CC BY
11
Для выяснения вопроса, не смывается ли при окрашивании флюо-рохромами полоска пыли, мы применили методику Красногорской и подсчитали ряд препаратов до и после окрашивания полоски.
Результаты наших исследований показывают, что среднее число пылинок в 1 см3 после их окраски аурамином значительно больше, чем до окраски, что является результатом лучшей видимости препарата в люминесцентном микроскопе.
Для выяснения вопроса о разрешающей силе нашего люминесцентного микроскопа мы исследовали некоторые сорта пыли, имеющие собственную первичную люминесценцию.
Оказалось, что под влиянием ультрафиолетовых лучей пылинки различной фракции настолько ярко люминесцнруют, что их возможно сосчитать при любой иммерсионной системе (сухой и масляной), используя для этого любой счетно-измерительный окуляр.
Основной вывод, к которому мы пришли в результате наших исследований, сводится к тому, что примененный нами метод люминесцентного анализа дает возможность определения свободной БЮц в пыли.
И. А. СВРШНИКГВА
Опыт исследования пива ускоренным
методом
Из Санитарно-гигиенической лаборатории Приморского района (Ленинград)
Мы разработали ускоренный метод определения коли-титра пива, существенно отличающийся от опубликованных в печати.
Метод, опубликованный Ю. И. Рубинштейн (1940), не удовлетворил нас по многим причинам. Эгим методом можно засевать только небольшие количества пива (не больше 10 мл). Для больших количеств автор предлагает применять мембранные фильтры, но данных, полученных этим способом, не приводит. Разные объемы пива она засевает в толщу среды Эндо. Едва ли это удобно, так как расположенные в глубине среды колонии недоступны для детального изучения. Через 18—22 часа колонии, подозрительные на кишечную палочку, она пересевает на среды с углеводами, налитые в луночки предметных стекол, что является очень кропотливой операцией. Совершенно непонятно, почему автор для этого берет среды с 10% углеводов, так как такая концентрация мало пригодна для выращивания кишечной палочки. Ответ получается через 3 часа. Указывается, что при необходимости диференцировать группу Coli-aërogenes срок соответственно удлиняется.
В работе, помещенной в журнале «Лабораторная практика» (№ 5, 1941), мы опубликовали разработанный нами метод посева на кишечную палочку больших количеств пива при помощи прибавления к нему хлорного железа и перенесения полученного осадка на среду Эндо. Исходя из этого метода, мы разработали способ ускоренного исследования пива на кишечную палочку. Для этого мы остановились на следующей методике. К 100 мл пива после подщелачивания его 5—10% содой прибавляют 1 мл 10% хлорного железа. Через 30—40, иногда 60 минут на дно оседает большой рыхлый осадок. Жидкость осторожно сливают, а объем осадка измеряют пипеткой. 0,1 мл осадка переносится на I—2 чашки Петри со средой Эндо, предварительно подсушенные в термостате. Внесенный на среду Эндо осадок распределяется по поверхности шпателем Дригальского. Через 17—18 часов развившие-
ся колонии кишечной палочки сосчитываются. Обычно это не представляет труда, так как их немного и они распределены по поверхности равномерно. В тех же случаях, когда их много, мы с успехом применяем метод, описанный Вайнбергом. Полученное число показывает, сколько особей кишечной палочки находилось в 0,1 мл осадка; отсюда, зная объем осадка, полученного из 100 мл пива, легко вычислить, сколько особей кишечной палочки приходится на 1 мл пива. Полученный осадок лучше довести стерильной водой до 10 мл, тогда число колоний на чашках непосредственно покажет число кишечной палочки в 1 мл пива, так как в этом случае 0,1 мл осадка будет соответствовать 1 мл пива. В дальнейшем количество кишечных палочек в 1 мл пива мы будем называть коли-индексом.
Вполне естественно выдвигается вопрос, насколько этот результат точен в сравнении с принятой методикой. Для его решения мы поставили ряд параллельных исследований, результаты которых представлены в таблице. Посев 100 мл пива методом коагуляции хлорным железом на среду Эйкмана введен потому, что эффективность его нами установлена в предыдущем сообщении. Для сравнения производились посевы 100 мл пива на среду Кесслеоа двойной концентрации, как это рекомендовано Методбюро Н.И.Л.П.Г. в Ленинграде (50 мл среды + 100 мл пива), а также ряд пробирок со средой Кесслера для разведений пива от 0,001 до 10 мл.
