CC BY
33
-□ □-
Наведено результати досл1джень щодо обгрунтування ращональних параметрiв екстрагування бiологiчно активних речовин Í3 квiтiв Tagetespatula. Оптимiзованорецеп-турний склад напою оздоровчого призна-чення на основi сирног сироватки, настою з квiтiв Tagetes patula, ягiдного наповнюва-ча «Л1сова ягода». Наведено рекомендаци щодо розробки технологш неферментова-них i ферментованих сироватково-рослин-них напогв оздоровчого призначення
Ключов1 слова: сироватка, Tagetes, яг1д-ний наповнювач, екстрагування, бюлог1чна
активтсть, оптим1защя, поверхня видклику
□-□
Приведены результаты исследований по обоснованию рациональных параметров экстрагирования биологически активных веществ из цветов Tagetes patula. Оптимизирован рецептурный состав напитка оздоровительного назначения на основе творожной сыворотки, настойки из цветов Tagetes patula, ягодного наполнителя «Лесная ягода». Приведены рекомендации по разработке технологий неферментиро-ванных и ферментированных сывороточ-но-растительных напитков оздоровительного назначения
Ключевые слова: сыворотка, Tagetes, ягодный наполнитель, экстрагирование, биологическая активность, оптимизация,
поверхность отклика -□ □-
УДК [637.04:615.322:663.81]:519.85
|DOI: 10.15587/1729-4061.2016.59695|
ОПТИМ1ЗАЦ1Я РЕЦЕПТУРНОГО СКЛАДУ НАПОЮ ОЗДОРОВЧОГО ПРИЗНАЧЕННЯ НА ОСНОВ1 СИРОВАТКИ
Н. А. Ткачен ко
Доктор техычних наук, професор, завщувач кафедри
Кафедра технологи молока, жирiв i парфумерно-косметичних засобiв* Email: nataliya.n-2013@yandex.ru П. О. Некрасов Доктор техычних наук, професор Кафедра технологи жирiв та продуклв бродшня Нацюнальний техшчний уыверситет «Хармвський пол^ехшчний шститут» вул. Фрунзе, 21, м. Хармв, УкраТна, 61002 Email: nekrasov2007@gmail.com С. I. В i кул ь Кандидат техычних наук, доцент Кафедра харчовоТ хiмiТ* Email: vizaj_vik@mail.ru *Одеська нацюнальна академiя харчових технолопй вул. Канатна, 112, м. Одеса, УкраТна, 65039
1. Вступ
Розвиток молочноТ промисловост в сучасних умо-вах нерозривно пов'язаний з впровадженням концепцп еколопзацп - ращонального використання природних ресурив на принципах мало- i безвщходних техноло-гiй [1].
З розвитком промислового виробництва сирiв i казеТну виникла проблема використання молочноТ сироватки. Необхщшсть вирiшення цiei проблеми обумовлена двома аспектами - технолопчним та еко-логiчним. Технологiчний: до молочноТ сироватки переходить бiльше 50 % сухих речовин, що входять до складу незбираного молока. Власники тдприемств в умовах ринковоТ конкуренцп та дефiциту молочноТ сировини вимагають повного залучення у виробни-цтво товарноТ продукцii всiх складових частин молока. Еколопчний: молочна сироватка в непереробленому виглядi створюе екологiчну небезпеку для навколиш-нього середовища, осюльки и забруднююча здатнiсть перевищуе аналопчнш показник для побутових спч-них вод в 500-1000 разiв [1-3].
Проблема ращонального використання молочноТ сироватки не виршена повнiстю в жоднш краiнi. За свiдченням Мiжнародноi молочноТ федерацп, в даний
час до 50 % молочноТ сироватки зливаеться в каналiза-цiю [2]. В УкраТш сьогоднi на бiльшостi сиркомбшапв вирiшено питання щодо перероблення тдсирноТ сироватки на суху сироватку, тодi як повне перероблення сирноТ й казешовоТ сироваток не оргашзовано на жод-ному молокопереробному тдприемствь
Останнi роки в Украiнi характеризуются збшьшен-ням обсягiв виробництва кисломолочного сиру i змен-шенням кiлькостi виробленого казеТну. Тому питання оргашзацп промислового перероблення сирноТ сироватки, в т. ч. на продукти харчування премiям-класу, е досить актуальним. Одним iз шляхiв вирiшення даноТ проблеми може бути органiзацiя на молокопереробних тдприемствах цехiв з виробництва яюсно новоТ асор-тиментноТ лшшки напоТв оздоровчого призначення iз заданими лжувальними або профiлактичними власти-востями. Оптимiзацiя компонентного складу таких на-поТв iз застосуванням вiтчизняноi рослинноТ сировини з врахуванням медико-бiологiчних вимог щодо хiмiч-ного складу продукпв оздоровчого призначення, вимог нормативних докуменпв щодо Тх фiзико-хiмiчних, мь кробюлопчних, i санiтарно-гiгiенiчних показникiв при забезпеченш високих органолептичних, пробiотичних i антиоксидантних характеристик, е актуальним завдан-ням, яке потребуе виршення.
©
2. Аналiз лкературних даних та постановка проблеми
Спрямована енергетична дiя на молоко як складну полщисперсну систему призводить до його розд^ення на б^ково-жировий концентрат (сир, кисломолочний сир, казеш) i фiльтрат (молочну сироватку) [1, 2].
Всього, за приблизними розрахунками, виходячи iз асортименту твердих сирiв, кисломолочного сиру i казе1шв, в свiтi налiчують понад 15 000 видiв молочно! сироватки. На практищ справу мають звичайно з двома категорiями молочних сироваток - солодкою i кислою [1, 3]. Сироватка, яка е побiчним продуктом виробни-цтва твердих, напiвтвердих, м'яких сирiв i сичужного казешу, називаеться солодкою i мае рН 5,9-6,6. При виробництвi сиру кисломолочного утворюеться кисла сироватка з рН 4,6-5,2; при виробництвi осадженого неорганiчними кислотами казешу - кисла сироватка з рН 4,3-4,6. Склад i властивосп сироватки обумовленi видом основного продукту та особливостями технологи його отримання [2].
Найщншшим компонентом сироватки з точки зору бюлопчно! цiнностi, е бшки, якi не мiстять лiмiтова-них амiнокислот. Сироватковi бiлки - щнне джерело аргiнiну, гiстидiну, метюшну, триптофану та лейцину. В альбумж вмiст триптофану в 4 рази б^ьший, нiж у казеiнi. Вмют незамiнноi сiрковмiсноi амiнокислоти -цистшу - в глобулiнi майже в 7 разiв, а в альбумж - у 19 разiв б^ьший, нiж у казеiнi [1-3].
