CC BY
0
3. Необходимы дальнейшие изыскания по усовершенствованию этого уравнения с учетом данных сопоставления результатов расчета и физиологических наблюдений.
ЛИТЕРАТУРА
Буды ко М. И., Циценко Г. В. Изв. АН СССР. Серия географ., 1960, № 3, с. 3. — Циценко Г. В. Метеорологические факторы теплового состояния человека. Дисс. канд. Л., 19fr.. — Г о р о м о с о в М. С. Гиг. и сан., 1958, № 7, с. 66. — Мае-р he г son R. К., Brit. J. industr. Med., 1962, v. 19, p. 151. — W i n s 1 о w С. E. A., H e г -rington L. P., Gagge A. P., Am. J. Physiol., 1937, v. 120, p. 1.
Поступила 9/1V 1965 r.
УДК 614.31:М7.1]:541.6-074
ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАЛЫХ КОЛИЧЕСТВ ГЕКСАМЕТИЛЕНДИАМИНА В МОЛОКЕ
Е. В. Морозова, Н. Н. Знаменский (Москва)
Некоторые детали оборудования молочной промышленности изготовляют из полимерных материалов, в частности полиамидов, представляющих собой продукты поликонденсации гексаметилендиамина с ади-пиновой, себациновой и другими кислотами. Например, из полиамида 68 делают поплавки для доильных аппаратов, рабочие органы центробежных насосов и т. п.
Г'ексаметилендиамин используют также в качестве отвердителя эпоксидных компаундов, которые идут на покрытие емкостей для хранения и перевозки молока.
При эксплуатации названных емкостей и деталей или оценке новых партий полимера возникает необходимость проверки возможного перехода в молоко или молочные продукты некоторых компонентов полимерных материалов, например гексаметилендиамина, обладающего токсическими свойствами и являющегося исходным мономером ряда полиамидов.
Согласно методическому указанию, разработанному Московским институтом гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана и утвержденному Государственной санитарной инспекцией РСФСР, гексаметилендиамин определяют по реакции с динитрохлорбензолом (М. Г. Шевченко) или по методу Кьельдаля с колориметрическим исследованием азота с реактивом Несслера.
Применить эти методы для определения гексаметилендиамина в молоке невозможно, так как плазма (после отделения белка) из-за наличия в ней азотистых соединений дает зеленое окрашивание с динитрохлорбензолом.
Другие подобные методы в литературе не описаны. Возникла необходимость разработки качественного и количественного методов изучения гексаметилендиамина в средах, содержащих другие азотистые соединения. В этой связи представляет интерес реакция нингидрина (гидрата тригидриндена) с гексаметилендиамином, при которой образуется краситель типа мурексида (П. Каррер; Наз1ат и иёпэ), окрашивающий раствор в сине-фиолетовый цвет. Химизм нингидриновой реакции, по литературным данным, объяснить подробно не удается.
В небелковых азотистых органических веществах молока насчитывается около 3 мг% аминокислот, которые, как и гексаметилендиамин, дают с нингидрином сине-фиолетовое окрашивание. Поэтому необходи-
мо было отделить гексаметилендиамин от аминокислот. Такого разделения удалось достигнуть методом круговой бумажной хроматографии, основанным на различии значений коэффициентов распределения разделяемых веществ (А. Н. Белозерский и Н. И. Проскуряков). Кру1ювая бумажная хроматография имеет ряд преимуществ по сравнению с восходящим и нисходящим методами. Камера для такой хроматографии проста по конструкции, насыщение происходит быстрее и с лучшим эффектом разделения веществ (Miss и Segal).
Метод определения гексаметилендиамина в молоке ^авторское свидетельство № 161970) заключается в следующем. К 5 мл молока, подкисленного 10% раствором уксусной кислоты до pH 5,0, прибавляют
1 мл уксуснокислого свинца до полного осаждения белков 1 (проба на полноту осаждения). Осажденные белки отфильтровывают, фильтрат в количестве 0,1—1 мл наносят микропипеткой в центр хроматографической бумаги2 и подсушивают.
Размер листа хроматографической бумаги зависит от диаметра кристаллизаторов или чашек Петри, в которых проводят хро-матографирование. После подсушивания в центр нанесенного пятна вставляют фитиль из фильтровальной бумаги. Затем лист хроматографической бумаги вместе с фитилем помещают на кристаллизатор, а фитиль при этом опускают в элюирующий растворитель, находящийся в кристаллизаторе, олюирующии растворитель состоит из н-пропанола, аммиака (удельный вес 0,898) и воды в соотношении 6:3:1. Прибор закрывают кристаллизатором такого же диаметра.
