CC BY
178
Химия растительного сырья. 2014. №2. С. 177-180.
DOI: 10.14258/jcprm.1402177
УДК 615.322.074 : 547.586.5 : 582.933
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ГИДРОКСИКОРИЧНЫХ КИСЛОТ В ЛИСТЬЯХ ПОДОРОЖНИКОВ БОЛЬШОГО (PLANTAGO MAJOR L.) И СРЕДНЕГО (PLANTAGO MEDIA L.)
© T.B. Хортецкая, Г.П. Смойловская , A.B. Мизулин, Г.В. Мизулин
Запорожский государственный медицинский университет, пр. Маяковского, 26, Запорожье, 69035 (Украина), e-mail: smoilovskaj@ukr.net
Методом тонкослойной хроматографии установлен качественный состав гидроксикоричных кислот в листьях подорожника большого и подорожника среднего. Проведено сравнительное спектрофотометрическое определение суммы орто-дигидрокоричной кислоты и хлорогеновой кислоты в исследуемых видах.
Ключевые слова: виды рода подорожник, гидроксикоричные кислоты, актеозид, хлорогеновая кислота.
Введение
Крупнейшим родом семейства Plantaginaceae Juss. является род Plantago L., который включает около 275 видов однолетних и многолетних трав и полукустарников, распространенных во всем мире [1, 2].
Широкое использование в традиционной и народной медицине видов рода Plantago L . обусловлено наличием разнообразных целебных свойств: кровоостанавливающих, противомикробных, отхаркивающих, вяжущих, мочегонных и успокаивающих. Кроме того, исследования последних лет подтверждают, что некоторые виды подорожника проявляют противовоспалительное, иммунорегулирующее, антиоксидантное, цитотоксическое действие [2, 3].
Проведенные исследования указывают на высокую перспективность растений для применения в медицине в качестве источника биологически активных соединений. Одноко большинство из представителей рода Plantago L. не описаны с точки зрения фитохимического состава и биологической активности. Важным остается и вопрос об определении маркеров, характеризующих фармакологическую активность растений и препаратов на его основе.
Исследования, проведенные I.N. Beara с соавт., подтверждают наличие высокой антиоксидантной, противовоспалительной и цитотоксической активности Plantago altissima L. и Plantago lanceolata L. Доказано наличие связи между фармакологической активностью и содержанием в растительном сырье фенольных соедине -ний, в том числе гидроксикоричных кислот [3].
N. Ronsted с соавт. предлагают использование в качестве маркеров рода подорожник иридоидов и ги-
Хортецкая Тая Владимировна - ассистент кафедры фармакогнозии, фармацевтической химии и технологии
лекарств, тел.: +380 612 34-23-31 дроксикоричных кислот (caffeoyl phenylethanoid glyco-
Смойловская Галина Павловна - старший sides) как основных действующих компонентов [4].
преподаватель кафедры фармакогнозии в отечественной и зарубежной нормативной до-
фармацевтической химии и технологии лекарств,
тел.: +380 612 34-23-31, e-mail: smoilovskaj@ukr.net кументации содержание гидроксикоричных кислот
Мазулин Александр Владленович - заведующий стандартизируется в лекарственном сырье артишока,
кафедрой фармакогнозии, фармацевтической химии и крапивы двудомной, мелиссы лекарственной и др. [5].
технологии лекарств, доктор фармацевтических наук,
профессор, тел.: +380 612 34-23-31
Мазулин Георгий Владленович - ассистент кафедры
Государственная фармакопея Украины 1-го издания в статье «Подорожника большого листья» регламентиру-
фармакогнозии, фармакологии и ботаники, ет определение содержания суммы производных орто-
тел.: +380 612 34-23-31
дигидрокоричных кислот в перерасчете на актеозид [6].
* Автор, с которым следует вести переписку.
Гидроксикоричные кислоты являются наиболее распространенными полифенольными кислотами высших растений, которые проявляют в экспериментах антиоксидантные, антирадикальные свойства, обладают иммуностимулирующей, противовирусной и противовоспалительной активностью [4, 7-9].
Цель нашей работы - изучение содержания гидроксикоричных кислот в листьях фармакопейного вида подорожника большого (Plantago major L.) и филогенетически близкого к нему вида подорожника среднего (Plantago media L.).
