CC BY
125
Таблица 2
Показатели и нормы качества комбинированных суппозиториев
Показатели качества Требование л е С Серия 2 Серия 3 л е С Серия 5 Серия 6 Метроло- гические характеристики
Описание Однородны, торпедообразной формы, темнооранжевого цвета, со своеобразным запахом + + + + + +
Подлин- ность Максимумы спектров поглощения + + + + + +
Температура плав-ления,°С Не выше 37° С 35,8 35,9 35,8 36,0 36,2 35,9
Время полной деформации, мин. Не более 15 минут 4 4 4 4 3 4
Средняя масса, г 2,22±0,01 + + + + + + -
Коли- чественное содер- жание Изофлаво-ноидов, не менее 0,030 г 0,03 0,03 0,032 0,03 0,032 0,031 ХСр=0,031 8= 0,000983 8Х=0,000401 е=±3,34% 82=9,67 10-7
Кароти-ноидов, не менее 129 мг % 129 130 129 130 132 129 Хср=129,8 8=1,169045 8Х=0,477261 е=±0,94% 82=1,37
ЛИТЕРАТУРА
1. Бузовский А.Н. Разработка составов и технологии суппозиторных основ дифильного типа // Фармация. - 1988. - № 5. - С. 21-23.
2. Ветров П.П. Определение содержания липофиль-ных веществ и суммы каротиноидов в растительном сырье // Хим.- фармац. журн. - 1989. - Т. 23, № 3. - С. 320.
3. Гараничева О.В. Разработка технологии густого экстракта стальника полевого корней // Научное обозрение. - 2009. - № 4. - С. 33-37.
4. Гараничева О.В. Фармакологическое обоснование исследования композитных суппозиториев с экстрактом стальника и облепихи как противогемор-роидального средства // Клиническая фармакология и терапия. - 2009. - № 6. - С. 263-264.
5. Государственная фармакопея РФ. - 12-е изд. - М., 2007. - Ч. 1. - 704 с.
6. Государственная фармакопея СССР: Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1990. -Вып. 2. - С. 151-153.
7. Демченко Ю.Т. Особенности процесса экстрагирования лекарственного растительного сырья двухфазными системами экстрагентов, содержащими компоненты суппозиторных основ // Хим. -фармац. журн. - 2005. - Т. 39, № 11. - С. 30-34.
8. Муравьев И.А., Кононихина Н.Ф., Ковальская Н.Г. Способ оценки высвобождения липофильных веществ из мягких лекарственных форм в модельных условиях. - Пятигорск, 1987. - № 12975. - С. 8.
Вопросы фармации УДК 615.1;543.257.063
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРИМЕСИ 4-АМИНОФЕНОЛА В ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВАХ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
© Гармонов С.Ю., Салахов И.А., Нурисламова Г.Р., Исмаилова Р.Н., Сопин В.Ф.
Кафедра аналитической химии, стандартизации и менеджмента качества Казанского государственного технологического университета, Казань, Республика Татарстан
E-mail: serggar@mail.ru
Предложены условия пробоподготовки и разделения 4-аминофенола в лекарственных смесях на основе парацетамола при использовании метода высокоэффективной жидкостной хроматографии. Предложенная методика с высокой чувствительностью и экспрессностью обеспечивает получение достоверных и воспроизводимых результатов количественного определения нормируемой токсичной примеси 4-аминофенола в лекарственных формах.
Ключевые слова: высокоэффективная жидкостная хроматография, 4-аминофенол, анализ.
DETERMINATION OF AN IMPURITY 4-AMINOPHENOL IN MEDICAL PRODUCTS BY A METHOD OF HIGH
PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY Garmonov S.Yu., Salakhov I.A., Nurislamova G.R., Ismailova R.N., Sopin V.F.
Department of Analytical Chemistry, Standardization and Quality Management of the Kazan State Technological University, Kazan, Tatarstan Republic Conditions preparation of test and divisions 4-aminophenol in medicinal mixes on the basis of paracetamol are offered to carry out a method of a high performance liquid chromatography. Offered procedure has high sensitivity and expressivity, ensure accurate and reproducible results of quantitative analysis of toxic related substances 4-aminophenol in medicinal forms. Keywords: highly effective liquid chromatography, 4-aminophenol, analysis.
