CC BY
10
УДК 613.485:877.914.314.5]-074
И. А. Пинигина, А. X. Галузинская
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОПТИЧЕСКИХ ОТБЕЛИВАТЕЛЕП ПРОИЗВОДНЫХ СТИЛЬБЕНА
Институт общей и коммунальной гигиены им. А. Н. Сысина АМН СССР, Москва
Оптические отбеливатели (называемые в нашей стране белофора-ми), появившиеся всего 25 лет назад, заметно вытесняют химические, применение которых неизбежно влечет за собой повреждение волокон отбеливаемых тканей. Действие оптических отбеливателей (ООП) основано на их способности флюоресцировать под действием УФ-света голубым и другими цветами, создавая эффект белизны. Устойчивость ООП к воздействию света очень низка, поэтому отбеливание тканей и изделий из них повторяется после каждой мокрой обработки. Несмотря на этот недостаток, ООП перспективны и производство их неуклонно растет.
Описанные в литературе методы определения ООП основаны главным образом на визуальной оценке степени флюоресценции отбеленных тканей или растворов путем их сравнения с эталонными образцами, фотометрическом измерении в видимых, УФ-областях спектров. Методы эти не избирательны и пригодны лишь для исследования больших количеств ООП. Методики анализа микроколичеств ООП, и в частности избирательного определения белофоров марки КБ и КД, которые были объектами нашего изучения, в доступной нам литературе мы не встретили. Поэтому явилась необходимость в разработке чувствительных и избирательных методов определения белофоров КБ и КД.
При разработке таких методов за основу была взята предложенная Ьайпак реакция окисления перманганатом калия в щелочной среде в присутствии пиридина стильбеновых красителей по месту двойной связи до альдегидов с последующим их количественным определением. Известно, что при окислении — С = С — связи перманганатом калия в щелочной среде образуется окись марганца, выпадающая в осадок. Последний может адсорбировать значительное количество непрореагиро-вавших исследуемых веществ и продуктов их окисления (У. Уотерс). Это повышает опасность дальнейшего окисления, может внести существенные ошибки и непригодно при работе с микроколнчествами. Мы пытались окислять белофоры КБ и КД в кислой среде.
Для окисления белофоров КБ и КД готовили их водные растворы при нагревании на кипящей водяной бане. Всю работу с белофорами проводили в посуде, окрашенной в черный цвет или оклеенной черной бумагой, чтобы предотвратить их разрушение под действием УФ-света. Экспериментально подбирали наиболее благоприятную для окисления рН среды путем добавления различных количеств серной кислоты. Окисление прерывали добавлением щавелевой кислоты, связывавшей избыток перманганата калия. Об образовании альдегидов судили по реакции с хроматроповой кислотой и образованию гидразонов. Количество образовавшихся альдегидов устанавливали по изменению величины оптической плотности окрашенных растворов. Оптимальное количество перманганата калия, потребное для окисления белофоров КБ и КД, определяли методом насыщения, т. е. к одной весовой части бело-фора прибавляли 2—3-кратные и т. д. избытки перманганата калия. Результаты исследований показали, что в условиях нашего опыта наиболее благоприятным для получения альдегидов из белофора КБ оказался 3-кратный избыток перманганата калия, а для белофора КД—17-кратный. Оптимальное время окисления для альдегидов выявляли путем окисления в течение 2—5—10—15 и 20 мин ряда образцов, содержащих одинаковое количество белофора КБ и КМп04 при выбранных нами оптимальных соотношениях. Окисление вели при комнатной тем-
пературе. На основании исследований мы сочли возможным проводить окисление белофоров КБ и КД в течение 7 мин. Альдегиды, образующиеся при окислении этих белофоров, представляют собой бесцветные вещества, растворенные в относительно больших объемах реакционной массы, которая может содержать сложную смесь различных веществ, способных мешать дальнейшему анализу. Поэтому для определения микроколичеств необходимо альдегиды сконцентрировать и выделить их из сложной смеси химических веществ. Нам казалось, что наиболее приемлемо для этой цели перевести альдегиды в нелетучие окрашенные продукты, экстракция этих продуктов летучим растворителем с последующим испарением его до получения сухого остатка; последний растворять в малом объеме растворителя и использовать для фотометрического определения.
Для получения из альдегидов нелетучих производных мы выбрали солянокислый фенилгидразин, который рекомендован в качестве избирательного реагента для высокомолекулярных альдегидов (Губен-Вейль). Для экстракции полученных производных фенилгидразонов, окрашенных в желтый цвет, наиболее подходящим оказался гексан. Последний практически не растворяет солянокислый фенилгидразин, что исключает его мешающее влияние на дальнейшее количественное определение альдегидов. Получению фенилгидразонов из альдегидов предшествовали опыты по устранению мешающего влияния минеральной (серной) кислоты, которую предварительно нейтрализовали ацетатом натрия. Наиболее благоприятна для образования фенилгидразонов альдегидов, получаемых из белофоров КБ и КД, была среда с рН, равной 7,0.
