CC BY
1
нением. Положительные отклонения объясняются, вероятно, большой чувствительностью бромидного комплекса теллура с бутилродамином С к присутствию даже незначительных количеств окислов азота, что приводит к необходимости их полного удаления из реакционной смеси.
Окончание анализа на содержание селена в пробе ведут по методике И. И. На-заренко и соавт., определяя элемент флюорнметрически с 2,3-диамино-нафталином. Теллур из той же пробы определяют спектрофотометрнчески с бутилродамином С iJI. С. Алексеева и соавт.).
Вывод
Предложен новый способ подготовки проб биологического материала для анализа легко летучих элементов; подобраны оптимальные условия вскрытия биообразца в случае определения в нем селена и теллура при их совместном присутствии.
ЛИТЕРАТУРА. Алексеева Л. С., Мурашова В. И., Бакунин а Л. И. и др. — «Завод, лабор.», 1971, № 12, с. 1299. — Назаренко И. Й., Кисло в A.M., Киселева И. В. и др. — «Ж- анат. химии.». 1970, №6, с. 1135. —Терещенко Б. С. — «Завод, лабор.», 1974, № 12, с. 1452.
Поступила 30/1 1975 г.
УДК 614.31:637.11-074:615.285.7+ [616.154.95 + 616.634.951-074:61 5.285.7
Канд. биол. наук А. Ф. Конюхов
ОПРЕДЕЛЕНИЕ БУТИФОСА В МОЛОКЕ, КРОВИ И МОЧЕ С ПОМОЩЬЮ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Всесоюзный институт экспериментальной ветеринарии, Москва
Бутифос (трибутилтритиофосфат) представляет собой легко подвижную жидкость коричневого цвета с очень резким неприятным запахом. Температура его кипения 154". Ядохимикат нерастворим в воде, но хорошо растворим во многих органических растворителях. Он выпускается промышленностью в виде концентрата эмульсии, содержащего 70% действующего вещества. В связи с широким использованием бутифоса в хлопководстве в качестве дефолианта возникает опасность загрязнения им не только окружающей среды, но и растений хлопчатника и его семян. Поэтому не исключено, что отходы переработки хлопчатника и его семян (лузга, шроты) могут быть загрязнены бутифосом; при скармливании их животным ядохимикат будет попадать в организм, а затем в продукты животноводства (молоко, мясо, масло, яйца) и создавать потенциальную опасность для населения.
Предложены методы определения бутифоса в лузке семян, хлопковом масле, шроте, хлопке-сырце и растениях хлопчатника (Ш. Т. Талипов и соавт; О. Г. Надточая и соавт.; Р. И. Шейнина и У. X. Халимоиа). Однако методов анализа бутифоса в молоке, крови и моче мы не нашли, хотя этот пестицид обладает кумулятивными свойствами (Н. М. Демиденко).
Для контроля за остаточными количествами бутифоса в молоке, а также для изучения динамики его накопления и выведения из организма животных при экспериментальном отравлении необходим доступный, простои
Результаты опытов на полноту обнаружения селена и теллура в минерализате биоматериала
Вещество Введено (в мкг) Число определенно Найдено
(в мкг) в минерализате отклон ение (в в %)
Селен 3 14 4,0—4,8 —20 ч—4
10 10 8,8—8,0 —20-;—12
Теллур 5 12 4,0—6,8 —20-т-+36
10 10 8,2—11,0 — 18-f--10
Внесено в пробу (в мкг) Н аАдено (в мкг) Процент определения
10 8,0 80
10 9,0 90
10 8,0 80
15 13,0 86,6
15 12,0 80
15 12,5 83,3
20 17,0 85
20 16,0 80
20 18,0 90
Результаты извлечения и специфичный метод. В связи с этим перед
оутифоса из молока, крови нами была поставлена задача — изыскать эф-и мочи ,
фективныи экстрагент и оптимальные условия для наиболее полного извлечения бу-тифоса из молока, крови и мочи, а также произвести очистку экстракта от коэкстрак-тивных веществ. Следовало также в предварительных опытах установить, какой проявитель и сорбент наиболее чувствительны для обнаружения бутифоса при хроматогра-фическом анализе в тонком слое сорбента. В опытах по изысканию экстрагентов испытаны хлороформ, эфир, ацетон, этанол н н-гексан, 2 проявителя (бромфеноловый синий и аммиачно-ацетоновый раствор азотнокислого серебра), а также 2 сорбента (силикагель марки КСК и окись алюминия для хроматографии).
В результате серии опытов установлено, что ацетон, бромфеноловый реактив и силикагель являются наилучшими для определения бутифоса в исследуемых биологических средах. Результаты количественного извлечения бутифоса из молока, крови и мочи представлены в таблице.
Для очистки экстрактов мы применяли перераспределение в различные несмешивающнеся растворители, вымораживание в ацетоне и колоночную хроматографию. Показано, что перераспределением бутифоса в н-гексан в комплексе с колоночной хроматографией достигается удовлетворительная очистка с наименьшей потерей бутифоса.
Таким образом, принцип предлагаемого нами метода определения бутифоса в молоке, крови и моче основан на извлечении ядохимиката ацетоном, очистке экстратов перераспределением бутифоса в н-гексан в комплексе с колоночной хроматографией, концентрировании экстрактов и хроматогра-фированнн в тонком слое силикагеля марки КСК в подвижной фазе гексан: ацетон (4 : 1). Для проявления бутифоса применяют бромфеноловый синий в смеси с азотнокислым серебром.
