CC BY
225
УДК: 615. 3226 577. 127.4 ГИДРОКСИКОРИЧНЫЕ КИСЛОТЫ НЕФАРМАКОПЕЙНЫХ ВИДОВ РОДА БОЯРЫШНИК
К одной из злободневных задач современной фармацевтической науки необходимо отнести поиск растительных источников биологически активных веществ (БАВ) и создания на их основе препаратов сердечно-сосудистого действия. К такой группе растений относится и боярышник. Из официальных (ГФ XI) 12 видов на территории Российской Федерации, после распада СССР, произрастает 7 видов. Сохранившаяся сырьевая база до настоящего времени далеко не отвечает запросам фармацевтической промышленности [2].
Боярышника цветки и плоды в современной медицинской практике используются при функциональных расстройствах сердечной деятельности, ангионеврозах, мерцательной аритмии, параксизмальной тахикардии [5]. Фармакологический эффект при вышеуказанных патологиях определяется суммой БАВ, в которой фенольные соединения, в частности и гидроксико-ричные кислоты, занимают одно из основных мест [4, 6]. Ранее мы сообщали об изучении плодов боярышников на присутствие и количественное содержание флавоноидов [1].
Целью работы явилось изучение гидроксикоричных кислот плодов дикорастущих и культивируемых видов боярышников.
Материалы и методы. Объектами изучения стали распространенные на территории Центрального Федерального Округа России: боярышник (б.) волжский - crataegus (c.) volgensis A. Pojark, б. страшный - с. horrida Medic, б. густоцветковый - с. densiflora Sarg., б. сочный -asucculenta Schrad. ex Link. и фармакопейный вид б. однопестичный - с. monogyna Jacq., заготовленные в августе-сентябре 2012 г. в Центрально-черноземном биосферном заповеднике имени В.В. Алёхина (Курская обл.), Ботаническом саду ВГУ (г. Воронеж), Дендропарке «ЛОСС» (Липецкая обл.).
Качественные химические реакции на БАВ проводились по известным методикам [2, 7, 8]. Для идентификации фенольных соединений использовали методы тонкослойной хроматографии (ТСХ), бумажной хроматографии (БХ) и препаративной ТСХ и БХ. Для БХ использовали бумагу «Filtrak» №12 , системы: I - этилацетат - кислота муравьиная - вода (10:2:3) и II -2% кислота уксусная. Как сорбент для ТСХ использовались пластинки «Sorbfil», смесь растворителей - этилацетат - спирт этиловый (95:5) и хлороформ - кислота уксусная (3:1), насыщенные водой. Хромогенными проявителями служили фильтрованный УФ свет (354 нм), аммиака пары, кислота сульфаниловая диазотированная, 5% раствор спиртовой NaOH, бромтимоловый синий, железа окисного хлорид.
Количественное определение суммы гидроксикоричных кислот проводили спектрофотометрическим методом (СФ-2000) [3].
Метрологические характеристики количественного определения гидроксикоричных кислот осуществлялись с помощью статистических методов программного обеспечения Microsoft Office для ПК.
Результаты и их обсуждение. Химическими реакциями и хроматографическими методами анализа были обнаружены различные группы фенольных соединений, в том числе и кислоты гидроксикоричные.
Вещества определяли по флуоресценции в УФ-свете до и после обработки аммиака парами, а также по сравнительным значениям Rf и Rs с известными образцами. В плодах боярышника густоцветкового было определено 25 веществ фенольной природы, в плодах боярышника страшного - 19, боярышника сочного - 22, у боярышника волжского - 19. В плодах фармакопейного вида - боярышника однопестичного выявлено 18 фенольных веществ.
Курский государственный медицинский университет
Н.Ф. ГОНЧАРОВ
На основании результатов хроматографического и УФ-спектрального исследований в плодах пяти видов боярышников впервые идентифицированы хлорогеновая, неохлороге-новая, кофейная и феруловая кислоты. Методами спектрофо-тометрии определено количественное содержание гидрокси-коричных кислот в плодах исследуемых объектов, которое соответствует фармакопейному образцу.
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: боярышник, гидроксикоричные кислоты, качественный состав, количественное определение.
