CC BY
201
19. Кулаков В. И., Маргиани Ф. А., Назаренко Т. А., Дубниц-кая Л. В., Габуния Т. Г. Структура женского бесплодия и прогноз восстановления репродуктивной функции при использовании современных эндоскопических методов // Акушерство и гинекология 2001. № 3. С. 33—36.
20.Кулаков В.И., Овсянникова Т.В.,Шилова М.Н., Волков Н. И. Восстановление репродуктивной функции после комбинированного лечения с использованием золадекса у больных
бесплодием и миомой матки // Проблемы репродукции. 1997. № 5. С. 34.
21. Пшеничникова Т. Я., Гаспаров А. С., Федорова Т. А., Исента-ева Ж. К. Лапароскопическая диагностика сопутствующей патологии органов малого таза у пациенток с хроническим сальпингитом и бесплодием // Здравоохранение Казахстана. 1990. № 3. С. 21—24.
22. Сметник В. П., Тумилович Л. Г. Неоперативная гинекология. М., 1998. 224 с.
Н. Ф. ГОНЧАРОВ
сравнительное изучение гидроксикоричных кислот и флавоноидных соединений плодов НЕКОТОРЫХ ВИДОВ РОДА CRATAEGUS L
Кафедра фармакогнозии и ботаники Курского государственного медицинского университета, г. Курск, ул. Ахтырская, 17, тел. (4712) 53-80-45, e-mail: hillari@kursknet.ru
На основании результатов хроматографического и УФ-стюктрального исследований в плодах четырех видов боярышников впервые идентифицированы: хлорогеновая, неохлорогеновая, кофейная кислоты, а также флавоноиды: гиперозид, биокверцетин и витексин. Методами спектрофотометрии и хроматоспектрофотометрии определено количественное содержание флавоноидов в плодах исследуемых видов, которое соответствует требованиям ГФ XI
Ключевые слова: боярышники, гидроксикоричные кислоты, флавоноиды, качественный состав, количественное определение.
N. F. GONCHAROV
COMPARATIVE STUDYING HYDROXYCKORICHS ACIDS AND FLAVONOIDS CONNECTIONS OF SORT CRATAEGUS L. SOME KINDS FRUITS
Department of pharmacognozia and botany Kursk state medical university,
On the basis of results chromatographic and Uf-spectral researches in fruits of four kinds of hawthorns for the first time are identified: chlorogenic, neochlorogenic, coffee acids, and also flavonoids:hyperoside,and vitexine. The quantitative maintenance flavonoids each of kind define of spectrophotometric and chromathospectrophotometric methods which corresponds to requirements GF XI.
Key words: hawthorns, chlorogenic, neochlorogenic, coffee acids, flavonoids, qualitative structure, quantitative definition.
Цветки и плоды боярышника в современной медицинской практике используются при функциональных расстройствах сердечной деятельности, ангионеврозах, мерцательной аритмии, параксизмальной тахикардии [5]. Фармакологический эффект при вышеуказанных патологиях определяется суммой биологически активных веществ (БАВ), в которой фенольные соединения занимают одно из основных мест [3, 4, 6].
В настоящее время из зон традиционной заготовки боярышника выпали такие значимые районы, как Прибалтика, Украина, Белоруссия, среднеазиатские страны СНГ, что привело к уменьшению ассортимента и снижению объема заготовок номенклатурных видов сырья [2]. Проблема поиска новых сырьевых источников является злободневной, и мы посчитали целесообразным обратить внимание на нефармакопейные виды этого рода, которых во флоре России насчитывается более 160 [1].
Целью работы явилось определение качественного состава фенольных соединений и количественная оценка содержания флавоноидов в нефармакопейных видах боярышников в сравнении с официнальными.
Методика исследования
Объектами изучения были: плоды фармакопейного вида боярышника (б.) однопестичного — Сrataegus (C.) monogina Jacq.; плоды североамериканских интроду-центов: б. петушья шпора — С. crus-galli L; б. шарлаховидного — С. cocciniodes Ashe.; б. Факсона — С. facsonii Sarg.; плоды европейской группы б. украинского — С. ucrainica Pojrk., собранные в сентябре 2007 года в Курской (Центрально-Чернозёмный биосферный заповедник), Липецкой (дендропарк «ЛОСС») областях, г. Воронеже (ботсад ВГУ), окрестностях г. Калуги.