У молочну сироватку переходять майже ва макро-й мiкроелементи молока, бшьша частина лактози, а та-кож водорозчинш вiтамiни. За набором i абсолютним вмiстом вiтамiнiв сироватка - бюлопчно повнощнний продукт.
З органiчних кислот в сироватщ виявлено молочну, лимонну, нуклешову й леткi жирнi кислоти: оцтову, мурашину, пропiонову, масляну. Вмют летких жирних кислот у сирнш сироватцi бiльший, нiж у тдсирнш, що пояснюеться частковим гiдролiзом жиру в процес утворення сирного згустку [2, 3].
У сироватщ виявлено гщролази, фосфорилази, ферменти розщеплення, окисно-вщновш ферменти, для iнактивацii яких потрiбне теплове оброблення при температурi понад 60 °С [2]. За дослщженнями авторiв, рекомендовано пастеризувати молочну сироватку за температури (72±1) °С з витримкою 15-20 сек. [4]; при цьому збер^аються нативнi властивостi сироватко-вих бiлкiв, повнiстю знищуеться патогенна мжрофло-ра, на 90-92 % знищуються мезофiльнi молочнокислi лактококки, а стутнь виживання бiфiдобактерiй (за умови використання в якост сировини бiфiдовмiсноi сироватки) складае 57,0-76,2 % в залежност вiд виду бiфiдофлори.
Асортимент продукпв, якi виробляють з молоч-но! сироватки, включае: продукти з вершюв, бiлковi продукти, напоi, продукти бюлопчного оброблення, молочний цукор, згущеш й сухi концентрати, морози-во, сири [1].
Для перероблення сирно! сироватки на молокопе-реробному пiдприемствi необхiдно органiзувати но-вий цех для попередження забруднення основного виробництва (цеху з випуску сиру кисломолочного) бактерюфагами. Оскiльки сир кисломолочний, в основному, виробляють на мюьких молочних заводах та комбшатах, дощльно переробляти сирну сироватку на
напо'. Перспективною е органiзацiя виробництва ком-бiнованих напо'в оздоровчого призначення на ochobí неосвiтленоi сироватки (3Í збереженням сироваткових б^юв) з використанням пробютичних бактерiй та вiтчизняноi сировини рослинного походження як дже-рела бюлопчно активних речовин (БАР).
Авторами пропонуеться до розробки напш оздоровчого призначення з антиоксидантними, пробю-тичними й гепатопротекторними властивостями на основi сирноi сироватки. Для забезпечення високих пробютичних i гепатопротекторних властивостей продукту рекомендовано використовувати пробютичш культури лактобацил та/або бiфiдобактерiй [5]. Для тдсилення антиоксидантних i гепатопротекторних властивостей продукту в якост джерела БАР було об-рано поширенi в Укра'ш квiти чорнобривцiв.
Чорнобривцi (латинська назва Tagetes) мають про-тизапальш, антисептичнi, антивiруснi, гепапротек-торнi й тонiзуючi властивостi, широко застосовуються в медицин й парфумерно-косметичнiй галузi [6, 7]. 1снуе 59 видiв чорнобривщв, у тому числi в Укра'ш 3 види: чорнобривцi прямостоячi (Tagetes erecta); чорно-бривцi розлогi (Tagetes patula); чорнобривщ вузьколи-стi (Tagetes tenuifolia), синошм - чорнобривцi позначен (Tagetes signata) [6-8].
Фiтонциднi властивост чорнобривцiв забезпечу-ють iх лжувальне й iнсектицидне значення. Надземна частина Tagetes багата ефiрною олiею жовтого або бур-штинового вiдтiнку з квггково-пряним i фруктовим ароматом, основним компонентом якоi е оцiтомен, частка якого - близько 50 %. У олп також присутнi сабшен, апiнен, лiмоноцен, цитраль, мирцен, лшалоол, тимол, терпiнен та iншi компоненти, що пригшчують рiст i розвиток патогенних мiкроорганiзмiв i грибкiв [9-11]. БАР, виявлеш в складi надземноi частини рос-лини, мають противiрусну активнiсть i е згубними для багатьох штамiв хвороботворних бактерiй i вiрусiв. Тому чорнобривцi, зiрванi тсля Маковея, додають в компоти та чай. Лжувальш напоi з використанням Tagetes змщнюють iмунiтет i допомагають впоратися з респiраторними захворюваннями в перюд '¿х масового спалаху [9, 10].
Каротино'ди, зокрема лютеiн, що мютяться в квiтах чорнобривцiв, володжть протизапальними власти-востями, знижують ризик розвитку захворювання катарактою, сприяють вщновленню гостроти зору, особливо у людей з постшним напруженням зору [12, 13]. Для вiдварiв i настоiв потрiбно використовувати Tagetes оранжевого i жовтого кольорiв, оскiльки вони мютять багато лютеiну.
Настоi з квтв чорнобривцiв допомагають лiкувати тдшлункову залозу, зокрема цукровий дiабет i панкреатит, покращують стан кровоносних судин, мають гепа-топротекторний вплив, заспокоюють нервову систему, особливо при депреаях, розгубленосп, неврозах, не-впевненостi, в стресових ситуащях [10, 11].
З уах груп природних сполук, iдентифiкованих у квиах чорнобривцiв, особливе мiсце займають фла-воно'ди, якi опосередковано через ферментш сис-теми регулюють процеси, що визначають, в першу чергу, стан клиинно' мембрани, та забезпечують ге-патопротекторну, антиоксидантну, протизапальну i ранозагоювальну дж. Широкий спектр дii флаво-ноiдiв пояснюеться '¿х вибiрковiстю по вщношенню
до активних форм кисню (АФК): при гшерпродукцп АФК вони проявляють антиоксидантш властивостi, а при низькому piBrn генерацiï АФК - прооксидант-ш. Основними флавоноïдами в квiтах Tagetes patula е патулетiн i патулирш, також в них iдентифiкованi рутин, робшш, дигiдрокверцетин, кверцетин, гшеро-зид, вщенш, лютеолiн-7-глiкозид, апiгенiн, вiтексiн (сума флавоновдв у перерахунку на патулетш -9,43 % в сухш речовинi). Вiдомо, що патулетiн - ос-новний флавоноïд Tagetes знижуе проникшсть кат-лярiв, мае гшотензивну i дiуретичну дiю, проявляе Р-виамшну активнiсть [8, 14].