Современные лекарственные средства (ЛС) для лечения простуды и гриппа являются многокомпонентными препаратами. Одним из обязательных компонентов в их составе является парацетамол, обладающий жаропонижающим и анальгезирующим действием, что обусловливает устранение простудных симптомов при гриппе и острых респираторно-вирусных заболеваниях [1]. Химико-фармацевтический синтез парацетамола проводится из высокотоксичного 4-аминофенола (АФ), содержание которого нормируется во всех ЛС на основе парацетамола. Возрастающие требования к качеству и безопасности ЛС делают актуальной проблему разработки чувствительных методик определения следовых примесей АФ в субстанциях и лекарственных формах.
В настоящее время в фармацевтическом анализе метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) занимает ключевую роль в контроле качества ЛС в силу ряда преимуществ в анализе сложных смесей, высокой точности и экспресетости [5, 6]. Описанные в нормативной документации ВЭЖХ методики анализа препаратов на основе парацетамола совместимы с рядом трудностей, поскольку количественное содержание компонентов действующих веществ и примеси АФ в лекарственных формах сильно различается, в анализе применяется несколько элюирующих смесей и не решается проблема обеспечения высокой чувствительности аналитических опре-
делений [2, 3]. По этой причине необходимо использование предварительных трудоемких операций концентрирования, что обусловливает много-стадийность анализа в целом, снижает его экс-прессность и экономичность.
В связи с этим целью настоящей работы является разработка высокочувствительной методики определения 4-аминофенола в лекарственных препаратах с использованием обращенно-фазной ВЭЖХ.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследования проводили на жидкостном хроматографе LC-20 фирмы "Schimadzu" (Япония), состоящем из насоса для создания градиента высокого давления (LC-20AB), термостата колонок (CTO-20A), инжектора «Реодайн», вакуум-дегазатора, последовательно соединенных диодно-матричного (SPD-M 20A) и флуоресцентного (RF-10AXl) детекторов. Обработку данных и запись хроматограмм осуществляли на персональном компьютере с помощью программного обеспечения LC Solution версии 1.22. Разделение проводили на колонке с обращенной фазой Symmetry С18 (4,6 мм х 150 мм х 5 мкм) с предколонкой Symmetry С18 (3,9 мм х 20 мм х 5 мкм). Аналитические определения проводили в следующих условиях: скорость потока - 1,0 мл/мин, объем
вводимой пробы - 20 мкл, температура колонки 400С.
Для приготовления элюентов использовали ацетонитрил для хроматографии ос.ч. сорт 0 (Криохром, Санкт-Петербург), ацетонитрил "Labscan" марки Ultra Gradient (Ирландия) и сверхчистую воду, полученную на установке MilliporWa-ters (США) из бидистилированной воды. В качестве стандартов определяемых веществ использовали стандартные образцы анализируемых веществ (Fluka и Sigma), а также вспомогательные вещества, входящие в состав таблеток - фармакопейной чистоты.
Методика выполнения анализа. Для приготовления анализируемого раствора измельчают и растирают анализируемые таблетки. Отвешивают 0,3 г (точная навеска) порошка растертых таблеток, растворяют в деионизированной воде и переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл, энергично встряхивают, обрабатывают ультразвуком 5 мин и доводят водой до метки. Перед вводом в колонку пробы фильтруют через мембранный фильтр с размером частиц 0,45 мкм. По 20 мкл исследуемого раствора и раствора стандартного образца с помощью микрошприца вводят в хроматограф. Массу определяемых веществ в одной таблетке вычисляют по формуле:
Х = (Sk mar mс)/(Sст m^,
где Sk и Sct - средние значения площадей пиков определяемых компонентов на хроматограммах испытуемого и стандартного образца соответственно;
mCT, m^ mн - масса стандарта определяемого вещества в растворе стандартного образца, средняя масса таблетки и масса навески растертых таблеток, взятой для приготовления испытуемого раствора соответственно в граммах.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
В процессе работы выполнена оптимизация пробоподготовки и хроматографических условий разделения. В кислой среде АФ значительно более стабилен по сравнению с нейтральной средой, где он окисляется со временем в окрашенный хи-нон. Пробоподготовка заключалась в использовании в качестве растворителя 0,05% раствора три-фторуксусной кислоты с обработкой ультразвуком в течение 5 минут и фильтрованием пробы. Как показали проведенные эксперименты, этих условий достаточно для полного количественного извлечения АФ из лекарственных форм.
