CC BY
6
угольно построенным градуировочным графикам. Стандарт-*пыс растворы красителей готовят в 3 % растворе сернистого натрия с концентрацией от 1 мг/мл до 10 мкг/мл. Расчет проводят по формуле:
а-В,В, X = . у^ мг/м3,
где а — количество красителя, найденное по графику (в мкг/мл); В\ — объем, в котором растворена проба после концентрирования (в мл); — объем, в котором растворена проба после хроматографирования (в мл); В2 — проба, нанесенная на пластинку (в мл); К0 — количество отобранного на анализ воздуха (в л). Чувствительность определения красителей 0,1 мкг в 1 мл анализируемого раство-
ра, нижний предел обнаружения 0,1 мг/м3, погрешность определения 15%.
Эти методики раздельного определения красителей можно применять для их определения в смывах с кожных покровов рабочих. Смывы с рук проводят общепринятым методом обмыва смесью этилового спирта и воды в соотношении 2:1с последующим концентрированием растворов упариванием. После упаривания анализ выполняют по методикам определения соответствующих красителей в воздухе.
Данные методики использованы при изучении загрязнения воздуха отделочных цехов текстильных .предприятий и смывов с рук рабочих, имеющих контакт с красителями при крашенин и отделке тканей.
Поступила 02.09.85
УДК 6!3.632 + 615.9]:С20.197.7
А. В. Целух, Л. М. Шафран, П. 3. Протченко, А. Л. Головатюк, Е. П. Белобров, Е. Р. Осипова, Е. М. Усыченко, С. А. Петрам
ОПЫТ ПРИМЕНЕНИЯ МЕТОДА КУЛЬТУР КЛЕТОК ДЛЯ ОЦЕНКИ ТОКСИЧНОСТИ АНТИКОРРОЗИОННЫХ МАТЕРИАЛОВ СУДОСТРОИТЕЛЬНОГО НАЗНАЧЕНИЯ
Одесский медицинский институт им. Н. И. Пнрогова, филиал НИИ гигиены водного транспорта Минздрава СССР, Одесса
В последние годы в токсикологии применяется метод культуры клеток для быстрой предварительной оценки токсичности полимерных материалов, химических соединений, лекарственных веществ [1—5]. Однако такие исследования проведены лишь для отдельных химических соединений, не определено их место в комплексной гигиенической оценке новых материалов, отсутствуют работы обобщающего характера и инструктивно-методические материалы по применению культур клеток в токсикологии.
В данной работе проведено изучение действия компонентов ряда лакокрасочных и резинотехнических материалов на культуру клеток для решения вопроса о воможностн и целесообразности использования метода культур клеток в комплексной гигиенической оценке их токсичности.
Образцы материалов помещали в контейнер объемом 3 дм3, выдерживали при 40 °С в течение 24 ч, после чего воздух из контейнера протягивали 1,5 ч со скоростью 0,1 дм3/мин через 2 последовательно соединенных поглоти-
Влияние лакокрасочных и резинотехнических материалов на культуру клеток
Препарат Срок после инкубации, ч Цитотокснч-ность Срок после инкубации, ч Число митозов на 1000 клеток (М±т)
% ни патологических нормальных профаза метафаза анафаза телофааа