Квiти Tagetes patula мютять лейцин (0,95 %), глута-мiнову (1,1 %) й аспарагшову (0,83 %) амiнокислоти, каротинощи (0,005 %), токофероли (0,6 %) i кислоту аскорбшову (1,78 %), двi речовини кумариновоï при-роди - дтдрокумарш i умбеллiферон, фенолкарбо-новi кислоти - галову, хлорогенову, кавову, цикорiеву, ферулову, коричну. Вмют макро- i мiкроелементiв у квиах чорнобривцiв становить 47,0 i 7,28 % (у перерахунку на золу) вщповщно. Встановлено вмют у квитках Tagetes patula пектинових речовин, як воло-дiють сорбцiйними властивостями, водорозчинних полiсахаридiв, гемiцелюлози А i гемщелюлози Б: у полiсахаридному комплект на частку водорозчинних полiсахаридiв приходиться 16,26 %, пектинових речовин - 11,87 %, гемщелюлози А - 0,91 %, гемщелюлози Б - 0,55 % [15, 16].
Незважаючи на корисш властивост чорнобривщв, е протипоказання до '¿х вживання. Не рекомендують використовувати рослину для лжування в перший триместр ваптносп, в перюд лактацп, дiтям до 3 роюв, хворим екземою, при шдивщуальнш непереносимостi i категорп людей, схильних до алергп [6-9].
На основi аналiзу лiтературних даних, у виробни-цтвi напоïв оздоровчого призначення на основi сир-ноï сироватки з тдвищеними антиоксидантними й гепатопротекторними властивостями рекомендовано як фiзiологiчно функцiональний харчовий iнгредiент використовувати настш iз квiтiв Tagetes patula.
З метою надання молочним продуктам нових сма-кових якостей, пщвищення ïхньоï харчовоï та фiзiоло-гiчноï цiнностi до них додають фруктово-ягщш (або ягiднi) наповнювачi. Фрукти та ягоди - незамшне джерело виамжв, пектинiв, фруктовоï клiтковини й залiза. Застосування фруктово-ягiдних (або ягiдних) наповнювачiв при виробництвi молочних виробiв доз-воляе урiзноманiтнити '¿х асортимент [3]. Саме завдя-ки наповнювачам на ринку Украши представлений величезний асортимент молочних продукпв з рiзними смаками.
Для виробника важливою перевагою додавання фруктово-ягщних (або ягщних) наповнювачiв е яскра-вий смак та свiжий аромат кшцевого продукту. Окрiм того, наявшсть наповнювача виключае потребу додавання ароматизаторiв, барвникiв та деяких видiв стабiлiзаторiв [3].
Вiдмiнностi в технологи виготовлення та зберь гання, консистенцп, властивостях продуктiв на ос-новi молочноï сировини зумовлюють застосування фруктово-ягщних та ягщних наповнювачiв з рiзними характеристиками: категорiя «ФП» - наповнювачi гомогенноï консистенцп: вмiст фруктiв або ягщ 35 %; категорiя «Ф» - наповнювачi з шматочками фрукпв
або ягiд розмiром до 5 мм: вмют фруктiв або ягщ 35 %; категорiя «Е» - наповнювачi з шматочками фруктiв або ягщ розмiром до 10 мм: вмют фруктiв або ягiд 40 %, 70 %.
Для виробництва напоïв оздоровчого призначення з пщвищеними харчовою та фiзiологiчною щншстю на основi сироватково-рослинних сумiшей дощльно використовувати фруктово-ягщш або ягiднi наповню-вачi категорп «ФП».
3. Мета та задачi дослiдження
Проведенi дослщження ставили за мету оптимi-зувати компонентний склад напою оздоровчого при-значення з використанням сирноï сироватки, настою з квтв Tagetes patula та ягщного наповнювача «Лiсова ягода».
Для досягнення поставленоï мети вирiшували на-ступш задачi:
- дослiдити процес екстрагування водою бюлопчно активних речовин iз квтв Tagetes patula та обгрун-тувати ращональш параметри процесу;
- оптимiзувати компонентний склад напою оздоровчого призначення на основi сирноï сироватки,настою з квтв чорнобривщв (НЧ) та ягщного наповнювача «Люова ягода» (ЯН);
- визначити хiмiчний склад та показники якост сироватково-рослинноï сумiшi, складеноï з сировин-них компонентiв в оптимальному стввщношенш;
- надати рекомендацп щодо наукового обгрунту-вання технологiй неферментованих i ферментованих напоïв з заданими оздоровчими властивостями на ос-новi сумш^ складеноï з сировинних компонентiв в оптимальному стввщношенш.
4. MaTepia™ та методи on™MÎ3a^ï рецептурного складу напою оздоровчого призначення на ochobï сирно!' сироватки, настою з квiтiв чорнобривщв та ягщного наповнювача
4. 1. Дослщжуваш мaтepiaли, викоpистaнi при проведенш дослiджeння, та мeтодологiя проведення експерименту
Для проведення експериментальних дослщжень в якост основноï сировини використовували сирну сироватку, отриману при виробництвi сиру кисломолочного кислотно-сичужним способом на ТОВ «Гор-молзавод №1» (м. Одеса, Украша) з використанням бакконцентрату L. lactis ssp. безпосереднього внесення FD DVS CH-N 11 («CHR. Hansen», Дашя). Як додаткову сировину було використано сухi квии Tagetes patula (виробник - ЗАТ «Лжтрави», Украша) та ягщний наповнювач «Люова ягода» (виробник - ТОВ «Аграна Фрут Украша»). В якосп екстрагента було використано питну воду згщно вимог ДСанШН 2.2.4-171-10.
Для виробництва напоïв оздоровчого призначення на основi сирноï сироватки можуть бути використаш лише воднi екстракти, у робот здiйснювали екстрагування БАР з квтв Tagetes patula гарячою водою (отримували настш квтв). Для дослщження процесу екстрагування БАР iз квтв чорнобривщв (грунту-ючись на рекомендащях фармаколопв) були обранi
таю параметри: температура екстрагування - 95±5 оС, гвдромодуль 10. Отримання водного екстракту проводили наступним чином: подрiбненi квгги вносили у воду з температурою 95±5 оС у ствввдношенш 1:10 i витримували протягом 80 хв. Шсля 40 хв. екстрагування через кожш 10 хв. вщбирали зразки екстр-акпв, вiдокремлювали трав'яний жом, фiльтрували, рщину-екстракт - настiй з квiтiв чорнобривщв (НЧ) охолоджували до температури 20±1 оС i визначали в ньому бюлопчну активнiсть, вмiст флавоноiдiв та масову частку сухих речовин, за якою розраховували стутнь екстрагування водорозчинних екстрактивних речовин (ВЕР) iз квiтiв за формулою:
СЕ = СЕек'ГМ .100, ВЕР™
(1)
де СЕ - стутнь екстрагування ВЕР i3 квтв чорнобривщв, %; СЕЕК - масова частка сухих речовин у екстракту %; ВЕРКЧ - масова частка ВЕР у квггах чорнобривщв, %; ГМ - гiдромодуль.