Экспериментальная часть
В качестве объектов исследования использовали листья подорожника (п.) большого (Plantago major L.), п. среднего (Plantago media L.), собранные в различных регионах Украины в период интенсивного цветения в июне - июле 2010-2011 гг.
Сбор сырья проводился по общепринятым методикам. Сушка листьев осуществлялась в сушильном шкафу при температуре 50 °С.
Для качественного определения гидроксикоричных кислот использовали реакцию с 3% раствором хлорида железа (III) на 50% спиртовый экстракт воздушно-сухого сырья (1 : 5), измельченного до диаметра 1-2 мм.
При идентификации гидроксикоричных кислот полученный экстракт сгущали и подвергали хрома-тографическому разделению на пластинках Sorbfil АФ-А. В качестве системы растворителей использовали этилацетат - этиловый спирт (95 : 5) и уксусную кислоту 15%. Детектирование веществ на хроматограм-мах проводили по флуоресценции в УФ-свете до и после обработки парами гидроксида аммония и диазо-реактива, а также по сравнительным значениям Rf со стандартными образцами.
Количественное содержание суммы орто-дигидроксикоричных кислот в сырье определяли спектрофото -метрическим методом. Для этого 1,0 г сырья (точную навеску) измельчали до диаметра 1 мм, помещали в колбу и добавляли 100 мл 50% этилового спирта, нагревали на водяной бане с обратным холодильником в течение 1 ч. После охлаждения фильтровали в мерную колбу на 100 мл, доводили до метки спиртом (раствор 1).
1 мл раствора 1 помещали в мерную колбу на 10 мл и добавляли 2 мл 0,5 М раствора хлористоводородной кислоты, 2 мл раствора 2 и 2 мл раствора гидроксида натрия. Полученный раствор доводили очищенной водой до метки. Обязательным условием являлось перемешивание после каждого добавления pea -гентов. Раствор 2 готовили разведением 10 мл нитрита натрия и 10 г натрия молибденовокислого в 100 мл очищенной воды.
В качестве компенсационного использовали раствор, содержащий 1 мл раствора 1, 2 мл 0,5 М раствора хлористоводородной кислоты, 2 мл раствора гидроксида, доведенный водой очищенной до метки.
Оптическую плотность определяли сразу после приготовления исследуемого и компенсационного раствора при длине волны 525 нм на спектрофотометре Specord-200 Analytic Jena UV-vis. Расчет содержания проводили по формуле:
v A -10000
X —-,
185 • m
где А - оптическая густота исследуемого раствора при длине волны 525 нм; m - масса навески сырья, г; 185 - удельный показатель поглощения стандартного образца актеозида при волны 525 нм.
Количественное содержание хлорогеновой кислоты проводили по разработанной нами методике с использованием полученного ранее раствора 1. 1 мл данного раствора помещали в мерную колбу на 10 мл, доводили до метки 50% этиловым спиртом. Оптическую плотность определяли при длине волны 327 нм.
В качестве стандартного образца использовали 50% спиртовой раствор стандарта хлорогеновой кислоты фирмы Aldrich Lot SLBF3987V (содержание >95 %).
Результаты и их обсуждение
При проведении химических реакций на гидроксикоричные кислоты, во всех растворах появлялось сине-зеленое окрашивание раствора различной интенсивности, свидетельствовавшее о присутствии в исследуемых образцах данных веществ.
При проведении тонкослойной хроматографии детектирование в УФ-свете до и после обработки парами аммония гидроксида и диазореактива показало наличие 4 веществ, которые в УФ-свете имели светло-голубую или голубую флюоресценцию, а после обработки парами аммония гидроксида свечение менялось на зеленое и желто-зеленое, что является характерным для класса гидроксикоричных кислот. После обработки хроматограмм диазореактивом пятна приобретали окраску от желто-коричневой до коричневой.
Определение содержания гидроксикоричных кислот
179
По характерному свечению в УФ-свете, величине Rf, окраске иятен после проявления парами аммония гидроксида и диазореактива, а также при сравнении с образцами кислоты хлорогеновой (фирма Aldrich Lot SLBF3987V, содержание >95%), неохлорогеновой (фирма Sigma Lot BCBK2340V, содержание >98%) и литературными данными в исследуемых образцах достоверно обнаружено присутствие хлорогеновой и неохлорогеновой кислот; предположительно - актеозида, плантамайозида.
