CC BY
16
УДК 613.-19:661.1851-07:616.154
О. И. Волощенко, Л. Г. Голенкова
ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНИОННЫХ ПОВЕРХНОСТНО-АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИМ
МЕТОДОМ
Киевский НИИ общей и коммуналыюй гигиены им. А. Н. Марзеева
С каждым годом все большее применение в промышленности, сельском хозяйстве и быту находят поверхностно-активные вещества (ПАВ). Они встречаются во многих объектах окружающей среды: производственных сточных водах, почве, воздухе жилых помещений, атмосферном воздухе и др. Большая адсорбционная способность ПАВ приводит к тому, что они довольно прочно адсорбируются на тканях, кожных покровах, посуде.
Специфика применения этих веществ в том, что они находятся в контакте с кожей человека. Поэтому изучение возможности проникновения ПАВ в организм через кожный барьер представляет большой научный интерес и имеет важное практическое значение. Для этой цели была выяснена возможность определения анионных ПАВ в сыворотке крови. В литературе мы не нашли сведений о методах определения ПАВ в биологических субстратах, имеется лишь указание о наличии их в сыворотке крови животных [5], но методика не описана.
Проблема аналитического определения анионных ПАВ полностью не решена. Наиболее часто для анализа этих веществ в воде, почве и атмосферном воздухе используется метод с основным красителем метиленовым синим. Этот метод основан на том, что анионоактивные ПАВ образуют с красителем комплексные ассоциаты, растворимые в хлороформе с образованием синих растворов. Сам метиленовый синий в хлороформе не растворяется. Экстракцию указанного комплексного соединения хлороформом проводят сначала в щелочной среде (рН 10,0) а затем соединенные хлороформные экстракты промывают кислым раствором метиленового синего. Таким двойным экстрагированием устраняется мешающее действие ряда солей и белков, а предварительная обработка пробы перекисью водорода ликвидирует влияние сульфидов. Метод достаточно чувствителен (на уровне 0,05 мг/л).
Мы изучили возможность использования данного метода, который описан в литературе в разных вариантах [3, 4, 6], для определения анионных ПАВ в биологических средах. Однако прямое применение этого метода для такой сложной биологической среды, как сыворотка крови, невозможно ввиду высокого содержания различных компонентов, в частности белка, который имеет способность присоединять и удерживать на своей поверхности ПАВ и затрудняет экстрагирование проб, в результате чего нарушается
ход реакции, не происходит расслаивание водного и органического слоев.
Модификация указанного метода заключалась в подготовке сыворотки крови к анализу, что было связано с правильным выбором способа осаждения белков. Для этой цели использовали следующие реактивы: 0,04 н. раствор уксусной кислоты, трихлоруксусную кислоту, сульфат цинка и гидроокись бария, едкий натр и сульфат цинка, вольфрамат натрия [1]. Оказалось, что не все осадители отвечали поставленной задаче и тоже мешали дальнейшему количественному определению анионных ПАВ. Наиболее подхо^ дили растворы едкого натра и сульфата цинкаГ которые и были предложены для осаждения белков сыворотки крови.
Детергенты, являясь денатурирующими веществами, соединяются стехиометрически с противоположно заряженными группами белка [2], в связи с чем в жидкой биологической среде образуется комплекс белок — анионный детергент и в процессе осаждения белка они вместе выпадают в осадок. Поэтому для стабилизации белка необходимо полученный сложный комплекс вновь подвергнуть денатурации. В качестве денатурирующего агента в этом случае нами использован теплый (30—40°С) раствор этилового спирта, которым промывали выпавший осадок, что дало положительный эффект: анионные ПАВ перешли в раствор и это позволило измерить их количество.
Определение анионных веществ' данным способом проверено методом стандартных добавок Результаты представлены в таблице. Они свидетельствуют о том, что данный модифицированный метод позволяет измерить содержание ани-
Резу.чьтаты определения анионных ПАВ в сыворотке крови
Количество введенных анионных ПАВ, мкг Количество фактически найденных анионных ПАВ, мкг Среднее арифметическое, мкг Среднее квадратн-ческое отклонение, мкг Относительная ошибка, %
номер анализа
1 2 3 4 5 6 7 8
5 4 5,6 4 . 4 6,6 5,8 5.8 5,4 6.2 5.47 0.87 14.63
10 10 10.2 10.2 10,2 10.2 10,2 9,3 — 10.04 0.3 2.8
20 20. 6 20, 2 20,4 19,6 20, 1 20 20 19. 7 20,26 0. 33 1 .39
30 30,6 30, 6 30.6 30 28, 6 28.6 32 — 30, 14 1.21 3.73
40 40. 1 4 1.4 38,8 4 0,2 4 0.6 39 . 2 40 39.5 39.97 0. Я2 1.71
50 48.4 48.6 48,4 48,4 48 , 6 51,9 48 . 6 4 9 4 8. 98 1.19 1 . 99
Примечание. ( — ) — данные отсутствуют.
онных ПАВ в сыворотке крови. В анализируемом объеме (в 4 мл экстрагента) можно определить 3—5 мкг анионных ПАВ, относительная ошибка определения до 15 %.