Для оптимiзащi рецептурного складу напою оз-доровчого призначення на основi сирноi сироватки, НЧ та ЯН було використано методолопю поверхнi вiдкликy Вказана методолопя [17] е сукупнiстю ма-тематичних та статистичних прийомiв, спрямованих на моделювання процесiв та знаходження комбшацш експериментальних рядiв предикторiв з метою опти-мiзацii функцii вщклику, що в загальному видi опису-еться наступним полiномом:
У(x,b) = bo + £bixi + £bkxk2 + bijxixj ,
=1 k=1
(2)
=1 j=i+1
де x e Rn - вектор змiнних, b - вектор параметрiв.
Визначення невiдомих значень вектора параме-трiв b здшснювали шляхом застосування алгоритмiв регресiйного аналiзу та оптимiзацii (максимiзацii) функцiонала вщхилу (2):
J(x) = l|У - У (x,b)||
(3)
де m - юльюсть експериментальних даних у.
Моделюванню та обробку експериментальних даних виконували за допомогою пакета Statistica 10 (StatSoft, Inc.).
При проведенш експериментальних дослщжень рецептурнi компоненти (сирну сироватку, НЧ та ЯН) змшували у необхщних кiлькостях, отриманi напо' гомогенiзували при температурi 60 °С i тиску 1012 МПа, тсля чого пастеризували при температурi (72±1) °С з витримкою 15-20 сек., охолоджували до температури (20±1) °С i визначали в них бюлопчну активнiсть.
У сироватково-рослиннiй сумш^ складенiй iз си-ровинних компоненпв в оптимальних ствввдношен-нях, визначали хiмiчний склад i основнi показники якосп, за результатами яких робили висновки про можлившть виробництва на ii основi асортиментного ряду напо'в оздоровчого призначення з використан-
ням пробютичних заквашувальних культур лактоба-цил та/або бiфiдобактерiй.
4. 2. Методи експериментальних дослщжень, ви-користанi при проведенш дослщження
При виконаннi дослщжень титровану кислотнiсть сироватки та напо'в визначали титрометричним методом за ГОСТ 3624-92, активну кислотшсть - потенщо-метричним методом за ГОСТ 26781-85, температуру -за ДСТУ 6066:2008, густину - ареометричним методом за ДСТУ 6082:2008, термостшюсть - за алкогольною пробою за ДСТУ 5073:2008; стутнь чистоти - за ДСТУ 6083:2008 ; масову частку сухих речовин - аби-ражним методом за ГОСТ 3626-73, масову частку бшюв - методом Кьельдаля за ДСТУ ISO 8968-1:2005 (IDF 20-1:2001), масову частку жиру - гравiметричним методом за ДСТУ ISO 1211-2002, юльюсть бактерш групи кишкових паличок (колi формних бактерш) -за ГОСТ 30518-97, юльюсть мезофшьних аеробних i факультативно-анаеробних мiкроорганiзмiв (КМА-ФАнМ) - за ДСТУ IDF 100B:2003, сумарний вмшт фла-вонодав у квiтах чорнобривцiв та '¿х водних екстрактах визначали спектрофотометричним методом за [18].
Для ощнки синергетичних i антагонiстичних ефек-тiв антиоксидантних властивостей напою оздоровчого призначення на основi сироватки, НЧ та ЯН, а також сировинних iнгредiентiв, було вибрано показник бю-лопчно' активност - контроль значень електронно-транспортноi активностi в системi: шкотинамщаде-ншдинуклеотид вiдновлений NADfl2 - фероцианiд калт K3[Fe(CN)6] у фосфатному буферi. Критерiем оцiнки бiологiчноi активностi напою оздоровчого призначення на основi сироватки, НЧ та ЯН, а також сировинних iнгредiентiв стало визначення вщношення '¿х оптично' густини у системi NAD•Н2 - K3[Fe(CN)6] до оптично' густини само' системи в чаа [19].
Вибiр цiеi методики обумовлений тим, що NAD е коферментом з ушверсальною бюлопчною роллю i являе собою першу ланку в ланцюзi переносу елек-трону i протону вiд окислювального субстрату до кис-ню. В органiзмi людини концентрацшне вiдношення NAD/NAD•Н2 являе собою одну iз найважливiших ланок всередиш клiтинноi регуляцп енергетичного обмшу i розглядаеться як одна iз програм генерацп аденозинтрифосфорно' кислоти в клииш [19].
В клiтинi переважають процеси, мехашзм яких включае окиснення NADfl2 до NAD i цей мехашзм переносу електрошв вiд окислювального субстрату до кисню е головним джерелом енергп для росту та роз-витку клиини. Таким чином, переходи NAD NADfl2, суттевi для редокс-властивостей клиин i регулюють внутршньо-клиинш метаболiчнi процеси [19].
Здатнiсть рiзних бiологiчно активних речовин (БАР), внесених до сироватки, може викликати неен-зиматичне окиснення NADfl2 до NAD i одночасно вiдновлювати Fe+3 до Fe+2, що свiдчить про здатшсть цих БАР пiдвищувати загальнi антиоксидантш вла-стивостi продукту.
За основу методу ощнки бюлопчно' активностi продукту взята електронно-транспортна модель -NADfl2 - K3 [Fe(CN)6] (рис. 1).
На практищ для визначення бюлопчно' актив-ностi iз приготованих розчишв ферицiанiду калiю K3[Fe(CN)6] концентрацiею 10-3 моль/дм3, буферного
розчину солей Na2HPO4 та KH2PO4 iз рН=7,5 та роз-чину NADH2 концентрацiею 10-3 моль/дм3 готували реакцшну сумiш та знiмали ii оптичну густину на спектрофотометрi СФ-46 при 1=325 нм вщразу пiсля змшування розчинiв та через двi хвилини. Отримува-ли два значення А1К та А2К. Розраховували рiзницю:
А1„ А2„ — А^,, ^ ттК
К К NAD-HK
Рис. 1. Електронно—транспортна модель NADH2
Зразок вносили у реакцшну сумш та вимiрюва-ли оптичну густину А1NAD•Н2, через двi хвилини -А2 NAD-H2. Рiзниця
Д1 — А 9
NAD-H2 NAD-H2
— А„
(5)
е показником, за яким можна судити про бюлопчну актившсть продукту.
