CC BY
42
Романенко К.В. ОБ ОТНОШЕНИИ СКЛЕРО-АТРОФИЧЕСКОГО ЛИХЕНА К ОГРАНИЧЕННОЙ СКЛЕРОДЕРМИИ-
УДК 616.5-004.1-002.156-018.1-097-07
Об отношении склеро-атрофического лихена к ограниченной склеродермии (иммуногистохимическое исследование)
Романенко К.В.
Донецкий национальный медицинский университет им. М. Горького
ЩОДО В1ДНОШЕННЯ СКЛЕРО-АТРОФ1Ч-НОГО ЛИХЕНУ ДО ОБМЕЖЕНО1 СКЛЕ-РОДЕРМП (1МУНОГ1СТОХ1М1ЧНЕ ДОСЛ1Д-ЖЕННЯ) Романенко К.В.
З метою виявлення iмуногiстохiмiчних особливостей стану дерми i епщермюу при склеро-атрофiчному лихенi в порiвняннi з обмеженою склеродермieю в стади набряку було проведено дослщження мар-керiв: С03+, 008+, С020+, С079а+, 0068+, 001а+, С034+, С0105+, аБМА, вiментин, вЛЮБ, К/67, кола-ген IV, Ьс/2, каспаза 3. Виявлено, що iмуногiстохiмiчна картина при склеро-атрофiчному лихенi щодо iмунноí ланки та стану дермальних дендроци^в наближаеть-ся до тоí, що юнуе на стадií набряку при обмежешй склеродермií. Кiлькiсть i розподiл штин, позитивних на ендоглiн i вЛЮБ, свщчить про спiльнi шляхи патогенезу фiброзу при цих захворюваннях. При склеро-атрофiчному лихенi дермальн дендроцити залученi в апоптотичнi процеси в меншм мiрi, нiж при обмежешй склеродермп.
ON THE RELATIONSHIP OF LICHEN SCLE-ROSUS ETATROPHICUS AND THE LOCALIZED SCLERODERMA (AN IMMUNOHISTO-CHEMICAL STUDY) Romanenko K.V.
To reveal the immunohistochemical features of the derma and epidermis in cases of Lichen sclerosus et atrophicus (LSA) as compared to the localized scleroderma at the stage of edema, a study of the CD3+, CD8+, CD20+, CD79a+, CD68+, CD1a+, CD34+, CD105+, aSMA, vi-mentin, eNOS, Ki67, collagen IV, bcl2 and caspase 3 markers has been done. It has been revealed that the immunohistochemical pattern under LSA with respect to both the immune component and state of dermal den-drocytes approaches the one that exists at the stage of edema under the localized scleroderma. The number and distribution of cells positive to endoglin and eNOS are indicative of common ways of fibrosis pathogenesis under these diseases. Under LSA the dermal dendrocytes are involved in apoptotic processes less than under the localized scleroderma.
Склеро-атрофический лихен (САЛ; син.: каплевидная склеродермия, болезнь белых пятен, белый лишай Цумбуша, крауроз вульвы, крауроз полового члена) - хроническое заболевание неизвестной этиологии, характеризующееся очаговой атрофией кожи и слизистых. Участки поражения представлены белыми плотными папулами и бляшками неправильной формы с четкими границами [1]. Описаны случаи сочетания САЛ и ограниченной склеродермии (ОС) [2]. В последние годы возможности изучения патогенеза склеродермии расширились благодаря иммуногистохимическим (ИГХ) методам исследования [3].
Цель работы - выявление изменений в со-
1-2 2010 Дерматовенерология. Косметология. Сексопатология
ставе клеток дермы и эпидермиса; клеток иммунного ряда; синтезе коллагена IV типа, эн-дотелиальной синтазы оксида азота, эндоглина при САЛ в сравнении с ОС на стадии отёка.