Из таблицы видно, что посев осадка из 100 мл пива на среду Эйкмана дает положительный результат значительно чаще, чем непосредственный посев этого же количества пива на среду Кесслера двойной концентрации. При одновременном, через 18—20 часов, пересеве на среду Эндо со среды Эйкмана и среды Кесслера из первой кишечная палочка выделена на 28 проб пива 18 раз, а со среды Кесслера всего 3 раза. Возможно, на среде Кесслера происходит запаздывание размножения кишечной палочки. Однако в летние месяцы (описанные исследования проведены зимой) в нашей же лаборатории совпадение положительных результатов было в 66% посевов.
Несовпадение результатов, полученных в зимние месяцы, с результатами, полученными летом, объясняется тем, что летом в лабораторию поступало пиво, значительно более загрязненное. Главная же причина заключается в тормозящем влиянии пива на кишечную палочку. Л. Я. Кац и А. П. Попова убедительно доказали, что для того, чтобы избавиться от тормозящего влияния пива, его надо разводить в 50 раз, здесь же получается разведение только в I1/« раза, что явно недостаточно. Все эти данные еще раз подтверждают, что для пива более надежным методом выделения кишечной палочки из 100 мл пива является метод с хлорным железом.
Остается ответить на основной вопрос, соответствуют ли полученные нами коли-индексы коли-титрам с применением жидких сред.
В первом анализе в 1 мл определены 2 кишечные палочки, следовательно, коли-титр равен 1 мл, если бы мы допустили коли-титр меньше, например, 0,1 мл, то пришлось бы допустить рост кишечной палочки из 0,2 микроба, что не отвечает нашему представлению о коли-титре. В третьем анализе в 1 мл найдены 143 микроба, следовательно, в 0,01 мл—1,43, что дает нам право указать титр 0,01 мл; на среде Кесслера коли-титр также равен 0,01 мл. То же мы можем сказать о № 14, 21, 22 и .23. В ряде анализов коли-индекс, полученный на среде Эндо, при пересчете на коли-титр оказался ниже коли-титра, полученного на жидких средах; например, 1 мл и 100 мл; 0,1 мл и 100 мл; 0,01 мл и 100 мл (№ 1, 4, 5, 6, 8, 9, 11, 15, 16, 18). Иначе говоря, метод посева осадка на среду Эндо является более чувствительным. В № 2, б, 7, 26, 28 коли-титр, полученный на среде Эндо, и коли-титр, полученный на жидких средах, являются смежными, например, 0,1 и 0,01.
№ «в » ч со о Я s со га 2 2 = >= чСП ч s ¡^кг я 5 о си 10 i, £ <- _ S с s s <и е- ï- -Û галка ' Эндо. сл ПИЙ пива U Ьй V d гр в за- ги о 40Г0 ЧИ- ний на 1Д0__
п/п О О 0J о о С s О Qj а. о п я = » Посев ¡( пива на Кессле г НСЙ KOHI ПИИ = х X I-IÏ i и 5 V. S О о = ^ в £ о о 0/ U о С на сред) Числа к на 1 мл в s s ч о а г- — — ? о С ' Э* 1) 5 = >> ч 4 О Ч я ^ — ■ и С* MlCul.
1 + 0 1С0 2 1
2 + + 0.01 86 0,1
3 + 0 0,01 143 0,01
4 + + 1С0 13,5 0,1
5 + 0 100 51,6 0,1
6 + + 0.1 495 0,01
7 + 0 0,1 8 I
8 + 0 100 2 1
9 + 0 100 100 0,01
10 0 . 0 0 0 > ю
11 + 0 100 3 1
12 0 0 0 0 > 10
13 + 0 100 0 > ю
14 + 0 0.1 Б1,5 0,1
15 0 и 0 3 1
16 0 0 0 1 1
17 0 0 0 0 > 10
18 + 0 100 16 0,1
19 0 0 0 0 > 10
20 0 0 0 0 > 10
21 + 0 0,1 41 0,1
22 + 0 0,01 2-;8 0.01
23 + 0 1 2 1
24 0 0 0 0 > 10
25 0 0 0 0 > 10
26 + 0 O.ri И 0,1
27 0 0 0 0 > ю
28 + 0 1 74 0,1
Примечание. Из осадка на среде Эидо не выделена кишечная палочка.