Бюлопчну активнiсть напою оздоровчого призна-чення на основi сироватки, НЧ та ЯН, а також сировин-них iнгредiентiв визначали за формулою:
БА —-
А„
А ,
(6)
Залежнiсть бiологiчноi активностi настою чорнобривщв та сумарного вмiсту флавоноiдiв у ньому вщ тривалостi екстрагування наведено на рис. 3, а, б ввд-поввдно.
Бiологiчна активнiсть отриманих НЧ зб^ьшуеться протягом 60 хв. екстрагування i через 60 хв. досягае максимального значення - 230-232 од. акт. (рис. 3, а). Через 70 та 80 хв. екстрагування отримуемо НЧ, бь олопчна актившсть яких на 4,3 та 17,4 % нижча вщ такси для НЧ, отриманого через 60 хв. процесу екстрагування. Це пояснюеть-ся тим, що протягом перших 60 хв. екстрагу-вання у НЧ зб^ьшуеться вмют флавонодав (рис. 3, б), яю е потужними антиоксиданта-ми i характеризуються високими значення-ми бiологiчноi активностi. Через 70 та 80 хв. екстрагування вмкт флавонодав у НЧ знижуеться на 0,7-0,8 та 4,6-4,7 % вщповщно в порiвняннi з таким для НЧ, отриманого протягом 60 хв. екстрагування, що можна пояснити тривалим високотемпературним впливом процесу на флавонощи. Обраний споаб екстрагування БАР з квтв чорнобривцiв забезпечуе екстрагування 45,0-47,8 % флавоновдв вiд '¿х вмюту в сировинi.
(4)
K4[Fe(CN)6] K3[Fe(CN)6] K3Fe(CN)6
и
де БА - бюлопчна активнiсть, од. акт.; Р - розведення продукту, раз.
5. Результати оптимiзацii рецептурного складу напою оздоровчого призначення на основi сирно! сироватки, настою з квтв Tagetes patula та япдного наповнювача «Лшова ягода»
Важливим показником будь-яко1 рослинно' си-ровини е масова частка екстрактивни х речовин - це речовини, як вилучають iз рослиннo'i сировини за до-помогою екстрагента-розчинника (на й чaстiшe - води). 1х умовно под^яють на дiючi (алкалощи, глюкозиди, флавоно'ди, ефiрнi олп, вiтамiни та ш.), вiд яких за-лежать терапевтичш ефекти, та супутш (крохмаль, проте'н тощо). Масова частка ВЕР1 у дослщжених квiтах Tagetes patula складае 25,5 %, що перевищуеви-моги нормативних докуменпв (25,0 %), тому квiти чор-нобривцiв можуть бути використанi для отримання водних екстракпв (насто'в) оздоровчого призначення.
Залежшсть масово' частки сухих речовин у НЧ та ступеню екстрагування ВЕР з квтв чорнобривщв вщ тривалосп екстрагування наведено на рис. 2, а, б вщповщно.
Найвища iнтенсивнiсть процесу екстрагування БАР з квтв Tagetes patula (рис. 2, а) ввдзначаеться протягом перших 60 хв., протягом наступних 10 i 20 хв. швидюсть екстрагування знижуеться, що обумовлено зменшенням юлькост екстрактивних речовин, як залишились у квттах чорнобривцiв. Ступiнь екстрагування ВЕР з квтв Tagetes patula протягом 60 хв. досягае 78,8-78,82 %, а протягом наступних 20 хв. збшьшу-еться лише на 4,65-4,71 % (рис. 2, б).
и
i*
и Я
& *
а т
а
2,2
1,8
1,4
ч
Сц
ы
га *
i i
и
и ад
Й ГЙ
а н
IB
'S
£
о
40 50 60 70 80 Триваують екстрагування, хв
85 80 75 70 65 60
i i i i i
40 50 60 70 80 Триваують екстрагування, хв
Рис. 2. Вплив тривалост екстрагування (хв.) на: а — масову частку сухих речовин (%) у НЧ; б — стушнь екстрагування ВЕР (%) з квтв чорнобривщв
Зважаючи на отримаш результати, дощльно три-валють екстрагування БАР з квтв Tagetes patula вста-новити 60 хв. Отриманий настш з квтв чорнобривщв мае свило-жовте забарвлення, приемний аромат квтв тагетеса, прозорий на вигляд, без тенденцп до утворен-ня осаду. Органолептичнi показники НЧ дозволяють використовувати його як фiзiологiчно функщональний харчовий iнгредiент у виробництвi напо'в оздоровчого призначення на основi сирно' сироватки. Сухi речовини НЧ представлен вуглеводами, органiчними i
а
фенолкарбоновими кислотами, макро- й м^роеле-ментами, флавонощами, вггамшами тощо; в невеликш кiлькостi можуть 6ути присyтнi пектиновi речовини, каротинощи, ефiрна олiя. Отриманий при екстрагу-ваннi БAР з квтв Tagetespatula жом можна використо-вувати в якостi сировини для отримання ефiрноï олп та каротинощв.
250
2 'S
о м cp
< s
200
150
100
40 50 60 70 80 Тривалють екстрагування, хв. а
42,5 40 37,5 35 32,5 30
40 50 60 70 80 Тривалють екстрагування, хв.
min
Olli
Рис. 3. Вплив тривалост екстрагування (хв.) на: а — бюлопчну актившсть (БА, од. акт.) НЧ; б — сумарний вмют флавоноЩв (мг/100 г) у НЧ
Для onraMÎ3a^ï рецептурного складу напою оздоровчого призначення в якос^ сировини використо-вували сирну сироватку, настш з квiтiв Tagetes patula (НЧ), приготований у лабораторних умовах, та ягщ-ний наповнювач «Лкова ягода» (ЯН) категорп «ФП», в якому масова частка япд (малини, полуницi й чор-нищ) складала 35 %, масова частка цукру - 20 % (за да-ними виробника); бюлопчна актившсть ЯН, визначена експериментально - 50,5-51,5 од. акт.
Критерiем оптимiзацiï рецептурного складу напою оздоровчого призначення було обрано його бюлопчну актившсть (БА, од. акт.); незалежними факторами, що вар^вались, - масову частку ЯН (С?, %) та масову частку НЧ (С2, %).