Фенольные соединения, являющиеся общими для исследуемых объектов, представлены на схеме хроматограммы (рис. 1).
щ
Я
И
щ
Ч
И
«
С-
а
а
я
ІІ направление - система ІІ Рис. 1. Схема общей хроматограммы фенольных соединений исследуемых видов.
Во всех видах обнаружены хлорогеновая (Яріоо = 68 - I и 55 - II система) и неохлороге-новая (Яг100 = 58 - I и 58 - II система) кислоты, которые в системе II делятся на цис- и трансизомеры хлорогеновой и неохлорогеновой кислот. Кофейную (Яг100 = 78 - I и 23 -II системы) и феруловую (Яг100 = 85 - I и 53 - II система) кислоты идентифицировали в плодах боярышников волжского, страшного, густоцветкового, сочного и однопестичного. Препаративной хроматографией эти вещества были выделены из изучаемых видов. Соединения дают позитивную реакцию с бромтимоловым синим, железа окисного хлоридом, кислотой диазотированной сульфаниловой.
Таблица 1
Спектральная характеристика гидроксикоричных кислот боярышников
Флуоресценция в УФ-свете Окраска с реактивами Хшах в УФ- спектрах, нм
Диазотиро- с добавлением
Вещество до обработки после обра- ванная су- 96% этанол ЫаОН АІСІ3
ботки парами NHз льфани-ловая кислота и щелочь РеС1э X АХ X АХ
Кислота кофейная (К1) Голубая Бледно- голубая Коричневая Сине- зеленая 325 299 235 358 250 +33 +15 233 -4 1 О' 0^0 + 35 + 5
Кислота Голубая Жёлто- Жёлто- Сине- 325 380 +55 355 + 30
неохлороге-новая (К2) зелёная коричневая зеленая 300 245 265 + 20 312 240 0
Кислота хло- Голубая Жёлто- Жёлто- Сине- 325 371 +46 350 + 25
роге-новая (К3) зеленая коричневая зелёная 300 245 265 + 20 310 244 - 1
Кислота феруловая (К4) Голубая Ярко- голубая Розово- фиолетовая Оранжевая 223 3 9 2 4 0 0 9 5 0 332 + 29 + 6 320 235 0 + 1
Результаты УФ-спектрального анализа спиртовых растворов с ионизирующими добавками позволили установить, что исследуемые вещества являются кофейной, феруловой и моно-кофеилхинной кислотами. Для установления места присоединения кислоты кофейной к кислоте хинной проводили нагревание этих соединений с кислотой уксусной ледяной. Вещество К2 после нагревания осталось неизменным, следовательно положение С-3 замещено кислотой кофейной, потому что по гидроксильной группе у С-3 кислоты хинной возможно образование лактона. Это вещество можно идентифицировать как 3-о-кофеил-хинную или кислоту нехлоро-
геновую, которая имеет такие же УФ- и ИК- спектральные характеристики как и кислота хлорогеновая, однако у неё иная хроматографическая подвижность. Вещество К3 идентифицировано с 5-кофеил-хинной или кислотой хлорогеновой. Вещества 1 и 4 при щелочном сплавлении с калия гидроксидом образовывали Кі - протекатеховую, К4 - ванилиновую кислоты; эти соединения были идентифицированы Кі - как 3,4-дигидроксикоричная (кофейная), а К4 - как 3- гидрокси-4-метокси - коричная (феруловая) кислоты. Спектральная характеристика веществ приведена в таблице 1.
Определение содержания гидроксикоричных кислот проводили спектрофотометрическим методом. Оптическую плотность анализируемых объектов измеряли на спектрофотометре СФ-2000 при длине волны 327 нм. В качестве раствора сравнения использовали 70% спирт этиловый, расчет проводили в пересчёте на хлолрогеновую кислоту и абсолютно сухое сырье. Статистическая обработка результатов количественной оценки суммы гидроксикоричных кислот в плодах боярышников отражена в таблице 2.
Таблица 2
Метрологическая характеристика количественного определения суммы гидроксикоричных кислот в плодах боярышников (т=5, Р=о,95)
Х хср S2 xSx T(P,n) Доверительный интервал e, %
1 2 3 4 5 6 7
Crataegus monogyna Jack.