При спектрофотометрическом определении суммы производных орто-дигидроксикоричных кислот расчет содержания производился в пересчете на актеозид при длине волны 525 согласно методике Государственной фармакопеи Украины 1-го издания [6].
Анализ УФ-спектров показывает присутствие на всех хроматограммах максимума поглощения при длине волны 510 нм и плеча при 525 нм (рис. 1), что позволяет предположить присутствие в изученном лекарственном сырье помимо актеозида других гидроксикоричных кислот.
Так как при проведении предварительных исследований с помощью ТСХ достоверно идентифицирована хлорогеновая кислота, нами разработана методика ее спектрофотометрического определения с использованием стандартного образца (рис. 2).
Полученные данные определения суммы орто-дигидрокоричных кислот и хлорогеновой кислоты в листьях п. большого и п. среднего представлены в таблице.
Установлено большее содержание суммы орто-дигидроксикоричных кислот в листьях п. большого (до 1,616±0,035%). Меньшее количество гидроксикоричных кислот характерно для листьев п. среднего (до 1,518±0,028%). Полученные данные коррелируются с накоплением в исследуемом сырье хлорогеновой кислоты. Концентрация данной гидроксикоричной кислоты в листьях п. большого колеблется от 0,101±0,012 до 0,129±0,010%, в п. среднем - от 0,095±0,004 до 0,109±0,009%.
Анализ полученных данных свидетельствует о возможности использования данных методик для определения содержания гидроксикоричных кислот в лекарственном сырье видов рода подорожник.
[а]
0.Э 0.85 0.S 0.75
Л
5 10 5 20 5 30 5 40 [rim
[а]
0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 01
/
Г
275 300 325 3 50 [nm]
Absorbance
Рис. 1. УФ-спектр 50% спиртового экстракта листьев подорожника большого (1 : 100)
Рис. 2. УФ-спектр 50% спиртового экстракта листьев подорожника большого (1 : 100) - I; раствор стандартного образца хлорогеновой кислоты (фирма Aldrich Lot SLBF3987V) (10 мкг/мл) - II
Количественное содержание гидроксикоричных кислот в листьях Plantago major L. и Plantago media L. флоры Украины ( x + Д x %), ц = 6
Содержание
№ Место заготовки сумма о-дигидрокси-коричных кислот хлорогеновая кислота
1 П. большой, Симферополь АР Крым, 05.07.2011 1,551±0,069 0,110±0,012
2 П. большой, г. Орехов, Запорожская обл., 01.07.2010 1,593±0,042 0,120±0,013
3 П. большой, г. Новотроицкое, Херсонская обл., 05.07.2011 1,616±0,035 0,129±0,010
4 П. средний, г. Васильевка, Запорожская обл., 02.08.2010 1,176±0,039 0,095±0,004
5 П. средний, п.г.т. Кушугум, Запорожская обл., 03.08.11 1,253±0,027 0,101±0,010
6 П. средний, г. Дружковка, Донецкая обл., 01.07.10 1,518±0,028 0,109±0,009
Выводы
В результате проведенных исследований методом ТСХ достоверно идентифицированы хлорогено -вая и неохлорогеновая кислоты. Методом спектрофотометрии определены сумма о-дигидроксикоричных кислот, а также содержание хлорогеновой кислоты в подорожнике большом и п. среднем. Результаты качественного и количественного определения подтвердили систематическую близость между п. большим и п. средним. Полученные данные показывают возможность использования п. среднего в качестве дополнительного источника лекарственного растительного сырья к официальному виду подорожника большого и перспективность их использования в фармацевтической промышленности.
Список литературы
1. Rensted N., Franzyk H., Melgaard P., Jaroszewski1 J.W., Jensen S.R. Chemotaxonomy and evolution of Plantago L. // Plant Syst. Evol. 2003. Vol. 242. Pp. 63-82.
2. Olennikov D.N., Samuelsen A.V., Tankhaeva L.M. Khimiia rastitel'nogo syr'ia, 2007, no. 2, pp. 37-50. (in Russ.).
3. Beara I.N., Lesjak M.M., Orcic D.Z., Simin N.B., Cetojevic-Simin D.D., Bozin B.N., Mimica-Dukic N.M. Comparative analysis of phenolic profile, antioxidant, anti-inflammatory and cytotoxic activity of two closely-related Plantain species: Plantago altissima L. and Plantago lanceolata L. // LWT - Food Science and Technology. 2012. Vol. 47. Pp. 64-70.