Для моделювання дослщжуваного процесу було обрано функщю вщклику, яка мае вигляд полшому другого ступеню:
БA = b0 + b^ + bn-Ç2 + + b2 C2 + b22^ C2 + b12 C1^ C2,
(7)
де БА - бiологiчна активнiсть, од. акт.; bo - константа; Ci - масова частка ягiдного наповнювача «Лiсова ягода» (ЯН), %; С2 - масова частка настою з квтв чорнобривщв (НЧ), %; bi, bii, b2, b22, bi2 - коефiцiенти для кожного елемента полшома.
В дослщженш використано центральний компо-зицшний ротатабельний план, який найбшьше шдхо-дить для обраного методу оптим1зацп [17]. Виб1р р1вшв та штервал1в вар1ювання фактор1в було здшснено за результатами попередшх експеримент1в та анал1зом лгтературних джерел [3]; масову частку настою з квтв чорнобривщв (НЧ) варшвали в межах 15-20 %; масову частку япдного наповнювача «Люова ягода» (ЯН) - в межах 4-7 %.
Матрицю планування та експериментальш значен-ня функци вщклику представлено в табл. 1.
Таблиця 1
Матриця планування та функц1я в1дклику
Номер доел 1ду Масова частка ЯН, Ci Масова частка НЧ, С2 Бюлопчна актившсть, БА, од. акт.
Кодова-ний рiвень % Кодова-ний рiвень °C
1 4,44 -1 15,73 б5,00
2 -1 4,44 +1 19,27 70,00
3 + 1 б,5б -1 15,73 80,00
4 + 1 б,5б +1 19,27 80,00
5 -V2 4,00 0 17,50 б5,00
6 +V2 7,00 0 17,50 7б,00
7 0 5,50 -V2 15,00 70,00
8 0 5,50 +V2 20,00 80,00
9 0 5,50 0 17,50 80,00
10 0 5,50 0 17,50 80,00
11 0 5,50 0 17,50 80,00
12 0 5,50 0 17,50 80,00
Для перевiрки значущостi коефiцiентiв регресп (7) було побудовано дiаграму Парето, яку представлено на рис. 4 (L - лшшнш ефект, Q - квадратичний е ф ек т).
Рис. 4. Д1аграма Парето
На вказанш дiаграмi Парето (рис. 4) наведено стандартизован коефiцiенти, якi вiдсортовано за абсолют-ними значеннями. Аналiз даних показуе, що ефект взаемодп параметрiв е незначущим, оскiльки колонка оцiнки зазначених ефекпв не перетинае вертикальну лшш, що е 95 %-ною довiрчою ймовiрнiстю. З ураху-ванням цього вказаний член регресп було елiмiновано
з модел1 (7). Отримане при цьому р1вняння з розрахо-ваними коефщ1ентами мае вигляд:
БА = -311,39 + 48,78-С4 -- 4,00^С.2 + 26,54С - 0,72 • С2
(8)
Адекватшсть розробленоi модел1 (8) перев1ряли методом дисперсшиого анал1зу, результати якого представлено в табл. 2.
Таблиця 2
Дисперстний aнaлiз моделi
Фактор Сума квадрапв, 55 Сту- пшь свобо-ди, df Середие значения квадрата, МБ ^-критее р1й Р1веиь значу-щосп, р
Масова частка ЯН (Ъ) 205,5724 1 205,5724 48,12256 0,000224
Масова частка ЯН (а) 129,5642 1 129,5642 30,32976 0,000900
Масова частка НЧ (Ц 45,7750 1 45,7750 10,71551 0,013609
Масова частка нч (а) 32,4158 1 32,4158 7,58824 0,028312
Похибка 29,9030 7 4,2719
Загальиа сума квадрапв 423,0000 11
Коефщеит детермшаци R2=0,929
Даш, иаведеш в табл. 2, та значения коефвдеита детермшацп (R2), близьке до одинищ, дозволяють зробити висиовок, що отримана модель (8) адекватно описуе вщклик.
Описаний полшомом (8) сукупиий вплив масовоi частки ЯН (С1, %) та масовоi частки НЧ (С2, %) на б1о-лопчиу актившсть напою оздоровчого призиачеиия на основ! сирио' сироватки, настою з квшв чориобрившв та япдиого иаповиювача «Лшова ягода» в граф1чному вигляд1 представлено на рис. 5.
Зб1льшення в рецептур! напою оздоровчого при-значення масово' частки НЧ (С2) вщ 15,0 до 18,5 % та масово' частки ЯН (С1) вщ 4,0 до 6,2 % сприяе шдви-щеиию БА шльового продукту вщ 55,0-55,5 од. акт. до 81,7-82,0 од. акт. (рис. 5), що, напевне, обумовлено синерпзмом введених до складу напою компоненив сирно' сироватки 1 БАР рослинного походження у зазначених кшькостях. Подальше збшьшеиия в рецептур! продукту масово' частки НЧ (С2) вщ 18,5 до 20,0 % та масово' частки ЯН (С1) вщ 6,2 до 7,0 % сприяе зниженню БА напою до 70,0-71,3 од. акт., що, напевне, пояснюеться аитагошзмом введених до його складу БАР рослинного походження у зазначених концен-тращях з основними складовими сирно' сироватки.
Найвище значення бюлопчно' активиост - 81,782,0 од. акт. (рис. 5) щльовий продукт мае при масовш частщ настою з квшв Tagetes раЫ1а 18,5 % та масовш частщ япдиого наповнювача «Лшова ягода» 6,2 %, тому зазиачеш параметри фактор1в варшваиия е опти-мальними. При цьому оптимальна масова частка сир-но' сироватки у напо' повинна складати 75,3 %.
Х1м1чний склад та осиовш показиики якост сиро-ватково-рослииио' сум1ш1, отримаио' 1з використаиих сировиииих компоиеипв в оптимальних сшввщио-шеииях, иаведеш в табл. 3.