Для определения используют: 1) 3 % раствор перекиси водорода, очищенный хлороформом (30 мл 3 % раствора перекиси и 90 мл хлороформа интенсивно встряхивают 2—3 мин и после расслаивания хлороформный слой сливают, а водный используют для анализа); 2) метиле-новый синий (0,017% водный раствор); 3) фосфатный буферный раствор рН 10,0 (1 г безводного двузамещеиного фосфата натрия растворяют в 10 мл воды, доводят до рН 10,0 добавлением 1 н. раствора едкого натра, разбавляют дистиллированной водой до 100 мл и перемешивают); 4) смесь фофатного буферного раствора рН 10,0, и раствора метиленового синего в соотношении 1:1. Смесь очищают хлороформом, для чего ее вносят в делительную воронку, добавляют 3 объема хлороформа, интенсивно встряхивают и после расслаивания хлороформный слой сливают, а водный применяют для анализа; 5) 0,3 % раствор серной кислоты; 6) 0,1 н. раствор едкого натра; 7) 5% и 0,5% водные растворы сернокислого цинка; 8) этиловый спирт; 9) стандартный раствор анионоактивного вещества, содержащий 0,1 мг вещества в 1 мл.
Ход определения анионных ПАВ в сыворотке крови следующий. В пробирку отбирают 0,1 мл сыворотки крови, добавляют дистиллированную воду до объема 1 мл, приливают 1 мл 0,1 н. едкого натра, 5 мл 0,5 % раствора сернокислого цинка, хорошо перемешивая содержимое пробирки, и ставят на 3 мин в кипящую водяную баню. Затем раствор фильтруют в колориметрическую пробирку через бумажный фильтр «синяя лента». Осадок на фильтре тщательно промывают теплым спиртом до объема 10 мл. К полученному раствору прибавляют 1 мл перекиси водорода, 2 мл смеси буферного раствора и метиленового синего, 4 мл хлороформа и экстрагируют 1 мин. Затем вносят 1 мл серной кислоты и опять перемешивают в течение 1 мин. Раствору дают расслоиться, отделяют нижний хлороформный экстракт и помещают его в сухую пробирку
с помощью фильтра со слоем ваты, смоченной хлороформом. Для стабилизации цвета пробы выдерживают 20 мин в темном месте. Измеряют оптическую плотность (X 650 им, 1 0,5 см) и по калибровочному графику находят содержание ПАВ.
Для построения калибровочного графика в ряд пробирок помещают 0,0,03,0,05,0,1,0,15, 0,2,
0.3. 0,5, 0,6 и 0,7 мл стандартного раствора, содержащего в 1 мл 0,1 мг анионоактивного вещества, добавляют дистиллированную воду до 1 мл, приливают реактивы и поступают так, как описано выше для проведения определения. Измерив оптическую плотность, строят калибровочную кривую, откладывая по оси абсцисс известные концентрации, а по оси ординат — соответствующие им разности оптической плотности стандартных растворов и холостой пробы. Раствором сравнения является хлороформ.
Предлагаемый метод может быть использован в гигиенических и биологических исследованиях при анализе анионных ПАВ при различных путях их поступления в организм.
Применение метода позволило выполнить исследования, которые показали, что ведущие представители анионных ПАВ — хлорный суль-фоиол и первичный алкилсульфат натрия — при многократном нанесении на неповрежденные кожные покровы морских свинок проникают в организм и влияют на содержание ПАВ в сыворотке крови.
Литература
1. Балаховский С. Д., Балаховский Н. С. Методы химического анализа крови. М., 1953.
2. Белки / Под ред. Т. Нейрата, К. Бейли. М., 1956, т. 2, с. 617—619.
3. Лурье 10. 10., Рыбникова А. И. Химический анализ производственных сточных вод. М., 1974.
4. Можаев Е. А., Линьков Ю. В., Капырина Л. М. — Гиг. и сан., 1969, № 10, с. 75—77.
5. Можаев Е. А. и др. — В кн.: Гигиена воды и санитарная охрана водоемов. М., 1973, с. 65—68.
6. Longwell J., Maniece W. D. — Analyst, 1955, vol. 80, p. 167—169; ABCM—SAC Joint Commitee, Analyst, 1957, vol. 82, p. 826—828.
Поступила 24.0!.85
УДК 6I4.3/.4-058
А. И. Губин, Н. В. Дячук, В. А. Дячук, В. В. Мазаее, Г. И. Нечипорук, Е. Г. Процек, Н. М. Хомякова
О КОМПЛЕКСНЫХ СОЦИАЛЬНО-ГИГИЕНИЧЕСКИХ ОБСЛЕДОВАНИЯХ ОБЪЕКТОВ САНИТАРНОГО НАДЗОРА
Винницкий медицинский институт им. Н. И. Пирогова
м
Влияние социально-экономических и санитарно-гигиенических факторов на здоровье различных кбнтингенгов работающих изучено во многих исследованиях [2—6]. Однако ни в одном
из них не прослежены в должной мере роль и место санитарно-эпидемиологической службы в улучшении здоровья работающих.
При сложившейся в настоящее время нагрузке
— 69 —