Материал и методы исследования. Для
морфологического и иммуногистохимиче-ского исследования использовали парафиновые блоки биопсийного материала, взятого у 12 больных САЛ и ОС на стадии отёка. После рутинного патогистологического исследования, срезы толщиной 4-6 мкм наносили на адгезивные стекла SuperFrost Plus и депарафинизиро-вали по стандартной методике. Затем проводили нагревание в цитратном буфере с рН = 6,0 в автоклаве (8 мин. при температуре +121°С).
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
С целью определения экспрессии ИГХ маркеров использовали спектр антител, которые включали маркеры:
- CD3+ (клон SP7, LabVision);
- CD8+ (клон SP16, LabVision);
- CD20+ (клон L26, LabVision);
- CD79a+ (клон 18, LabVision);
- CD68+ (клон КР1, ГлЬУШоп);
- CD 1а+ (клон МТВ1, LabVision);
- CD34+ (клон дВЕпс!/10, LabVision);
- CD105+ (клон £М6Л, ГлЬШоп);
- аБМА (клон 1А4, LabVision);
- виментин (клон £Р20, LabVision);
- еЫ05 (клон LabVision);
- К'67(клон £Р6, LabVision);
- коллаген IV (клон РНМ-12, LabVision);
- Ьс12 (клон 100/D5, LabVision);
- каспаза 3 (клон 3С£Р01, LabVision).
Инкубацию срезов с первичными антителами проводили во влажных камерах при температуре 23-25°С в течение 30 мин. Титр антител подбирался индивидуально. Следующий этап ИГХ исследования проводили с использованием систем визуализации UltraVisionLP (LabVision); идентификация реакций проводилась с помощью хромогена DAB под контролем микроскопа от 20 с до 3 мин. Срезы докрашивали гематоксилином Майера.
Результаты и их обсуждение. На стадии отёка ОС в периваскулярных инфильтратах, мононуклеарных скоплениях вокруг придатков кожи преобладали незрелые формы 5-лимфо-цитов (20-40 %) и Г-лимфоциты (20-40 %), среди последних - Г-супрессоры. В инфильтратах присутствуют макрофаги (до 30 %). Активность eNOS в эндотелии сосудов повышена. Синтез CD105+наблюдался в дермальных дендроцитах, иммунных клетках инфильтратов и в единичных макрофагах. Среди иммунных, макрофаги составляли наибольшее число CD105+ клеток. Количество CD34+ дендроцитов было сниженным, а клеток Ланхгерганса (CD1a+), виментин+ и а5МА+ дендритических клеток увеличивалось. В участках вокруг придатков кожи изменения клеточного состава были более существенны. С участками иммунного воспаления была связана повышенная пролиферативная и апоптоти-ческая активность, а также активация антиапоп-тотических программ. Таким образом, стадия отёка при ОС обусловливает активные измене-
ния как со стороны иммунной системы, так и местные перестройки тканей кожи.
При САЛ лимфоциты, позитивные на CD3+, обнаруживались в значительном количестве в участках периваскулярной инфильтрации и в области эпидермодермального перехода. CD3+ Г-лимфоциты составляли около 60 % всех клеток инфильтрата; при этом около 40 % моно-нуклеарных клеток были CD8+ позитивными. Относительная доля CD20+ клеток, независимо от локализации инфильтрата, составляла 15-20%; приэтомдоминирующимибылиCD79a+ 5-лимфоциты. Макрофаги, позитивные на CD68+, составляли значительную часть лихено-идного инфильтрата; также в эпидермисе в повышенном количестве обнаруживались клетки Ланхгерганса. CD105+ клетки обнаруживались в лихеноидном инфильтрате и в эндотелии сосудов в значительном количестве; при этом активность эндотелиальной синтазы оксида азота находилась на низком уровне. Во всех слоях дермы и вокруг придатков кожи значительно снижалось число CD34+ дендроцитов. Уменьшение количества сосудов также обуславливало снижение реакции с этим маркером. Мы обнаружили увеличение количества виментин-позитив-ных и а5МА+ клеток с основной локализацией их в поверхностных слоях дермы. Клетки, положительные на виментин, также наблюдались в сосочковом слое дермы, где они формировали мелкие скопления. Расположенные диффузно в значительных количествах, они обнаруживались в сетчатом слое. Выраженность прослойки коллагена IV значительно снижалась в базаль-ной мембране эпидермиса и в меньшей степени - вокруг придатков кожи. Вокруг сосудов мелкого и среднего калибра обнаруживалась повышенная концентрация коллагена этого типа.