Рис. 5. Залежнють бюлопчноТ активностi напою оздоровчого призначення на основi сирноТ сироватки, настою з квтв Taдetes ра^1а та япдного наповнювача «Люова ягода» вiд масовоТ частки ЯН i масовоТ частки НЧ
Таблиця 3
Хiмiчний склад, органолептичш, фiзико-хiмiчнi, бiохiмiчнi та м^робюлопчш показники якостi сумiшi сирноТ сироватки, НЧ та ЯН (п=3, Р>95,0)
Наймеиуваиия показиика Значения та характеристика показника
Масова частка сухих речовии, %, в т. ч.: 8,20±0,15
- бтюв 0,52±0,04
- жиру 0,30±0,05
- лактози 3,00±0,10
- мшеральних речовии 0,90±0,05
- цукру 1,22±0,02
- моиоцукр1в (глюкози, фруктози) 1,31±0,03
Вмют флавоиодав, мг/100 г 7,75±0,02
Смак та запах Чистий, солодкий, з вираженим присмаком 1 ароматом люових япд, виесеиих з иаповиювачем, незначним сироватковим при-смаком I легким ароматом квшв чорнобривщв
Зовшшиш вигляд та консистен-щя Одиорiдиа нашвпрозора рiдииа без пластiвцiв бiлка та грудочок жиру
Кол1р Рожевий, обумовлеиий внесе-иим ЯН, однорщний по вс1й мам сумш!
Титрована кислотнють, °Т 72,5±2,5
Активна кислотшсть, од. рН 4,85±0,05
Густииа, кг/м3 1035,0±1,5
Бюлопчиа актившсть, од. акт. 81,0...82,0
КМАФАнМ, КУО/см3 (1,8...3,4)-102
БГКП в 0,1 см3 В1ДСУТИ1
Дослщжеиа сироватково-рослиииа сум1ш з опти-мальиим спiввiдиошеииям сировиииих компоиеипв мае иормоваш для сироваткових иапо'в фiзико-хiмiчиi
й мжробюлопчш показники; високi антиоксидантнi властивосп, гарнi органолептичнi характеристики, зокрема приемш колiр, смак i запах, що обумовлено внесенням до ii складу япдного наповнювача й настою квтв Tagetes patula. Отже, розроблена сумш може бути основою для виробництва неферментованих i ферментованих напо'в оздоровчого призначення.
6. Обговорення результаив оптимiзацiï рецептурного складу напою оздоровчого призначення на основi сирно!' сироватки, настою з квтв Tagetes patula та япдного наповнювача «Лшова ягода»
Найпростший спос1б використання розробленоТ сироватково-рослинноТ сум1ш1 - це ïï теплове обро-блення (пастеризащя) з подальшим охолодженням i фасуванням в тару з метою одержання питного напою оздоровчого призначення. Перед тепловим оброблен-ням для надання продукту додаткових оздоровчих властивостей можливо збагачення сироватково-рос-линноТ сумiшi мшеральними речовинами, вггамшами, пребiотиками, пектиновими речовинами або Тх комплексами (це перша група напоТв оздоровчого призначення). Але таю напоТ матимуть досить обмежений термш збертння (не бiльше 7 д1б) за рахунок використання м'якого режиму пастеризацп - (72±1) °С з витримкою 15-20 сек.
Для наукового обгрунтування технологiй напоТв оздоровчого призначення на основ! рекомендовано' сироватково-рослинноТ сум1ш1 з оптимальним ком-понентним складом необхщно врахувати той факт, що за умови застосування у 'х технолопях про61отичних культур лактобацил та/або бiфiдобактерiй можливе не т1льки подовження термшу Тх зберiгання (до 14-21 доби), але й тдсилення гепатопротекторних i пробю-тичних властивостей. Тому авторами пропонуеться до розробки ще дв1 групи напоТв:
- друга - неферментоваш 61ф1довм1сн1 напоТ оздоровчого призначення, збагачеш активiзованими культурами пробютичних штамiв бiфiдобактерiй, як1 згщно класифiкацiï [5] в1дносяться до четвертоТ групи 61ф1довм1сних продукт1в (напоТ можуть бути додатко-во збагаченi пребютиками, тод1 вони матимуть син-бютичш властивостi, або мiнеральними речовинами, виамшами, пектиновими речовинами тощо);
- третя - напоТ, ферментованi монокультурами L. acidophilus (ацидофшьш), монокультурами або зм1-шаними культурами Bifidobacterium (61ф1довм1сн1, як1 зг1дно класифiкацiï [5] в1дносяться до третьоТ
групи 61ф1довм1сних продукт1в), заквашувальни-ми композиц1ями 1з монокультур L. acidophilus (або змшаних культур L. lactis ssp. або змiшаних культур S. thermophilus+L. bulgaricus) i монокультур або змшаних культур Bifidobacterium (61ф1довм1сн1, як1 зг1дно класифiкацiï [5] вщносяться до п'ятоТ групи 61ф1довм1сних продукт1в). НапоТ третьоТ групи також можуть бути додатково збагачеш мшеральними речовинами, виамшами, пребютиками, пектиновими речовинами або Тх комплексами.
Перспективами подальших дослщжень е: науко-во-практичне обгрунтування рецептур i технолопчних параметрiв виробництва неферментованих i ферментованих сироватково-рослинних напоТв оздоровчого призначення трьох груп, розробка нормативно' доку-ментацп 'х на виробництво; проведення промисловоТ апробацiï розроблених технологiй.
7. Висновки
1. Обгрунтовано рацiональнi параметри процесу екстрагування БАР з квтв Tagetes patula питною водою: температура (95±5) °С, тривалiсть 60 хв., пдро-модуль 10. Отриманий настш з квтв чорнобривщв м1стить 2,0 % сухих речовин, в т. ч. флавоновдв -42,1-42,3 мг/100 г, що обумовлюе в ньому високу 61-олопчну актившсть - 230-232 од. акт. Тому настш з квтв Tagetes patula рекомендовано використовувати як ф1зюлопчно функцюнальний харчовий iнгредiент у виро6ництв1 напоТв оздоровчого призначення на основ1 сирноТ сироватки.
2. Встановлено оптимальне ствввдношення сирноТ сироватки, настою з квтв Tagetes patula та япдного наповнювача «Люова ягода» - 73,8; 18,5 та 6,2 % вщпо-вщно, як компоненпв сироватково-рослинноТ основи для виробництва напоТв оздоровчого призначення.
3. Показано, що сироватково-рослинна сумм може бути основою для виробництва неферментованих i ферментованих напоТв оздоровчого призначення, осюльки мае нормованi для щеТ групи продукт1в ф1зи-ко-х1м1чш й м1кро61олог1чн1 показники; висок1 анти-оксидантнi й органолептичнi властивостi.
4. Запропоновано використовувати розроблену си-роватково-рослинну сумм як основу для виробництва двох груп неферментованих i одшеТ групи ферментованих сироватково-рослинних напоТв оздоровчого призначення, додатково збагачених мшеральними речовинами, виамшами, пребютиками, пектиновими речовинами або Тх комплексами.
