CC BY
57
УДК 615.322:074
О.В. Нагаслаева
Аминокислотный состав полиэкстракта «иммунополифит»
Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН (Улан-Удэ)
Изучен качественный и количественный аминокислотный состав сухого полиэкстракта «Иммунополифит». Идентифицированы, свободные и связанные аминокислоты, в полиэкстракте. Ключевые слова: полиэкстракт «Иммунополифит», аминокислоты
amino acids structure of polyextract «immunopolyfyt»
O.V. Nagaslayeva
Institute of general and experimental biology SB RAS, Ulan-Ude
The investigation is devoted, to qualitative and quantitative amino acids structure of dry polyextract «Immunopolyfyt». The free and connected, amino acids in a polyextract are identified.
Key words: polyextract «Immunopolyfyt», amino-acids
Дефицит витаминов, макро- и микроэлементов, аминокислот формируют факторы риска многих хронических заболеваний, снижает функциональную активность иммунной системы [2].
Лекарственные растения являются источниками биологически активных веществ, среди которых значительное место принадлежит аминокислотам [3]. Свободные аминокислоты выполняют в живом организме ряд специфических задач, участвуя в процессах связывания, транспорта и выведения из организма биологически активных форм азота, способствуя поддержанию азотистого баланса, обладая иммуноактивными свойствами и оказывая гиполипидемическое действие. Они оказывают положительное влияние на сердечно-сосудистую систему, участвуют в процессах нервной регуляции различных функций организма, а также влияют на сосудистый тонус [1].
Целью нашего исследования явилось изучение качественного и количественного аминокислотного состава сухого полиэкстракта «Иммунополифит».
материалы и методы
Основной объект исследования — сухой полиэкстракт «Иммунополифит», полученный на основе 8 фармакопейных растений [4].
Для качественного анализа аминокислот использовали очищенные водные извлечения и 30% спирт. Наличие аминокислот определяли нинги-дриновой пробой. В пробирке смешивали равные объемы исследуемого извлечения и 0,1 % свежеприготовленного раствора нингидрина; при осторожном нагревании в течение 3 — 5 мин появлялось розовато-фиолетовое окрашивание.
Хроматографический анализ осуществляли методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) на пластинках <^ПиГо1» в системах растворителей: «н-бутанол — уксусная кислота ледяная — вода» (4 : 1 : 2), (12:3:5) и «н-бутанол — пиридин — вода» (1 : 1 : 1) с достоверными образцами аминокислот. Хроматограммы высушивали на воздухе, обраба-
тывали 0,2% спиртовым раствором нингидрина и нагревали в сушильном шкафу при температуре 100—105 °С в течение 5 минут. Аминокислоты проявлялись в виде красновато-фиолетовых пятен.
Для более детального изучения содержания свободных аминокислот использовали автоматический аминокислотный анализатор марки ААА-339 (Чехия).
Подготовка образца для анализа включает следующие стадии: исчерпывающая экстракция водой, обработка хлороформом (с целью извлечения липидов и гидрофобных пигментов); осаждение полисахаридов двойным количеством 96% спирта, удаление осадка центрифугированием и концентрирование водного извлечения в вакууме. Сухие остатки (точные навески) растворяли в цитрат-литиевом буфере (рН 2.2) в объеме, определяемом в зависимости от концентрации аминокислот (для определения свободных аминокислот).
Связанные аминокислоты определяли после кислотного гидролиза 6 н раствором кислоты соляной при температуре 110 °С в течение 24 часов в ампуле. После ампулу вскрывали, соляную кислоту упаривали на роторном испарителе, остаток растворяли в натрий-цитратном буферном растворе до рН 2.2.
результаты и обсуждение
Аминокислоты обнаруживают в водном и спиртовом (30%) извлечениях с помощью нин-гидриновой реакции по розовато-фиолетовому окрашиванию.
Методом ТСХ в полиэкстракте обнаружено около 15 пятен красновато-фиолетового цвета (аминокислоты), в том числе со свидетелем идентифицированы 7 незаменимых (аргинин, валин, лейцин, лизин, метионин, треонин, фенилаланин).
