CC BY
159
№ 1 - 2014 г.
14.00.00 медицинские и фармацевтические науки УДК 615.322:577.127.4]-543.544
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФЛАВОНОИДОВ И ГИДРОКСИКОРИЧНЫХ КИСЛОТ В ТРАВЕ TROPAEOLUM MAJUS L. МЕТОДОМ ВЭЖХ
С. М. Марчишин, С. С. Козачок, А. А. Баев, Г. Р. Козыр
ГВУЗ «Тернополъский государственный медицинский университет имени И. Я. Горбачевского» МЗ Украины (г. Тернополъ, Украина)
Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с УФ-детектором определен качественный состав и количественное содержание флавоноидов и гидроксикоричных кислот в траве настурции большой (Tropaeolum majus L.). Установлено, что исследуемый объект в наибольшем количестве содержит изокверцитрин и хлорогеновую кислоту.
Ключевые слова: флавоноиды,гидроксикоричныекислоты, Tropaeolum majus L., ВЭЖХ.
Марчишин Светлана Михайловна — доктор фармацевтических наук, профессор, заведующий кафедрой фармакогнозии с медицинской ботаникой ГВУЗ «Тернопольский государственный медицинский университет имени И. Я. Горбачевского», рабочий телефон: 0352520518, e-mail: svitlanafarm@ukr.net
Козачок Соломия Степановна — магистр фармации, ассистент кафедры фармакогнозии с медицинской ботаникой ГВУЗ «Тернопольский государственный медицинский университет имени И. Я. Горбачевского», рабочий телефон: 0352520518, e-mail: ternomiya@yahoo.com
Баев Алексей Александрович — соискатель кафедры фармакогнозии с медицинской ботаникой ГВУЗ «Тернопольский государственный медицинский университет имени И. Я. Горбачевского», e-mail: ternomiya@yahoo.com
Козыр Галина Романовна — кандидат фармацевтических наук, доцент кафедры управления и экономики фармации с технологией лекарств ГВУЗ «Тернопольский государственный медицинский университет имени И. Я. Горбачевского», e-mail: ternomiya@yahoo.com
Настурция большая (Tropaeolum majus L.) — травянистый однолетник семейства настурциевые (Tropaeolaceae). Листья очередные, длинночерешковые, цветки неправильные, оранжевые с красными полосками. Все растение — молотые стебли,
листья, цветочные почки и незрелые плоды — имеет приятныи острый вкус и специфический запах. Настурция издавна использовалась в кулинарии как приправа к салатам, мясным, овощным и яичным блюдам. Водный настой травы применяется в народной медицине при лечении цинги, при анемии, кожных сыпях и мочекаменной болезни. Длительный прием настоя способствует выведению камней из мочевого пузыря. Галеновые препараты настурции применяют при инфекционных болезнях, поражающих почки и мочеточники, а также при бронхите; настой цветков — при болезнях сердца, гипертонии. Свежий сок из листьев разжижает мокроту и способствует ее эвакуации из бронхов. В народной медицине свежие листья используют как кровоочистительный весенний салат и как охлаждающий компресс на раны [1, 2].
Поскольку фитохимический состав данного растения изучен недостаточно, определение качественного состава и количественного содержания соединений фенольного характера в траве настурции большой является актуальным.
Цель нашей работы — определение качественного состава и количественного содержания флавоноидов и гидроксикоричных кислот в траве Tropaeolum majus L. методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
Хроматографическое разделение проводили на жидкостном хроматографе Agilent 1200 3 D LC System Technologies (США) с диодноматричным детектором и химической станцией (ПК, принтер, ПО) G2215BA с использованием колонки Supelco Discovery C18 (25 см х 4,6 мм, 5 мкм) при температуре термостата колонки G1316A — 25 °С. Ввод пробы осуществлялся автосамплером, объем пробы 10 мкл.