При САЛ активная реакция с К67+ обнаруживалась в клетках лихеноидного инфильтрата, тогда как эпидермис базального слоя и придатков кожи демонстрировал сниженную пролифе-ративную активность. Наиболее значительная реакция на каспазу наблюдалась в клетках инфильтрата, в значительно меньшем количестве обнаруживались позитивные на каспазу ден-дроциты. Антиапоптотическая активность иммунных клеток в составе инфильтратов была на высоком уровне, а в дермальных дендроцитах доля позитивных на Ьс12 не превышала 10 %.
Дерматовенерология. Косметология. Сексопатология
1-2 2010
Романенко К.В. ОБ ОТНОШЕНИИ СКЛЕРО-АТРОФИЧЕСКОГО ЛИХЕНА К ОГРАНИЧЕННОМ СКЛЕРОДЕРМИИ-
Таким образом, при САЛ преобладали инфильтраты, насыщенные макрофагами и Г-лимфоцитами, среди которых большую долю составляли Г-супрессоры, т. е. по иммунному статусу это состояние является более близким к ОС в стадии отёка. Распределение и количество дермальных клеток (снижение СО34+, увеличение виментин-позитивных и аБМЛ+ клеток, клеток Ланхгерганса) свидетельствует об активных воспалительных процессах наряду с прогресси-рованием фиброзных изменений. На общность механизмов развития фиброза при САЛ и ОС указывали повышение уровня СО 105+ клеток и существенное снижение уровня эндотелиаль-ной синтазы оксида азота. Судя по изменениям в распределении коллагена IV типа, перестройки в составе матриксных белков и белков базаль-ных мембран при САЛ также имели общие черты с ОС. Во всех изученных случаях ОС и САЛ повышенная пролиферативная активность была связана с участками инфильтрации; дендро-циты, позитивные на К/67, встречались очень
литература
1. Романенко К.В. Сочетание склеро-атрофи-ческого лихена и бляшечной склеродермии / Питання експериментально! та ктшчно! ме-дицини: Зб. статей. - Вип. 13, Т. 2. - Донецьк, 2009. - С. 131-136.
2. Вулф К., Джонсон Р., Сюрмонд Д. Дерматология по Томасу Фицпатрику: Атлас-спра-
редко. Таким образом, повышение количества позитивных на виментин и аБМЛ дермальных клеток связано со сменой фенотипа в большей степени, чем с размножением. При САЛ в меньшей степени, чем при ОС, дермальные дендро-циты вовлечены в апоптотические и параллельные им антиапоптотические изменения. Активность каспазы 3 и Ьс12 в клетках инфильтратов находится приблизительно на одном уровне при ОС (стадия отёка) и САЛ.
Выводы. Иммуногистохимическая картина при склеро-атрофическом лихене, как в отношении иммунного звена, так и состояния дер-мальных дендроцитов, приближается к той, что существует на стадии отёка при ограниченной склеродермии. Количество и распределение клеток, позитивных на эндоглин и еЫОБ, свидетельствует об общих путях патогенеза фиброза при этих заболеваниях. При склеро-атрофиче-ском лихене дермальные дендроциты вовлечены в апоптотические процессы в меньшей степени, чем при ограниченной склеродермии.
вочник. - М.: Практика, 2007. - 1248 с. 3. Савенкова В.В. Особенности морфо- и патогенеза кожи больных очаговой склеродермией в острой стадии заболевания // Дерма-толопя та венеролопя. - 2008. - № 4 (42). -С. 26-30.
1-2 2010 Дерматовенерология. Косметология. Сексопатология