0,151 0,148 0,151 0,150 0,154 0,1508 0,47-l0-4 0,2l68-l0-2 2,78 0,l508±0,00603 4,0%
Crataegus volgensis A. Pojark
0,182 0,183 0,182 0,187 0,180 0,1828 0,067-10-4 0,2588-ю-2 2,78 0,l828±0,0072 3,94%
Crataegus horrida Medic
0,175 0,180 0,175 0,174 0,173 0,1754 0,073-10-4 0,2702-l0-2 2,78 0,l754±0,0075l 4,28%
Crataegus densiflora Sarg
0,175 0,175 0,170 0,178 0,176 0,1748 0,087-10-4 0,295-l0-2 2,78 0,l748±0,0082 4,69%
Crataegus succulenta Schrad. ex Link
0,209 0,203 0,212 0,210 0,209 0,2088 0,122-10-4 0,3493^l0-2 2,78 0,2088±0,0097l 4,65%
Содержание кислот гидроксикоричных колеблется в пределах 0,1508-0,2088%.
В плодах боярышника густоцветкового было определено 25 веществ фенольной природы, из них 4 гидроксикорничных кислоты; в плодах боярышника страшного 19 - 4 гидроксико-ричных кислоты; боярышника сочного 22 - идентифицировано 4 гидроксикоричных кислоты; у боярышника волжского 19 фенольных соединения, 4 отнесены к гидроксикорничным кислотам.
В плодах фармакопейного вида - боярышника однопестичного определено 18 фенольных веществ, 4 из которых являются гидроксикорничными кислотами.
Из изучаемых объектов выделены и идентифицированы хлорогеновая и неохлорогено-вая кислоты, присутствие кофейной и феруловой кислот также подтверждено во всех объектах.
Установлено количественное содержание гидроксикоричных кислот в плодах исследуемых видов.
Полученные результаты вполне сопоставимы по отношению к фармакопейному виду, что дает предпосылки для дальнейшего изучения видов боярышников, не входящих в официальную номенклатуру лекарственного растительного сырья.
1. Гончаров, Н. Ф. Поиск новых видов рода Crataegus L. как потенциальных источников для расширения сырьевой базы / Н.Ф. Гончаров, А.М. Ковалева // II Российский фитотерапевтический съезд. -Москва, 2010. - С. 114-117.
2. Государственная фармакопея СССР. Вып.2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье Мз СССР - XI изд., доп. - М.: Медицина, 1987. - 398 с.
3. Жукова, О.Л. Изучение фенольного состава подземных органов сабельника болотного / О.Л Жукова, А.А. Абрамов, Т.Д. Даргаева, А.А. Маркарян // Вестник Московского университета. Серия 2. Химия. - 2006 - Т. 47, №5. - С.342-345.
4. Котова, Э.Э. Стандартизация плодов боярышника и лекарственных препаратов на их основе по показателю «Количественное определение» / Э.Э. Котова, А.Г. Котов, Н.П. Хованская // Фармаком - 2004. - № 4. - С. 1- 7.
5. Машковский. М.Д. Лекарственные средства. - М., 2012. - 420 с.
6. Самылина И.А. Боярышник (Crataegus): возможности медицинского применения / Самылина И.А, Сорокина А.А., Пятигорская Н.В. // Фарматека - 2010. - №8. - С.83-85.
7. European Pharmacopea. - Strasbourg: Council of Europe. 2000. - Р. 930 - 931.
8. Pittler M.H., Guo R., Ernst E. Who monographs on selected medicinal plants. - Vol. 2. - World
Health Organization. - Geneva, 2002, Р. 142-145.
Литература
HYDROXYCINNAMIC ACID NON-PHARMACOPOEIAL SPECIES OF HAWTHORN
1)Kursk State Medical University
N.F. GONCHAROV1
On the basis of results of chromatographic and Uf-spectral researches in fetuses of five kinds of aglets for the first time are identified chlorogenic, neochlorogenic, coffee and acids of ferule. Spectrophotometer methods define the quantitative maintenance hy-droxycinnamic acids in fetuses of investigated objects which corresponds pharmaceutical sample.
e-mail: [email protected]
Key words: aglets, hydroxycinnamic acids, qualitative composition, quantitative definition.