^Змаль ПФ-115 Эмаль ЭП-525П Лак НЦ-222 Резина 922 Резина ИРП-3012 Резина ИРП-1130 24 48 72 24 48 72 24 48 72 24 48 72 24 48 72 24 48 72 24 16 8 15 10 5 9 6 3 12 8 4 24 16 8 24 16 8 1,93 3,30 4,0 2,33 3,90 4,0 0 0,17 0 2,08 3,50 4,0 1,25 2,50 3,87 0 0 0 5 5 5 5 5 5 3 3 3 4 4 4 8 8 8 8 8 8 4,2+0,97* 5,6±0,87* 3,6+1,17* 3,0±0,89* 5,2+1,65* 5,2±1,31* 0,7±0,67 0* 0 0 0* 0 1,0±0,53 1,2±0,52 0 0 0* 0 7,0+1,0* 3,8+0,54* С* 9,0±0,89* 7,0+0,84* 1,6±0,75* 15,7± 1,63 20,0±1,73 24,0+1,15 0* 0* 0* 6,6+0,67* 5,1±0,85* 0* 16,6+1,29 17,2±1,11* 19,9+1,91* 1,8+0,37 0,8+0,37* 0* 2,4+0,24 1,4±0,40* 0,4±0,24* 2,0±0,58 4,3л: 1 ,63 4,7± 1,63 0* 0* 0* 1,2±0,31 0,5±0,26* 0* 1,0±0,42* 1,8±0,44* 1,8+0,44* 4.4±0,50 2.4+0,40* 0* 4,0+0,32 3.5+0,51* 0,8±0,58* 4,3±1,63 5,0±0,58 7,7± 1,63 0* 0* 0* 2.1+0,25* 1.7±0,25* 0* 3,5+0,46 4,6±0,26 5,2±0,65 0,8±0,37* 0,4+0,40* 0* 2,4±0,24* 1,2±0,31* 0* 4,7±1,63* 7,3±0,33* 7,3±1,63 0* 0* 0* 1,8*0,58* 2,3±0,33* 0* 7,4±0,80 7,1 ± 1,09 7,5+0,84 0' 0* 0' 0,4±0,24* 0,6±0.40* 0* 4,7± 1,63 4,7±1 ,63 4,3+0.33 0* 0* 0* 0,8±0,31* 0,6±0,32* 8* 4,7+1 ,90 3,6±0,82 5,2±0,84
Копт оль куль- 24 72 0 24 0.1 ±0,04 19,3+0,80 2,5+0,59 4.1+0,34 8,1 ±0,66 4,5±0,59
туры клеток 48 48 0,08 24 0,3±0,14 22,9±0,83 2,9±0,21 5.4±0,34 9,0+0,64 5,5+0,48
72 24 0,08 24 0,1±0,11 24,9±0,96 3,2±0,26 5.9±0,31 9,7±0,69 6,2+0,51
* Различие с контролем достоверно (Р<0,05).
теля, заполненных 5 см3 растворителя (среда 199). По окончании протяжки жидкость из поглотителей объединяли, разливали по стерильным ампулам, запаивали и стерилизовали 30 мин при 100 "С. Полученные растворы летучих фракций изучаемых материалов при необходимости разводили средой 199 и использовали в экспериментах. Исследования проводили на перевиваемой линии клеток (клетки почек эмбриона человека).
Для изучения токсического действия летучих фракций исследуемых материалов во флаконы с покровным стеклом вносили по 1,5 см3 подготовленной суспензии клеток (150 000—70 000) в ростовой срсде (среда 199 с 10% бычьей сыворотки) и добавляли по 0,2 см3 изучаемого раствора. Через 24. 48 и 72 ч после инкубации при 37 °С определяли морфологические особенности монослоя клеток и их мито-тичсскую активность В каждой серии опытов осуществляли контроль культуры клеток, причем в связи с однородностью показателей контрольных проб в разных сериях при окончательной обработке материалов они были объединены.
Оценку цнтотоксического действия изучаемых препаратов на культуру клеток проводили при микроскопическом изучении монослоя и результат выражали в баллах. Дегенерацию 100 % клеток оценивали в 4 балла, 75 % — в 3 балла, 50 % — в 2 балла, 25 % — в 1 балл. Для суммарной оценки цнтотоксического эффекта рассчитывали индекс цитотоксичности (ИЦ) путем деления суммы баллов на число исследованных культур клеток.
Для изучения влияния препаратов, на митотическую активность клеток монослой, выращенный на покровных стеклах, фиксировали раствором Буэна 15 мин, промывали 70° этанолом и окрашивали гематоксилином и эозином по общепринятой методике, после чего препараты заключали в канадский бальзам и подвергали микроскопическому исследованию. Подсчитывали число патологических и нормальных митозов на 1000 клеток с учетом фаз деления.
Исследовали растворы летучих фракций 3 видов лакокрасочных (лак НЦ-222, эмали ПФ-115 и ЭП-525П) и 3 видов резинотехнических (резины 922, ИРП-3012 и ИРП-1130) материалов. По результатам санитарно-химическнх исследований указанные материалы в условиях, моделирующих их эксплуатацию на. судах, выделяют в воздух камер следующие компоненты: бензол, изобутаиол, бутилацетгт, бута-нол (лак НЦ-222), ацетон, формальдегид (резина 922), бу-танол, толуол, (резина ИРП-3012), стирол, этанол, бензол, метанол (резина ИРП-1130), бутанол, изобутаиол, бутил-ацетат, уайт-спирит (эмаль ПФ-115), бензол (эмаль ЭП-525П).