Для приготовления подвижной фазы использовали ацетонитрил марки Chromasolv gradient grade, for HPLC, > 99,9 % (Sigma-Aldrich), ортофосфорную кислоту — Chromasolv gradient grade, for HPLC, > 99,9 % (Sigma-Aldrich), бидистиллированную воду получали на Simplicity SIMSV00 Water Purification System Millipore — (Merck KGaA, Darmstadt, Germany). Для экстракции гидроксикоричных кислот и флавоноидов применяли метанол марки Chromasolv gradient grade, for HPLC, > 99,9 % (Sigma-Aldrich). Стандартные вещества — хлорогеновая, кофейная, n-кумаровая, розмариновая кислоты, рутин, кварцетин-3 D-глюкозид, лютеолин — производства Sigma Chemical Co.
Подготовка проб для анализа: около 1 г растительного сырья (точная навеска) экстрагировали 50 мл 60 % раствора метанола в течение 15 мин на водяной бане с обратным холодильником при перемешивании. После этого фильтровали, количественно переносили в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводили до метки объем раствора 60 % метанолом. Полученный раствор отфильтровывали через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм [3-5].
Для разделения фенольных соединений применялись следующие условия: градиентное элюирование смесью бидистиллированной воды подкисленной ортофосфорной кислотой до рН = 2,85 (А) и ацетонитрила (В): 0 мин 5 % «В», 8 мин 8 % «В», 15 мин 10 % «В», 30 мин 20 % «В», 40 мин 40 % «В», 41-42 мин 75 % «В», 43-50 мин 5 % при длине детектирования 330, 320 нм (гидроксикоричние кислоты) и 0 мин 12 % «В», 30 мин 25 % «В», 33 мин 25 % «В», 38 мин 30 % «В», 40 мин 40 % «В», 41 мин 80 % «В», 49 мин 12 % при длине детектирования 255, 340 нм (флавоноиды). Общее время анализа — 50 мин.
По итогам исследования в спиртово-водном извлечении Tropaeoli herba идентифицировано 1 акликон (лютеолин), 2 гликозида флавоноидов (рутин и изокверцитрин) (рис. 1) и 4 гидроксикоричные кислоты (хлорогеновая, кофейная, розмариновая, п-кумаровая) (рис. 2). В наибольшем количестве настурция большая среди
гидроксикоричных кислот содержит хлорогеновой кислоты, что составляет 0,34 %, среди флавоноидов — изокверцитрина — 0,60 % (см. табл.).
Рис. 1. Хроматограмма фенольных соеденений Тгораео1ит majus L. при А = 255 нм: 1 — рутин, 2 — изокверцитрин; при А = 340 нм: 3 — лютеолин
Рис. 2. Хроматограмма фенольных соеденений Тгораео1ит majus L. при А = 330 нм: 1 — хлорогеновая кислота, 2 — розмариновая кислота; при А = 320 нм: 3 — кофейная кислота, 4 — п-кумаровая кислота
Количественное содержание флавоноидов и гидроксикоричных кислот в траве
Тгораео1ит та]№ L
Соединение УФ-спектр ^тах/ нМ RT, мин Количественное содержание, %
Хлорогеновая кислота (5-О-кофеш^-хинная кислота) 330 24,87 0,34
Кофейная кислота (3,4-дигидроксикоричная кислота) 320 27,58 0,009
п-кумаровая кислота (4-гидроксикоричная кислота) 320 32,07 0,05
Розмариновая кислота (депсид 3,4-дигидроксикоричной кислоты) 330 33,19 0,005
Рутин (3-О-Р^-рутинозил-5,7,3',4'-тетрагидроксифлавон) 255 21.48 0,16
Изокверцитрин (З-О-Р^ — глюкопиранозил- 5,7,3',4'-тетрагидроксифлавон) 255 24,09 0,60
Лютеолин (5,7,3',4'-тетрагидроксифлавон) 340 19,23 0,01
Анализ результатов ВЭЖХ флавоноидов и гидроксикоричных кислот настурции большой показал, что для стандартизации растения и его препаратов в качестве маркеров можно рекомендовать изокверцитрин и хлорогеновую кислоту.
Список литературы
1. Ильина Т. А. Большая иллюстрированная энциклопедия лекарственных растений / Т. А. Ильина. - М. : Эксмо, 2008. - 304 с.
2. Куреннов И. П. Энциклопедия лекарственных растений : самолечебник / И. П. Куреннов. - М. : Мартин, 2008. - С. 196-197.