В зависимости от размера аппарата элюирование длится от 1 до 21/г часов при 25—26°. По окончании элюирования фильтровальную бумагу вынимают и сушат на воздухе и затем при 105° в течение 20 мин. до полного удаления растворителя.
После этого фильтровальную бумагу смачивают раствором нин-гидрина в подкисленном уксусной кислотой бутаноле и высушивают при 25—26°. На это затрачивается около 10 часов3.
Полученные хроматограммы подвергают качественному и количественному анализу. Контрольный опыт проводится с водным раствором гексаметилендиамина.
Качественный анализ хроматограмм заключается в сравнении значений коэффициентов скоростей движения (Rf) в опыте и в контроле4 (А. Н. Белозерский и Н. И. Проскуряков; В. В. Рачинский и Т. Б. Гапон).
Для количественного определения окрашенную в сине-фиолетовый цвет концентрическую полосу (окружность), соответствующую гекса-
1 Для осаждения белков может быть применен любой осадитель, который не мешает исследованию.
2 При разработке метода применяли хроматографическую бумагу марки Б производства Ленинградской бумажной фабрики 2 им. В. Володарского.
3 Продолжительность сушки определяется необходимостью избежать искажения окраски хроматограмм.
4 Коэффициент скорости движения (Rf) представляет собой отношение расстояния, пройденного гексаметилендиамином, к расстоянию, пройденному фронтом растворителя.
0.10 0.06 0.06 ОМ 002
в
12 16 20 24 28
Градуировочная кривая зависимости оптической плотности £> от концентрации гексаметилендиамина при определении на фотоэлектрическом колориметре ФЭК-М.
По оси ординат — оптическая плотность О; по оси абсцисс—концентрация (в мкг).
метилендиамину, вырезают и экстрагируют водой; полученную водную вытяжку колориметрируют. Колсриметрирование проводят на фото-электроколориметре ФЭК-М с зеленым светофильтром и кюветами с рабочей длиной 5 мм.
Расчет количественного содержания гексаметилендиамина ведут при помощи градуировочной кривой (см. рисунок).
Чувствительность метода 1 мкг в 1 мл колориметрируемого раствора. Воспроизводимость значений коэффициента скорости движения зависит от качества бумаги, температуры, степени чистоты растворителей, однотипности проведения опытов и аппаратуры.
Метод прост по выполнению, не требует сложного оборудования и может быть рекомендован для применения при контрольных анализах соответствующих продуктов. Значение метода определяется и принципиальной возможностью использования его для определения гексаметилендиамина в присутствии других азотсодержащих веществ не только в молоке, но и в других средах
ЛИТЕРАТУРА
Белозерский А. Н., Проскуряков Н. И. Практическое руководство по биологии растений. М., 1951, с. 156; 190; 194.— Рачинский В. В., Гапон Т. Б. Хроматография в биологии. М., 1953, с. 152.-—Шевченко М. Г. Сборник важнейших официальных материалов по вопросам гигиены питания. М., 1963, с. 669. — Кар pep П. Курс органической химии. Л., 1962, с. 349. — Miss A., Segal F., Z. analyt. Chem., 1958, Bd. 165, S. 1. — Ha slam I., Udris J„ Analist., 1959, v. 84, p. 656.
Поступила 22/VI 1964 r.
УДК 628.3:576.851.48+576.851.2].093.6
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИТРОВ КИШЕЧНОЙ ПАЛОЧКИ И ЭНТЕРОКОККА В СТОЧНЫХ ВОДАХ
Г. П. Калина
Московский научно-исследовательский институт гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана
Совместно с И. С. Туровским мы проводили исследование осадка сточных вод — сырого и коагулированного при высоких показателях рН и обезвоженного на вакуум-фильтрах (1965). Санитарно-бактериологи-ческая оценка этого метода была дана на основании параллельного использования 2 методов — определения титра кишечной палочки при помощи классического трехэтапного бродильного метода Эйкмана и определения титра энтерококка двухэтапным методом, разработанным в Московском институте гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана (Г. П. Калина, 1965).
Результаты сравнительной оценки 2 примененных нами методов, не вошедшие в предыдущее сообщение, излагаются ниже.
Средние титры кишечной палочки и энтерококка
Показательный микроорганизм Сырой осадок Коагулированный Обезвоженный осадок
Кишечная палочка Энтерококк .... 5,9 4,7 2,4 2,9 2,3 2,1
Как указывалось ранее, при сравнении титра кишечной палочки с титром энтерококка был выявлен параллелизм между динамикой содержания каждого из этих микроорганизмов как показателей санитарного состояния осадков (см. таблицу).
