрессирующих маркеры пролиферативной

Таблица 3

Активность каспазы 3 и каспазы 8 в лимфоцитах крови пациенток с трубно-перитонеальным бесплодием

Показатели 1 группа (больные с генитальной герпетической инфекцией и ТПБ) п = 16 3 группа (здоровые женщины) п= 14 Р

Me QL-QU М ± m Me QL-QU М ± m

S casp 3 0 0-2,6 1,53 ± 0,5 0 0-0,015 0,0075 ± 0,007 0,04

S casp 8 0 0-0 0,67 ± 0,4 0,73 0,21-1,165 0,7 ± 0,28 0,01

Примечание. Достоверность различий по критерию Вальда-Вольфовица.

Проблемы здравоохранения

активности (РСИА и КІ67), характерные для Б-фазы клеточного цикла, и количество клеток, экспрессирующих проапоптогенный регуляторный белок (р53). При оценке этих показателей учитывалась фаза менструального цикла. Результаты, полученные в фазу пролиферации, достоверных различий по уровню экспрессии маркеров пролиферации и р53 в клетках яичника не выявили.

В табл. 5 приведены результаты исследования биоптатов яичников, взятых в секреторную фазу менструального цикла. Как следует из табл. 5, в секреторной фазе менструального цикла в яичниках на фоне локальной герпетической инфекции достоверно повышается количество клеток, экс-

прессирующих маркёр пролиферации КІ67, что свидетельствует об усилении пролиферативных процессов у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием. Это может создавать оптимальные условия для инфицирования пролиферирующих клеток яичника вирусом и его персистенции в них. Из таблицы видно также, что увеличение пролиферирующих клеток в яичнике не сопровождается ростом клеток, экспрессирующих белок р53, который при накоплении в клетке способствует развитию апоптоза в качестве ответа на повреждение ДНК [12]. Торможение инициации апоптотических процессов в клетках, омываемых перитонеальной жидкостью, может осуществляться за счет выраженного роста в серозной жидкости вБав рецептора, вдвое превышающего уровни рецептора в крови, который может блокировать мембранные кле-точно-клеточные взаимодействия, инициирующие Рав-зависимый апоптоз.

Обсуждение. В результате проведенных исследований установлено, что при трубно-перито-неальном бесплодии, ассоциированном с хронической генитальной герпетической инфекцией, локализованной в яичниках, происходит достоверное повышение общего количества лимфоцитов крови, что характерно для любой хронической инфекции, которая инициирует активацию специфических иммунных клеток и их клональную экспансию. Исходя из литературных данных о возможности персистенции ВПГ1,2 в лимфоцитах [13], мы изу-

чали механизмы апоптоза в иммунокомпетеных клетках при этой инфекции. Оказалось, что при трубно-перитонеальным бесплодии, сочетающимся с генитальной герпетической инфекцией, локализованной в тканях яичников, существенно повышается число лимфоцитов в крови с готовностью к апоптозу, но при этом не происходит увеличения количества лимфоцитов с признаками реализованной программированной клеточной гибели. По данным литературы, вирусные гены кодируют белки, которые могут защищать клетки от апоптоза, тем самым способствуют выживанию инфицированных клеток и персистенции в них внутриклеточных патогенов [14]. Результаты ис-

следования показали, что в крови пациенток с ТПБ, ассоциированным с генитальной герпетической инфекцией уровень эффекторной каспазы 3 в лимфоцитах крови оказался существенно выше, а уровень ББаБ рецептора в сыворотке крови ниже, чем у женщин без этой инфекции. В тоже время, в перитонеальной жидкости у женщин с ТПБ, сочетающимся с наличием ВПГ 1,2 в яичниках, уровень вБав рецептора был вдвое выше, чем в сыворотке крови тех же пациенток. Следовательно, наиболее выраженные изменения иммунного гомеостаза, влияющие на клеточный апоптоз, установлены у женщин с ТПБ, сочетающимся с генитальной герпетической инфекцией, локализованной в яичниках, непосредственно в перитонеальной жидкости.

Мы провели иммуногистохимическое исследование маркёров пролиферации и апоптоза в клетках яичника. Из литературных данных известно, что большинство фолликулов в яичнике подвергается атрезии посредством РаБ-индуцирован-ного апоптоза, который происходит в основном в клетках гранулезы [14]. У женщин с ТПБ в секреторной фазе менструального цикла в яичниках на фоне локальной генитальной герпетической инфекции достоверно повышается количество клеток, экспрессирующих маркёр пролиферации К67 и не меняется число клеток яичника, экспрессирующих проапоптогенный белок р53.