3. Марчишин С. М. Определение гидроксикоричных кислот в антиаллергическом сборе методом ВЭЖХ [Электронный ресурс] / С. М. Марчишин, С. С. Козачок // Медицина
и образование в Сибири : сетевое научное издание. — 2013. — № 4. — Режим доступа : http://ngmu.ru/cozo/mos/article/text_fulLphp?id=1101
4. Определение гидроксикоричных кислот в лекарственном растительном сырье
и обьектах растительного происхождения / Ю. В. Медведев, О. И. Передеряев, А. П. Арзамасцев [и др.] // Вопр. биол., мед. и фармацевт. химии. — 2010. — № 3. — С. 25-31.
5. Determination of caffeoylquinic acids and flavonoids in Cynara scolymus L. by high perfomance liquid chromatography / M. Häuser, M. Ganzera, G. Abel, [et al.] // Chromatographia. — 2002. — Vol. 56, N 7/8. — Р. 407-411.
DEFINITION OF FLAVONOIDS AND
HYDROXYCINNAMIC ACIDS IN TROPAEOLUM MAJUS L. HERB BY HELC METHOD
A. A. Bayev, G. R. Kozyr, S. M. Marchishin, S. S. Kozachok
SHPE «Ternopol state medical university n. a. I. Y. Gorbachevsky» of Ministry of Health of the
Ukraine (Ternopol, the Ukraine)
Qualitative structure and quantitative maintenance of flavonoids and hydroxycinnamic acids in a grass of nasturtium big (Tropaeolum majus L.) was determined by the method of a highly effective liquid chromatography (HELC) with UV-detector. It is established that the studied object contains in the greatest number of isoquercitrin and chlorogenic acid.
Keywords: flavonoids, hydroxycinnamic acids, Tropaeolum majus L. HELC.
About authors:
Marchishin Svetlana Mikhaelovna — doctor of pharmaceutical sciences, professor, head of chair of pharmacognosy with medical botany at SHPE «Ternopil state medical university n. a. I. Y. Gorbachevsky», office phone: 0352520518, e-mail: svitlanafarm@ukr.net
Kozachok Solomia Stepanovna — master of pharmaceutics, assistant of chair
of pharmacognosy with medical botany at SHPE «Ternopil state medical
university n. a. I. Y. Gorbachevsky», office phone: 0352520518, e-mail: ternomiya@yahoo.com
Bayev Alexey Aleksandrovich — competitor of chair of pharmacognosy with medical botany at SHPE «Ternopil state medical university n. a. I. Y. Gorbachevsky», e-mail: ternomiya@yahoo.com
Kozyr Galina Romanovna — candidate of pharmaceutical sciences, assistant professor of chair of management and pharmacy economy with preparation technology at SHPE «Ternopil state medical university n. a. I. Y. Gorbachevsky», e-mail: ternomiya@yahoo.com
List of the Literature:
1. Ilyina T. A. The big illustrated encyclopedia of herbs / T. A. Ilyina. — M.: Exmo, 2008. — 304 P.
2. Kurennov I. P. Encyclopedia of herbs: self-medication book / I. P. Kurennov. — M.: Martin, 2008. — P. 196-197.
3. Marchishin S. M. Definition the hydroxycinnamic acids in antiallergenic collecting by the HELC method [electronic resource] / S. M. Marchishin, S. S. Kozachok // Medicine and education in Siberia: network scientific edition. — 2013. — № 4. — Access mode: http://ngmu.ru/cozo/mos/article/text_full.php? id=1101
4. Definition the hydroxycinnamic acids in medicinal vegetable raw materials and objects of phytogenesis / Y. V. Medvedev, O. I. Perederyaev, A. P. Arzamastsev [etc.] // Questions
of biol. medical and pharm. chemistry. — 2010. — № 3. — P. 25-31. 5. Determination of caffeoylquinic acids and flavonoids in Cynara scolymus L. by high perfomance liquid chromatography / M. Häuser, M. Ganzera, G. Abel, [et al.] // Chromatographia. — 2002. — Vol. 56, N 7/8. — P. 407-411