Для проведения исследования использовали химические и физико-химические методы анализа. Качественные химические реакции на БАВ проводились по известным методикам. Идентификацию групп БАВ проводили с использованием тонкослойной хроматографии (ТСХ), бумажной хроматографии (БХ) и для выделения препаративную ТСХ и БХ. Тонкослойную хроматографию проводили на пластинках «Sorbfil» в системе растворителей этилацетат этанол (95:5) и хлороформ-уксусная кислота (3:1), насыщенной водой [9]. Для БХ пользовались бумагой «Filtrak» № 12, системы растворителей: I — этилацетат — муравьиновая
Кубанский научный медицинский вестник № 5 (104) 2008 УДК 615. 322:577.127.4
Кубанский научный медицинский вестник № 5 (104) 2008
кислота — вода (10:2:3) и II — 2%-ная уксусная кислота. Хромогенными проявителями служили фильтрованный УФ-свет (354 нм), пары аммиака, 1%-ный раствор AICI3 в этаноле, 5%-ный раствор гидроксида натрия, бромтимоловый синий, хлорид оксида железа, кислота сульфаниловая диазотированная.
Количественное определение суммы флавоноидов проводили с помощью методов хроматоспектрофо-тометрии и дифференциальной спектрофотометрии. Метрологические характеристики количественного определения суммы флавоноидов осуществлялись с помощью статистических методов программного обеспечения Microsoft Office для ПК.
Результаты исследования
Химическими реакциями и хроматографическими методами анализа были обнаружены гидроксикорич-ные кислоты, флавоноиды. Вещества определяли по флуоресценции в УФ-свете до и после обработки парами аммиака, а также по сопоставлению Rf и Rs с достоверными образцами.
Фенольные соединения, выявленные в исследуемых видах, представлены на схеме хроматограммы.
В плодах исследуемых видов в сравнении с достоверными образцами идентифицированы хлорогеновая (Rf 100=85 — I; 70 и 55 — II система), неохлорогеновая (Rf 100 = 75 — I; 75 и 65 — II система) кислоты, которые в системе 2%-ной уксусной кислоты разделялись на цис- и трансизомеры, и кофейная (Rf 100 = 95 — I; 50 и 34 — II система) кислота. На хроматограмме эти соединения дают положительную реакцию с бромтимоловым синим, хлоридом оксида железа, кислотой сульфаниловой диазотированной. Из плодов исследуемых объектов эти вещества были выделены препаративной хроматографией.
Результаты УФ-спектрального анализа их спиртовых растворов с ионизирующими и комплексообразующими добавками позволили установить, что исследуемые ве-
Схема хроматограммы суммы соединений исследуемых видов
щества относятся к монокофеилхинным (хлорогеновая и неохлорогеновая) и кофейной кислотам.
Флавоноидные соединения определяли в УФ-све-те по флуоресценции и её изменениям при обработке хромогенными реактивами. Хроматографически в
сравнении с достоверными образцами идентифицированы флавоноиды: гиперозид ^ 100 = 68 — I и 28 — II система); биокверцетин ^ 100 = 52 — I и 28=36 — II система), витексин ^ 100 = 65 — I и 28 — II система). Данные УФ-спектров веществ с ионизирующими и комплексообразующими добавками подтвердили наличие этих флавоноидов, обнаружены максимумы поглощения для гиперозида — 362,269 пл., 239, биокверцетина — 365,247 пл., 213 и витексина — 335, 268 пл., 257 [8,10].
Европейская фармакопея (Р11 Еиг) предлагает определять в плодах боярышника процианидины в пересчете на цианидина хлорид, а в листьях и цветках — сумму флавоноидов в пересчёте на гиперозид [9]. Однако основной вклад в биологическое действие боярышника принадлежит гиперозиду, по которому нами проведено количественное определение флавоноидов [4 ].
ГФ XI регламентирует содержание флавоноидов не менее 0,06% в пересчете на гиперозид, но предлагаемая методика довольно трудновоспроизводима [7]. Поэтому нами было определено содержание суммы флавоноидов в пересчете на гиперозид двумя вариантами, основанными на хроматоспектрофотометрии и дифференциальной спектрофотометрии. По первому — из полученных двухмерных хроматограмм (БХ) пятна флавоноидов вырезали, элюировали, доводили в мерной колбе до метки и определяли оптическую плотность при длине волны 360 нм в пересчете на гиперозид, используя его удельное поглощение при этой длине волны. По второму — определение оптической плотности спиртовых экстрактов проводили после образования комплексов флавоноидов с А1С13 при длине волны 410 нм и определяли содержание суммы флавоноидов в пересчете на гиперозид, используя для сравнения интенсивность поглощения комплекса стандартного образца гиперозида с А1С13 при той же длине волны [4]. Были получены сопоставимые результаты.