Далее мы выявляли оптимальные условия образования фенилгидразонов (соотношение реагентов, температура, время) и их устойчивость во времени. Количество солянокислого фенилгидразина, потребное для образования фенилгидразонов альдегидов, определяли методом изомо-лярных серий; при этом установлено, что наиболее благоприятным для получения фенилгидразонов альдегидов является соотношение белофо-ра КБ и солянокислого фенилгидразина, равное 0,3:0,7, а для белофора КД и солянокислого фенилгидразина — 0,4:0,6.
Образование фенилгидразонов протекает во времени, а нагревание заметно ускоряет реакцию. Полученные результаты позволили оптимальным временем образования фенилгидразонов считать 30 мин при нагревании реакционной массы на кипящей водяной бане.
Было также отмечено, что величины оптической плотности растворов фенилгидразонов альдегидов, образованных при оптимальных условиях из белофоров КБ и КД, не изменялись в течение 2 ч. Это может свидетельствовать об устойчивости полученных фенилгидразонов в течение изученного времени. Результаты опытов показали также, что достаточно эффективное извлечение фенилгидразонов альдегидов из реакционной массы гексаном достигается путем 3-кратной экстракции.
В результате были приготовлены серии стандартов для количественного определения белофоров КБ и КД, согласно таблицам 1, 2.
Опытами установлено, кроме того, что формальдегидсодержащая пропитка, которой обрабатывают хлопчатобумажные ткани, не мешает определению белофоров КБ и КД. Моющие средства «Лотос» и «Биосфера» занижают количество каждого из белофоров в пробе от 20 до 30%.
Предложены методы количественного определения белофоров КБ и КД — в водных растворах. Перед анализом готовят стандартные растворы каждого из белофоров КБ и КД с содержанием 1 мг/мл путем их нагревания на кипящей водяной бане до полного растворения белофоров. Прозрачные растворы используют для приготовления шкал стандартов, как указано в табл. 1 и 2.
Таблица 1
Шкала стандартов для количественного определения белофора КБ
Таблица 2
Шкала стандартов для количественного определения белофора КД
№ стандартов 1 2 3 4 5 N« стандартов 1 2 3 4 5
Количество стан- Количество стандарт- *
дартного раство- ногораствора ссодер- 0,1 О.з 0,5 0,7
ра с содержанием жанием 1 мг/л (в мл) 1,0
1 мг/мл (в мл) 0.1 0,3 0,5 0,7 1,0 Количество воды (в мл) 0,9 0,7 0,5 0,3 0
Количество воды Содержание белофора 0,3 0.5 0,7 1.0
(в мл) 0,9 0,7 0,5 0,3 0 в пробе (в мг) 0.1
Содержание бело- 0,7
фора (в мг) 0,1 0,3 0,5 1,0
К каждому стандарту прибавляют по 0,13 мл раствора серной кислоты (1:3) и 0,08 мл 2 н. раствора перманганата калия при исследовании белофора КБ (при исследовании белофора КД приготовляют 1,4 мл серной кислоты и 0,4 мл перманганата калия). Реакционные смеси оставляют в темном месте на 7 мин. Затем к каждому стандарту прибавляют по 0,12 мл 2 н. раствора щавелевой кислоты для белофора КБ (а для белофора КД — 0,6 мл), нейтрализуют реакционную смесь насыщенным раствором ацетата натрия до рН, равной 7,0, по индикаторной бумаге, прибавляют по .0,92 мл 0,003 М раствора солянокислого фенил-гидразина (0,44 мл — для белофора КД) и ставят на 30 мин на кипящую водяную баню. Далее образовавшиеся в каждом стандарте гид-разоны экстрагируют гексаном трижды порциями по 2,5 мл в течение 3 мин (для белофора КД — порциями по 5 мл). Все 3 порции экстракта собирают вместе, выпаривают. Полученный сухой остаток растворяют 2,5 мл этилацетата и измеряют величину оптической плотности в кювете шириной 5 мм при длине волны 364 нм. По полученным средним данным строят соответствующие калибровочные графики, которые используют для количественного определения белофоров КБ и КД в воде и в воздухе.
При определении белофоров КБ и КД в воздухе пробы отбирают на бумажный фильтр со скоростью 15—20 л/мин. Затем белофоры смывают с фильтров водой и анализируют водные растворы, как указано выше. Контролем служит «смыв» из бумажного фильтра, не использованного для анализа.
ЛИТЕРАТУРА. Губен-Вейль. Методы органической химии Ч. 2. М., 1963, с. 442. — У отер с У.-А. Механизмы окисления органических соединений. М.. 1966, с. 146—148. — Ьа11пак У. — "Л. СИгота^г.", 1964, V. 14, р. 482—484.
Поступила 24/1V 1975 г.
УДК 576.851.49 (Salmonella).01:631.46].083.31
Г. В. Меренюк, AI. И. Тарков, М. Г. Бранд
КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ МЕТОД ВЫДЕЛЕНИЯ САЛЬМОНЕЛЛ ИЗ ПОЧВЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЖИДКИХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД
.Молдавский научно-исследовательский институт гигиены и эпидемиологии, Кишинев
Нашей задачей явилась микробиологическая оценка качества некоторых наиболее широко используемых в практике питательных сред, предназначенных для бактериологической диагностики сальмонеллезов, разработка количественного метода выделения сальмонелл из почвы с использованием жидких питательных сред.