Чувствительность определения составляет 0,2 мг/л, точность метода — 83,4%.
Для приготовления пластинок с тонким слоем сорбента берут стеклянные пластинки размером 9x12 см, моют хромовой смесью, затем дистиллированной водой и сушат в вертикальном положении при комнатной температуре. Для приготовления сорбционной массы в фарфоровую ступку вносят 35 г силикагеля КСК, просеянного через сито 100 меш, 2 г гипса и тщательно перемешивают,затем переносят в коническую колбу с притертой пробкой. Приливают 90 мл дистиллированной воды и энергично встряхивают в течение 15 мин. Приготовленную массу в количестве 10 г наносят на пластинку и сушат при комнатной температуре в строго горизонтальном положении. Готовые пластинки хранят в эксикаторе.
Для приготовления проявляющего реактива берут 50 мг бромфенолового синего и растворяют в 10 мл ацетона, а затем доводят до 100 мл 1 % раствором азотнокислого серебра в смеси ацетон—вода в соотношении 3:1.
Для приготовления эталонного раствора бутифоса, содержащего 100 мкг действующего вещества в 1 мл, берут 0,1 мл 70 % концентрата эмульсии, переносят в 100-мл мерную колбу и доводят ацетоном до метки. Этот раствор содержит 7'Ю мкг бутифоса в 1 мл. Из него отбирают 1 мл, переносят в пробирку и приливают 6 мл ацетона, т. е. разводят в 7 раз и получают раствор, содержащий 100 мкг/мл.
Ход определения следующий. Пробу молока, крови или мочи в объеме 10 мл вносят в мерный цилиндр с притертой пробкой емкостью 100 мл, приливают 40 мл ацетона, экстрагируют встряхиванием 1—2 мин и скоагули-рованную массу отделяют фильтрованием через бумажный фильтр, а водно-
ацетоновый экстракт собирают в фарфоровую выпарительную чашку и ацетон удаляют выпариванием на водяной бане при 40°. Оставшийся водный раствор переливают в делительную воронку, приливают 20 мл н-гексана и экстрагируют встряхиванием 1 мин. Отделившуюся водную фазу выбрасывают, а гексановый экстракт собирают для очистки на колонке.
Стеклянную колонку диаметром 15 мл заполняют на 15 см окисью алюминия для хроматографии 11 степени активности и промыв ют н-гексаном (40 мл), а затем гексановый экстракт вносят в колонку. Для элюирования бутифоса через колонку пропускают порциями по 15—20 мл н-гексана в количестве 120 мл, элюаты собирают, объединяют и выпаривают на водяной бане при 40° до 2 мл, а затем при комнатной температуре до 0,1—0,2 мл и наносят шприцом или микропипеткой на пластинку с тонким слоем сорбента. Фарфоровую чашку, в которой концентрируют элюент, дважды смывают 0,2 мл н-гексана и наносят в ту же точку на пластинку.
Для идентификации пятен и их количественного определения на ту же пластинку наносят стандартный раствор бутифоса, содержащий от 5 до 20 мкг действующего вещества. Хроматограмму развивают в подвижной фазе гексан: ацетон (4 : 1). После подъема фронта подвижной фазы на 1С см от линии старта пластинку вынимают и сушат при комнатной температуре в вытяжном шкафу до испарения растворителя. Хроматограмму обрабатывают из пульверизатора смесью водно-ацетонового раствора бромфенолового синего и азотнокислого серебра и помещают в сушильный шкаф на 5—б мин при 50°.
После охлаждения пластинку опрыскивают 10% раствором уксусной кислоты или 2% раствором лимонной кислоты для удаления маскирующего фона. На желтоватом фоне пластинки бутифос проявляется в виде темно-синего пятна с /?/=0,50±0,02.
Количественное определение бутифоса производят путем визуального сравнения интенсивности окрашивания и размера пятен пробы с пятнами стандартных растворов.
Содержание бутифоса (X) (в мг/л) рассчитывают по формуле:
где А — количество препарата, найденное путем сравнения пятен пробы с пятнами стандартных растворов (в мкг); В — объем исследуемой пробы (в мл).
Метод апробирован в опытах при экспериментальном отравлении бу-тифосом кур и овец.
Выводы
1. Наилучшим экстрагентом для извлечения бутифоса из молока, крови и мочи является ацетон.
2. Очистку экстрактов от коэкстрактнвных веществ производят перераспределением бутифоса из водной фазы в н-гексан, а затем колоночной хроматографией на окиси алюминия.
3. Бутифос проявляется бромфеноловый реактивом в тонком слое силикагеля. Чувствительность определения составляет 0,5 мг/л.
ЛИТЕРАТУРА. Надточая О. Г., Грузинская Н. А., Стонов Л. Д. Труды 2-го Всесоюзного совещания по исследованию остатков пестицидов и профилактике загрязнения ими продуктов питания, кормов и внешней среды. Методы анализа. Таллин, 1971, с. 179—180. —Шейнина Р. И., X а л и м о в а У. X. — «Ветеринария», 1972, № 2, с. 103—104.
Поступила 27/VI 1975 г.