Лиература
1. Гаврилов, Г. Б. Пути рационального использования молочной сыворотки [Текст] / Г. Б. Гаврилов, Э. Д. Кравченко // Маслоделие и сыроделие. - 2013. - № 2. - С. 10-13.
2. Чагаровський, О. П. Хгмгя молочно'1 сировини [Текст]: навч. пос. / О. П. Чагаровський, Н. А. Ткаченко, Т. А. Лисогор. - Оде-са: «Омекс-пршт», 2013. - 268 с.
3. Технология молочных продуктов: Справочник [Текст]: учеб. - Tetra Pak. М., 2011. - 440 c.
4. Ткаченко, Н. А. Обгрунтування параметров пастеризацп' 61ф1довм1сно'1 молочно'1 сироватки в технологиях ферментованих функцюнальних молочних напо'1'в [Текст]: мгжн. наук.-прак. конф./ Н. А Ткаченко, П. О. Некрасов, О. В. Дщик // 1нноваа цшш аспекти розвитку обладнання харчово!' i готельно'1 шдустрп' в умовах сучасность - Харкав : ХДУХТ, 2015. - С. 321-322.
5. Дщух, Н. А. Заквашувальш композици для виробництва молочних продуктов функционального призначення [Текст] / Н. А. Дщух, О. П. Чагаровський, Т. А. Лисогор. - Одеса: Видавництво «Полиграф», 2008. - 236 с.
6. Faizi, S. Bioassay-guided isolation of antioxidant agents with analgesic properties from flowers of Tagetes patula [Text] / S. Faizi, A. Dar, H. Siddiqi, S. Naqvi, A. Naz, S. Bano, N. Lubna // Pharmaceutical Biology. - 2011. - Vol. 49, Issue 5. - Р. 516-525. doi: 10.3109/13880209.2010.523006
7. Gong, Y. Investigation into the antioxidant activity and chemical composition of alcoholic extracts from defatted marigold (Tagetes erecta L.) residue [Text] / Y. Gong, X. Liu, W.-H. He, H.-G. Xu, F. Yuan, Y.-X. Gao // Fitoterapia. - 2012. - Vol. 83, Issue 3. -Р. 481-489. doi: 10.1016/j.fitote.2011.12.013
8. Yasukawa, K. Effects of Flavonoids from French Marigold (Florets of Tagetes patula L.) on Acute Inflammation Model [Text] / K. Yasukawa, Y. Kasahara // International Journal Of Inflammation. - 2013. - Vol. 2013. - Р. 1-5. doi: 10.1155/2013/309493
9. Politi, F. Anti-Candida Activity in Vitro of Tagetes patula L. (Asteraceae) Extracts [Text] / F. Politi, V. Watanabe, G. Figueira, R. Pietro // Planta Medica. - 2013. - Vol. 79, Issue 10. doi: 10.1055/s-0033-1348567
10. Ali, A. Chemical composition of Tagetes patula essential oil and its bioactivity against Aedes aegypti [Text] / A. Ali, N. Tabanca, B. Demirci, E. Amin, I. Khan, // Planta Medica. - 2015. - Vol. 81, Issue 5. doi: 10.1055/s-0035-1545156
11. Zuorro, A. New functional food products containing lutein and zeaxanthin from marigold (Tagetes erecta L.) flowers [Text] / A. Zuorro, R. Lavecchia, // Journal of Biotechnology. - 2010. - Vol. 150. - Р. 296-296. doi: 10.1016/j.jbiotec.2010.09.247
12. Manke Natchigal, A. Quantification and characterization of lutein from tagetes (tagetes patula l.) And calendula (calendula officinalis l.) Flowers [Text] / A. Manke Natchigal, A. Oliveira Stringheta, M. Correa Bertoldi, P. Stringheta // Acta Horticultu-rae. - 2012. - Vol. 939. - Р. 309-314. doi: 10.17660/actahortic.2012.939.40
13. Khalil, M. Stability and bioavailability of lutein ester supplements from Tagetes flower prepared under food processing conditions [Text] / M. Khalil, J. Raila, M. Ali, K. Islam, R. Schenk, J. Krause et al. // Journal of Functional Foods. - 2012. - Vol. 4, Issue 3. -Р. 602-610. doi: 10.1016/j.jff.2012.03.006
14. Ramakrishnan, P. Cognitive enhancing, anti-acetylcholinesterase, and antioxidant properties of Tagetes patula on scopolamine-induced amnesia in mice [Text] / P. Ramakrishnan, T. Chandrasekhar, P. Muralidharan // International Journal of Green Pharmacy. - 2015. - Vol. 9, Issue 3. - Р. 167. doi: 10.4103/0973-8258.161234
15. Martínez, R. Chemical Composition of Essential Oils and Toxicological evaluation of Tagetes erecta and Tagetes patula from Venezuela [Text] / R. Martínez, B. Diaz, L. Vásquez, R. Compagnone, S. Tillett, D. Canelón et al. // Journal of Essential Oil Bearing Plants. - 2009. - Vol. 12, Issue 4. - Р. 476-481. doi: 10.1080/0972060x.2009.10643747
16. Prakash, O. Composition of essential oil, concrete, absolute and SPME analysis of Tagetes patula capitula [Text] / O. Prakash, P. Rout, C. Chanotiya, L. Misra // Industrial Crops And Products. - 2012. - Vol. 37, Issue 1. - Р. 195-199. doi: 10.1016/ j.indcrop.2011.11.020
17. Myers, R. Response surface methodology [Text] / R., Myers, D. Montgomery, C. Anderson-Cook. - New York: John Wiley & Sons, 2009.
18. Сорокина, О. Н. Спeктрофотомeтричeскоe опрeдeлeниe суммарного содeржания флавоноидов в лeкарствeнных npenapaTax раститeльного происхождeния [TeKCT] / О. Н. Сорокина, Е. Г. Сумина, А. В. Штракова, С. В. Барышeва // Извeстия Саратовского ун-та. Новая сeрия. Сeр. Химия. Биология. Экология. - 2013. - T. 13, Вып. 3. - С. 8-11.
19. ^Tern на винахщ 107506 С2, МПК G 01N 33/00 (2015.01). Споаб визначeння бюлопчно! активност об'екпв природного походжeння ^кст] / Хомич Г. П., Вшуль С. I., Капрeльянц Л. В., Осипова Л. А., Лозовська T. С. - Власник Одeська нащо-нальна акадeмiя харчових тeхнологiй. - № u 201302626; заявл. 04.03.2013; опубл. 12.01.2015, Бюл. № 1.