Наши данные о влиянии генитальной герпетической инфекции на процессы апоптоза при ТПБ

Таблица 5

Маркёры клеточной пролиферации и регуляторных белков апоптоза у женщин с трубно-перитонеапьным бесплодием (ТПБ) на фоне атипичной генитальной герпетической инфекции

в секреторной фазе менструального цикла

Показатели (количество клеток на 1 мм2) (секреторная фаза м/цикла) 1 группа генитальная герпетическая инфекция и ТПБ (п = 16) 2 группа ТПБ (п = 13) Р

Ме оь-ои Ме оь-ои

РСЫА 713,9 475,068-1053,976 521,796 490,644-667,172

КІ67 809,952 776,204-949,132 760,628 633,424-771,012 0,04

р53 828,124 584,1-934,176 703,516 591,888-838,508

Примечание. Достоверность различий по критерию Манна-Уитни.

соответствуют литературным материалам о процессах торможения апоптоза клеток-мишеней, в которых персистируют вирусы, о способности самих вирусов вырабатывать вещества, похожие на естественные ингибиторы процесса клеточной гибели [15].

Литература

1. Nagata, S. Apoptosis by death factor / S. Nagata//Cell. -1997. - V. 88. -P. 355-365.

2. Me. Conkey, DJ. Apoptosis-molecular mechanisms and biomedical implications / D.J. Me. Conkey,

B. Zhivotovsky, S. Orrenius // Molec. Aspects Med. -1996. -V. 17.-P. 1-110.

3. Цыпленкова, В.Г. Апоптоз / В.Г. Цыплен-кова, Н.Н. Бескровнова // Арх. патол. -1996. -№5. -Р. 71-74.

4. Adams, J.M. The Bcl-2 protein family: Arbiters of cell survival / J.M. Adams, S. Cory // Science. -1998. - V. 281. -P. 1322-1326.

5. Nagata, S. The Fas death factor / S. Nagata, P. Golstein //Science. -1995. - V. 267. - P. 1449-1456.

6. Wilson, B.E. Induction of bcl-2 expression by phosphorylated CREB proteins during B-cell activation and rescue from apoptosis / B.E. Wilson, E. Mochon, L.M. Boxer // Mol. Cell. Biol. — 1996. -V. 16. -P. 5546-5556.

7. Arends, M.J. Apoptosis. The role of the endonuclease/M.J. Arends, R.G. Morris, A.H. Wyllie// Am. J. Pathol. -1990. - V. 136. - P. 593-608.

8. Steller, H. Mechanisms and genes of cellular suicide / H. Steller // Science. - 1995. — V. 267. — P. 1445-1449.

9. Phagocyte recognition of cells undergoing apoptosis / J. Savill, V. Fadok, P. Henson, C. Haslett // Immunol Today. -1993. - V. 14. -P. 131-136.

10. Granulosa cell apoptosis induced at the penultimate follicular development is associated with increased levels of Fas and Fas ligand in the rat ovary / J.M. Kim, D.L. Boon, A. Auyeung, B.K. Tsang // Biol. Reprod. -1998. -V. 5.- P. 1170-1176.

11. Trauth, B.C. Monoclonal antibody-mediated tumor regression by induction of apoptosis/B.C. Trauth,

C. Klas, A.M.J. Peters // Science. — 1989. — V. 2. — P. 301.

12. Lowe, S.W. p53 is required for radiation-induced apoptosis in mouse thymocytes / S.W. Lowe, E.M. Schmitt, S.W. Smith //Nature. — 1993. - V. 362. — P. 847-849.

13. Баринский, И.К. Роль герпетических инфекций в патологии человека / И.К. Баринский // Врач. -1994. -Л& 5. - С. 5-8.

14. Сухих, Г.Т. Апоптоз в гормонально-зави-симых тканях репродуктивной системы /Г.Т. Сухих, М.М. Дементьева, В.Н. Серое//Акуш. и гин. -1999.-№4.-С. 12-14.

15. Nash, Р. В. Toxoplasma gondii-infected cells are resistant to multiple inducers of apoptosis / P.B. Nash, M.B. Pumer, R.P. Leon // J. Immunol. -1998. - V. 160. -P. 1824-1830.

Поступила в редакцию 10 сентября 2008 г.