Метрологические характеристики количественного определения суммы флавоноидов по второму варианту приведены в таблице.
Количественное содержание флавоноидов соответствует требованиям фармакопеи.
Обсуждение
В плодах боярышника петушья шпора было обнаружено 20 веществ фенольной природы, из них 5 флавоноидов, в плодах боярышника шарлаховидного — 19 (4 флавоноида), боярышника Факсона — 25 (8 флавоноидов), в плодах боярышника украинского — 14 (5 флавоноидов). В плодах фармакопейного вида боярышника однопестичного определены 18 фенольных соединений, из них 4 флавоноида.
Выводы
1. В плодах б. однопестичного, б. петушья шпора, б. шарлаховидного, б. Факсона и б. украинского обнаружены гидроксикоричные кислоты, флавоноиды.
2. Из плодов исследуемых боярышников выделены гиперозид, биокверцетин, витексин, хлорогеновая, неохлорогеновая и кофейная кислоты.
3. Установлено количественное содержание флавоноидов в плодах исследуемых боярышников, которое составляет (в %) для боярышника однопестичного 0,061, для б. петушья шпора — 0,09, для б. шарлаховидного — 0,101, для б. Факсона — 0,103, для б. украинского — 0,203.
Метрологическая характеристика количественного определения суммы флавоноидов в плодах боярышника п = 5, Р > 95
х di di2 S2 S ДХ Е, %
Crataegus monogyna
0,0610 0,0620 0,0600 0,0610 0,0613 хср=0,0614 0,0004 0,0006 0,0014 0,0004 0,0016 0,00000016 0,00000036 0,00000196 0,00000016 0,00000256 0,01310-4 0,11410-2 0,0614±0,00317 5,1%
Crataegus crus-galli
0,091 0,093 0,091 0,09 0,089 хср=0,0908 0,0002 0,0022 0,0002 0,0008 0,0018 0,00000004 0,00000484 0,00000004 0,00000064 0,00000324 0,022 10-4 0,1483 10-2 0,0908±0,00412 4,54%
Crataegus facsonii
0,103 0,106 0,101 0,104 0,103 хср=0,1034 0,0004 0,0026 0,0024 0,0006 0,0004 0,00000016 0,00000676 0,00000576 0,00000036 0,00000016 0,033 10-4 0,181710-2 0,1034±0,00505 4,88%
Crataegus cocciniodes
0,102 0,102 0,104 0,1 0,101 хср=0,1018 0,0002 0,0022 0,0018 0,0002 0,0008 0,00000004 0,00000484 0,00000324 0,00000004 0,00000064 0,022 10-4 0,1483 10-2 0,1018±0,00412 4,05%
Crataegus ucrainica
0,204 0,207 0,204 0,201 0,203 хср=0,2038 0,0002 0,0032 0,0002 0,0028 0,0028 0,00000004 0,00001024 0,00000004 0,00000784 0,00000064 0,047 10-4 0,216810-2 0,2038±0,00603 2,96%
Примечание: Х,% — вариант выборки; Хср — среднее выборки; di — отклонение; di2 — квадрат отклонения;
S2 — дисперсия; S — стандартное отклонение; ДХ — полуширина доверительного интервала величины; Е отн,% — относительная погрешность.
4. Качественный состав фенольных соединений и количественное содержание флавоноидов представленных видов соответствуют фармакопейному образцу. Полученные результаты являются предпосылкой для дальнейшего исследования боярышников изучаемых видов как возможных источников БАВ и введения их в номенклатуру официнальных растений.
Поступила 06.08.2008
ЛИТЕРАТУРА
1. Вафин Р. В., Путенихин В. П. Боярышники. Интродукция и биологические особенности. М., 2003. 240 с.
2. Государственная фармакопея СССР: Вып. 2. М., 1989. 400 с.
3. Гусейнов Д. Я. Влияние препаратов и некоторых химических веществ боярышника на периферические сосуды // Азербайджанский медицинский журнал. 1964. С. 65—69.
Кубанский научный медицинский вестник № 5 (104) 2008
УДК 615. 322: 582. 711 Кубанский научный медицинский вестник № 5 (104) 2008
4. Котова Э. Э., Котов А. Г., Хованская Н. П. Стандартизация плодов боярышника и лекарственных препаратов на их основе по показателю «Количественное определение» // Фармаком. 2004. С. 35—41.