Как видно из таблицы, летучие фракции эмалей ПФ-115 и ЭП-525П оказывали выраженное токсическое действие на культуру клеток. Уже через 24 ч отмечена дегенерация около 50 % клеток монослоя. В последующие сроки наблюдения дегенерация клеток прогрессивно нарастала. При изучении митотнческой активности выявлено уменьшение числа делящихся клеток уже через 24 ч в 2—4 раза по
сравнению с контролем, а также появление атипичных форм^ митозов. Прослеживалось закономерное снижение митоти-^» ческой активности клеток в последующие сроки наблюдения вплоть до полного отсутствия нормальных митозов к 72 ч. Анализ митотической активности по фазам деления выявил задержку митоза в мета- и анафазе. Летучие фракции лака НЦ-222 не вызывали видимых морфологических изменений в культуре клеток и существенных изменений в митотической активности клеток в сравнении с контролем. Наиболее выраженное токсическое действие на культуру клеток оказывали летучие фракции резины 922. Уже через 24 ч ИЦ был равен 2,83, а к 72 ч наступала полная дегенерация клеток. Обращало на себя внимание полное отсутствие митозов во все сроки наблюдения. Несколько менее выраженное токсическое действие оказывали компоненты резины ИРП-3012. Через 24 ч ИЦ составлял 1,25 балла, а к 72 ч возрастал до 3,87. При этом отмечалось резкое уменьшение количества нормальных митозов, особенно выраженное в отношении ана- и телофаз. Через 72 ч делящиеся клетки не обнаруживались. Препараты резины ИРП-1130 практически не оказывали цнтотоксического действия на культуру клеток и не влияли на их митотическую активность.
Учитывая высокую токсическую активность цельных препаратов летучих фракций исследуемых эмалей и резины ИРП-3012, изучали действие разных доз препаратов (разведения 1:4, 1 : 16, 1 :64). Установлено, что влияние пре-д паратов на культуру клеток снижалось по мере разведен-mí^j в отношении как цнтотоксического эффекта, так и митот;;- " ческой активности. Однако даже при разведении 1 : 64 наблюдались выраженные изменения морфологического строения монослоя и митотической активности, что подтверждает высокую токсичность летучих фракций исследованных материалов.
Таким образом, изучение морфологических характеристик культуры клеток и их митотической активности под воздействием синтетических материалов, применяемых в судостроении и судоремонте, показало, что с помощью метода культур клеток может быть установлена сравнительная токсичность летучих фракций полимерных материалов различных марок, определена связь между концентрациями растворов и их цитотоксическим действием, установлены действующая, пороговая и недействующая концентрации.
Литература
1. Калмыкова Т. П. — Ветеринария, 1980, № 8, с. 60—62.
2. Крат А. В., Шефтель В. О., Кесельман И. М. и др. —
Гиг. и сан., 1983. № 5, с. 70—71.
3. Строчкова Л. С., Жаворонкова А. А., Авцын А. П. — v
Цитология, 1984, № 3, с. 299—305. Щ
4. Шпирт М. Б. — Гиг. и сан., 1977, № 4, с. 50—53.
5. Шумская Н. И., Миронова JI. М., Малыгина И. Г. —
Там же, 1980, № 1, с. 50—52.
Поступила 10.07.85
УДК 614.3/.4(477.86)
Н. А. Недоступ, И. В. Мардарович, Л. Л. Карпинец
ИЗ ОПЫТА РАБОТЫ ПОЛЯРОГРАФИЧЕСКОГО ЦЕНТРА РАЙОННОЙ САНЭПИДСТАНЦИИ
Ивано-Франковская областная санэпидстанция
Решение современных гигиенических проблем невозможно без проведения физико-химических исследований. Они необходимы для получения исчерпывающей информации о состоянии компонентов окружающей среды — воздуха, воды, почвы.
Значительное место среди перспективных физико-химических методов занимает полярографический анализ. К достоинствам полярографии следует отнести возможность
установления качественного и количественного состава пробы, возможность аналитического определения ряда веществ, присутствующих в растворе без предварительного их разделения, возможность осуществления практически неограниченного числа повторных определений при использовании одной и той же пробы.
В связи с тем что проведенная в 1977 г. централизация лабораторной службы значительно укрепила материально^