Эти колебания не имеют существенного значения, так как при параллельном посеве пива на два ряда пробирок со средой Кесслера мы также их наблюдаем. Повидимому, это зависит от неравномерного распределения микробов.
Итак, коли-индекс, выраженный однозначным числом, соответствует коли-титру 1 мл, двузначным — 0,1 мл, трехзначным — 0,01 мл и т. д. Десятые доли соответствуют 10 мл. Например, в 1 мл 0,8 колоний — коли-титр 10 мл (1 колония из 0,1 мл осадка, объем осадка — 8; в 100 мл 80, в 1 мл 0,8).
В тех случаях, когда на среде Эндо не вырастает ни одной колонии (№ 10, 12, 13, 17, 19, 20, 24, 25, 27), коли-титр может быть больше 10 мл. В зависимости от требований к пиву, можно ограничиться такими результатами или переносить на среду Эндо 1 мл и больше осадка.
Таким образом, через 18 часов мы имеем коли-титр.
Остается обычная идентификация. Проводим ее в 5—6 часов. Для этого после микроскопирования мазка, окрашенного по Граму, полученные колонии проводим через пестрый ряд в составе: пептонная вода с мальтозой, лактозой, сахарозой и маннитом, лакмусовое молоко, желатина, бульон Готингера, среды Симонса и Кларка и непременно разведенная среда Эйкмана. Все среды берем в объеме 2 мл в агглюти-национных или простых пробирках; • в первых удобнее, особенно для Сахаров; для последних мы употребляем пептонную воду с 0,5% русского агар-агара, вымоченного в солевом растворе, отмытого от соли и высушенного. Перед посевом все среды нагреваются до 42—4-3°. Через 3 часа сахара уже дают изменение цвета, а через 5—6 часов — газообразование. Через 6 часов среда Эйкмана дает энергичное газообразование, бульон — ясную реакцию на индол. К этому же времени цитрат-позитивные виды дают на среде Симонса рост. Желатина остается без изменения, между тем как поставленные для контроля желатинсразжижающие виды (В. cloacae) через 6 часов дают разжижение. Лакмусовое молоко через 6 часов дает отчетливое покраснение, свертывание же часто запаздывает. Что касается реакции с ме-тилротом, то красное окрашивание для В. coli communae и желтое для В. coli aerogenes, как на это указывает И. Е. Минкевич, не являются строго постоянными — «здесь можно говорить только о доминирующей средней величине для большого ряда штаммов». К тому же реакция устанавливается через 4 суток, на практике же в большинстве случаев, не желая задерживать ответ, реакцию с метилротом производят через сутки. Наши специально проведенные наблюдения показали, что в большинстве случаев реакция, произведенная через 6 часов, не отличается от реакции через 24 часа.
Таким образом, пестрый ряд через б часов дает достаточно отчетливый ответ для идентификации кишечной палочки. Но не всегда длинный пестрый ряд является необходимым; прп ежедневном контроле на производстве можно ограничиться несколькими показательными средами, например, средами Симонса и Эйкмана, при условии обязательного культивирования на среде Эйкмана при 42—43°.
Таким образом, предложенный метод исследования пива на кишечную палочку требует не более часа для получения осадка, измерения его и переноса части его на среду Эндо; 18 часов — для культивирования посева осадка в термостате и не более 7 часов — на подсчет колоний кишечной палочки на среде Эндо и идентификацию, а всего около 26 часов. На практике, при односменной работе бактериолога, ответ может быть дан к концу рабочего дня, следующего за днем поступления анализа, а в случае необходимости, основываясь на росте на среде Эндо и данных микроскопии, предварительный ответ может быть дан на 6 часов раньше, т. е. через 20 часов.