5. Машковский М. Д. Лекарственные средства. М., 2005. 1200 с.
6. Муравьёв И. А., Бредиева А. П. О природе веществ плодов кроваво-красного боярышника, определяющих их кардиотоничес-кую активность // Фармация. 1987. № 3. С. 32—34.
7. Самылина И. А., Киселева Т. Л. Количественное определение суммы флавоноидов в плодах боярышника // Фармация. 1987. № 5. С. 30—32.
8. Титов А. А., Батюк В. С. С-гликозиды Crataegus curvisepala // Химия природ. соедин. 1986. № 3. С. 373.
9. European Pharmacopea, supplement 2001. Strasbourg: Council of Europe. 2000. Р. 930—931.
10. Plant Drug Analysis 2 nd ed. Spinger Verlag Berlin Heidelberg New York.1996. 383 p.
Н. Ф. ГОНЧАРОВ
ИзУЧЕНИЕ ЭФИРНыХ МАСЕЛ ЦВЕТКОВ СЕВЕРОАМЕРИКАНСКИХ ВИДОВ БОяРышНИКОВ
Кафедра фармакогнозии и ботаники Курского государственного медицинского университета, г. Курск, ул. Ахтырская, 17, тел. (4712) 53-80-45
Проведено исследование эфирных масел боярышников североамериканской группы: боярышника мягковатого - ^ataegus (С.) submollis Sarg., боярышника Джека — C. jackii Sarg., боярышника вееровидного - C. flabellata (Bosc.), боярышника канадского - C. canadensis Sarg., широко культивируемых на территории СНГ.
Впервые определено количественное содержание эфирного масла, которое колеблется в пределах 0,177—0,411%, изучен качественный состав и дана количественная оценка содержания компонентов эфирного масла боярышника мягковатого и боярышника канадского.
Ключевые слова: боярышники, эфирные масла, качественный состав, количественное определение.
N. F. GONCHAROV
STUDYING OF ESSENCE FLOWER NORTH AMERICAN KINDS OF HAWTHORNS
Department of pharmacognozia and botany Kursk state medical university
Research of essence of hawthorns of North American group is carried out: a hawthorn softish - ^ataegus (C.) submollis Sarg., Jack's hawthorn — C. jackii Sarg., a hawthorn вееровидного — C. flabellata (Bosc.), a hawthorn Canadian - C. сanadensis Sarg. Widely cultivated in territory of the UIS.
For the first time the quantitative maintenance of essence which fluctuates within 0,177—0,411% is defined, the qualitative structure is studied and the quantitative estimation of the maintenance of components of essence of a hawthorn softish and a hawthorn Canadian is given.
Keywords: hawthorns, essence, qualitative structure, quantitative definition.
Одной из актуальных задач фармацевтической науки является поиск отечественных сырьевых источников биологически активных веществ (БАВ) для создания на их основе препаратов сердечно-сосудистого и седативного действия. В связи с этим особое внимание привлекают многочисленные роды, из которых лишь некоторые виды применяются в медицине. К таковым относится боярышник, представители которого содержат различные группы БАВ [7, 8].
Род Crataegus L. (семейство Rosaceae Juss.) насчитывает около 1250 видов, произрастающих главным образом в умеренной и, частично, субтропической зонах Северного полушария Америки и Евразии. Родиной боярышников является восточная часть Северной Америки. На территории России и сопредельных государств произрастает 74 вида дикорастущих и более 90 интро-дуцированных видов, 14 из них официально разрешены к применению в медицинской практике [1, 2, 5].
Североамериканские виды, интродукция которых ведется в России с начала 18-го века, широко используются в садово-парковом строительстве и как плодо-
вые культуры во многих странах Европы. Достаточная сырьевая база представителей этой группы, мало изученный химический состав создают предпосылки для их углубленного исследования как источников БАВ в качестве перспективных растений для введения в официальную номенклатуру [6].
Ранее мы сообщали об изучении фенольных соединений боярышников [3, 4]. Продолжая наши исследования североамериканских боярышников, были получены эфирные масла цветков четырёх видов, близких по систематическому положению.
Целью работы стали количественная оценка содержания эфирных масел, установление их компонентного состава и его количественного соотношения в цветках этой группы боярышников.
Методика исследования
Объектами исследования служили сухие цветки боярышника мягковатого — Сrataegus (С.) submollis Sarg., боярышника Джека — С. jackii Sarg., боярышника