При выборе и обосновании условий хроматографического разделения использовали режим изократического элюирования на фазах С18, широко распространенных в аналитической практи-
ке. Однако определение АФ при этих условиях представляет трудную задачу ввиду сложности фоновой матрицы и его малых концентраций 0,05% - 0,5% (масс.) относительно содержания парацетамола в ЛС. Кроме того, АФ является гидрофильным соединением, практически не удерживаемом на традиционных обращенных фазах С18.
Для повышения эффективности разделения и улучшения формы пика использован прием введения ион-парного реагента при ВЭЖХ определениях. Наличие фенильного гидроксила позволяет для органических соединений с кислотными свойствами в качестве ион-парных реагентов использовать алкиламины в нейтральной среде. Входящая в их состав основная аминогруппа позволяет реализовать на основе солей алкилсульфо-натов ион-парный механизм удерживания и разделения в кислой среде. В жидкостной хроматографии должное распространение получили ал-килсульфонаты с длиной углеводородных радикалов С6-С8. В то же время более доступно использование додецилсульфата натрия в более низких по сравнению с алкилсульфонатами концентрациях в подвижной фазе. Обладая более высокой удерживающей способностью, алкилсуль-фат позволяет использовать высокое содержание органического модификатора для получения приемлемых времен удерживания АФ (рис. 1). В то же время большинство остальных компонентов матрицы и действующих веществ элюируются вместе с пиком перераспределения, не мешая определению примеси (рис. 2). Была показана возможность количественного анализа трудно-удерживаемой примеси 4-аминофенола в присутствии аскорбиновой кислоты на колонке Symmetry С18 одновременно с количественным определением действующих веществ парацетамола, аскорбиновой кислоты и хлорфенирамина мале-ата. Удерживание компонентов матрицы с основными свойствами, в частности фенирамина, при этом значительно возрастает, что позволяет достоверно отделять все компоненты смеси от примеси АФ (рис. 3). В качестве детектора наряду со спектрофотометрическим (аналитическая длина волны 272 нм) возможно использование и флуоресцентного, что позволяет значительно увеличить селективность и предел детектирования ана-лита. Для АФ оптимальные параметры флуоресцентного детектора составили: длина волны возбуждения 260 нм, эмиссии 340 нм.
При подобранных условиях разделения достигаются оптимальные значения времени удерживания и симметрии пика. Аналитические характеристики методики приведены в таблице 1. Хороший результат разделения компонентов
шли шли
тУ тУ
Рис. 1. Хроматограммы 4-аминофенола в концентрациях 2,5 мкг/мл (I, III), 1 мкг/мл (II, IV). ПФ: элюент А 0,01 М додецилсульфата натрия, 0,01 М №2НР04 - Н3Р04, рН 2,2, элюент Б - ацетонитрил, А/Б=70/30 (I, III), 65/35(11, IV). СФД 272 нм (I, II), ФЛД Еех=260 нм, Еет=360 нм (III, IV).
тУ тли
Рис. 2. Хроматограмма таблеток «Антигриппин для детей» с добавкой стандартного образца 4-аминофенола в концентрации 1 мкг/мл (I, II). ПФ: элюент А 0,01 М додецилсульфата натрия, 0,01 М №2НР04 - Н3Р04, рН 2,2, элюент Б - ацетонитрил, А/Б=65/35. СФД 272 нм (I), ФЛД Еех=260 нм, Еет=360 нм (II).
тАи тУ
Рис. 3. Хроматограмма таблеток «Терафлю» с добавкой стандартного образца 4-аминофенола в концентрации 2,5 мкг/мл (I, II). 4-аминофенол (1), фенирамин малеат (2) ПФ: элюент А 0,01 М додецилсульфата натрия, 0,01 М №2НР04 - Н3Р04, рН 2,2, элюент Б - ацетонитрил, А/Б=70/30. СФД детектор 272 нм (I,), ФЛД Еех=260 нм, Еет=360 нм (II).
Таблица 1
Аналитические характеристики методики ВЭЖХ анализа 4-аминофенола
Длина волн, нм Диапазон определяемых содержаний, мкг/мл Наклон градуировочной зависимости Ь Коэф- фициент корреляции Предел детектирования, мкг/мл Предел обнаружения, мкг/мл
272 0,1 - 5 18089 630 0,9999 0,093 0,306
Евозб= 260 Еэмис = 340 0,1 - 2 319376 1003 0,9999 0,012 0,040