С помощью аминокислотного анализатора в стандартных условиях в полиэкстракте выявлено наличие большого набора свободных и связанных аминокислот; идентифицировано около 23
Таблица 1
Свободные аминокислоты сухого полиэкстракта
№ Аминокислота нМ/мг № Аминокислота нМ/мг
1 2 3 1 2 3
1 Треонин * 0,88 12 Метионин * 2,82
2 Серин 5,20 13 Изолейцин * 2,04
3 Аспаргин 42,93 14 Лейцин * 0,81
4 Глютаминовая кислота 5,15 15 Фенилаланин * 2,23
5 Глютамин 3,66 16 у-аминомаслянная кислота 3,19
6 Пролин 84,33 17 Этаноламин 0,78
7 Глицин 2,41 18 Орнитин 0,15
8 Аланин 6,39 19 Лизин * 0,73
9 Цитруллин 0,09 20 Гистидин * 1,06
10 а-аминомаслянная кислота 3,38 21 Аргинин * 7,33
11 Валин * 3,43 22 Фосфоэтаноламин 10,93
23 Аспарагиновая кислота 0,82
Примечание: * - незаменимые аминокислоты.
Таблица 2
Связанные аминокислоты сухого полиэкстракта
№ Аминокислота нМ/мг № Аминокислота нМ/мг
1 2 3 1 2 3
1 Лизин * 6,14 9 Глицин 15,97
2 Гистидин * 6,74 10 Аланин 16,39
3 Аргинин * 38,64 11 Валин 20,94
4 Аспарагиновая кислота 117,98 12 Метионин * 1,92
5 Треонин * 10,79 13 Изолейцин * 5,96
6 Серин 16,17 14 Лейцин * 5,49
7 Глутаминовая кислота 51,07 15 Тирозин 2,50
8 Пролин 99,25 16 Фенилаланин * 30,90
Примечание: * - незаменимые аминокислоты.
аминокислот, в том числе 9 незаменимых аминокислот.
Результаты исследований представлены в таблицах 1 и 2.
выводы
1. Изучен состав свободных и связанных аминокислот сухого полиэкстракта «Иммунополифит». Обнаружено 23 свободных и 16 связанных аминокислот, в том числе 9 незаменимых. Содержание свободных аминокислот варьирует от 0,09 (цитруллин) до 84,33 (пролин), а количество связанных аминокислот — от 1,92 (метионин) до 117,98 (аспарагиновая).
2. Установлено, что суммарное содержание свободных аминокислот в полиэкстракте «Иммунополифит составляет 190,74 нМ/мг, при этом преобладают пролин и аспаргин.
литература
1. Западнюк В.И. Аминокислоты в медицине / В.И. Западнюк. - Киев, 1982. - С. 58-151.
2. Нагаслаева О.В. Пути поиска лекарственных растений с иммуномодулирующими свойствами / О.В. Нагаслаева, В.Б. Хобракова, И.Г. Николаева // Вестник Бурятского университета. Серия 11: Медицина. — Вып. 3. — Улан-Удэ : Изд-во Бурятского госун-та, 2003. — С. 179—188.
3. Сергунов Е.В. Изучение аминокислотного состава плодов и экстракта шиповника / Е.В. Сергунов, И.А. Самылина, А.А. Сорокина // Фармация. - 2003. - № 3. - С. 13-15.
4. Хобракова В.Б. Иммуномодулирующие свойства сухого экстракта «Иммунополифит» / В.Б. Хобракова, О.В. Нагаслаева // Сибирский медицинский журнал. - № 5, Т. 63. - Иркутск, 2006. - С. 72-74.
Сведения об авторах
Нагаслаева Ольга Васильевна - младший научный сотрудник, к. фарм. н. (670047, г Улан-Удэ, ул. М. Сахьяновой, д. 6, лаб. мед.-биол. исследований; тел.: 8 (3012) 43-37-46)