4. Rensted N., Gobel E., Franzyk H., Jensen S.R., Olsen C.E. Chemotaxonomy of Plantago. Iridoid glucosides and caffeoyl phenylethanoid glycosides // Phytochemistry. 2000. N55. Pp. 337-348.
5. Медведьев Ю.В., Передеряев О.И., Арзамасцев А.П., Эллер К.И., Прокофьева В.И. Определение гидроксикоричных кислот в лекарственном растительном сырье и объектах растительного происхождения // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2010. №3. С. 25-31.
6. Державна Фармакопея Украши. Доповнення 3. Харюв, 2009. С. 202-205.
7. Брыкалов А.В., Головкина Е.М., Велик Е.В., Бостанова Ф.А. Исследование физиологически активных соединений в препарате из эхинацеи пурпурной // Химия растительного сырья. 2008. №3. С. 89-91.
8. Мельник О.А., Унгурян Л.М. Пошук лжарських 3aco6iB на основ! рослинно! сировини, що мктять кислоту хлорогенову // Фармацевтичний часопис. 2011. №1. С. 90-94.
9. Левицкий А.П., Вертикова Е.К., Селиванская И.А. Хлорогеновая кислота: биохимия и физиология // MiKpo6i-олопя i бютехнолопя. 2010. №2. С. 6-20.
Поступило в редакцию 28 мая 2013 г.
Khortetskaya T.V., Smoylovskaya G.P. *, Mazulin A.V., Mazulin G.V. DETERMINATION OF HYDROXYCINNAMIC ACIDS IN LEAVES OF PLANTAIN PLANTAGO MAJOR L. AND PLANTAGO MEDIA L.
Zaporozhye State Medical University, Maiakovskogo ave., 26, Zaporozhye, 69035 (Ukraine), e-mail: smoilovskaj@ukr.net
By the method of thin layer chromatography is set the qualitative composition of hydroxycinnamic acids in the leaves of plantain Plantago major L. and Plantago media L. A comparative spectrophotometric determination of ortodihydrocennamic acid and chlorogenic acid amount has carried out in studied species.
Keywords: species of the genus of plantain, hydroxycinnamic acids, akteozid, chlorogenic acid.
References
1. Rensted N., Franzyk H., Melgaard P., Jaroszewskil J.W., Jensen S.R. Plant Syst. Evol., 2003, vol. 242, pp. 63-82.
2. Olennikov D.N., Samuelsen A.V., Tankhaeva L.M. Khimiia rastitel'nogo syr'ia, 2007, no. 2, pp. 37-50. (in Russ.).
3. Beara I.N., Lesjak M.M., Orcic D.Z., Simin N.B., Cetojevic-Simin D.D., Bozin B.N., Mimica-Dukic N.M. LWT -Food Science and Technology, 2012, vol. 47, pp. 64-70.
4. RenstedN., Göbel E., Franzyk H., Jensen S.R., Olsen C.E. Phytochemistry, 2000, no. 55, pp. 337-348.
5. Medved'ev Iu.V., Perederiaev O.I., Arzamastsev A.P., Eller K.I., Prokofeva V.I. Voprosy biologicheskoi, med-itsinskoi i farmatsevticheskoi khimii, 2010, no. 3, pp. 25-31. (in Russ.).
6. Derzhavna Farmakopeja Ukrai'ny. Dopovnennja 3. [Pharmacopoeia of Ukraine]. Kharkiv, 2009, pp. 202-205. (in Ukr.).
7. Brykalov A.V., Golovkina E.M., Belik E.V., Bostanova F.A. Khimiia rastitel'nogo syr'ia, 2008, no. 3, pp. 89-91. (in Russ.).
8. Mel'nyk O.A., Ungurjan L.M. Farmacevtychnyj chasopys, 2011, no. 1, pp. 90-94. (in Ukr.).
9. Levitskii A.P., Vertikova E.K., Selivanskaia I.A. Mikrobiologija i biotehnologija, 2010, no. 2, pp. 6-20. (in Russ.).
Received May 28, 2013
* Corresponding author.
