CC BY
7
УДК 614.777-078:576.851.48
О КРИТЕРИЯХ САНИТАРНОЙ ПОКАЗАТЕЛЬНОСТИ БАКТЕРИИ ГРУППЫ КИШЕЧНОЙ ПАЛОЧКИ1
Г. П. Калина, А. Н. Блинкова (Москва)
Летом 1964 г. нами в составе комплексной экспедиции Института гигиены им. Ф. Эрисмана была исследована вода р. Ангары от Иркутска до Братского водохранилища включительно с целью выявления санитарной значимости различных представителей группы кишечной палочки. Всего проанализировано 46 проб воды, взятых в пунктах с различной санитарной характеристикой. Сопоставляя последнюю с колебаниями индекса энтерококков, мы имели возможность разбить все пункты, в которых отбирали воду, на 2 группы: к 1-й из них отнесены участки с несомненным и свежим фекальным загрязнением, ко 2-й — участки, благополучные в санитарном отношении. В 1-й группе индекс энтерококков был высок и в логарифмическом выражении составлял в среднем 4,81; во 2-й группе он был значительно ниже — в среднем 2,74. В 1-ю группу вошло 11 проб, во 2-ю—35. Подобное несоответствие оправдано тем, что в районах с благополучной санитарной характеристикой, как правило, наблюдается большее разнообразие видового состава группы кишечной палочки, чем в районах с явным фекальным загрязнением, где преобладают преимущественно Е. coli, а прочие виды и разновидности группы кишечной палочки обнаруживаются в незначительном количестве.
Воду на содержание кишечной палочки мы исследовали мембранным методом. Чашки со средой Эндо и помещенными на среду фильтрами выращивали при 37°. Отбирали все типичные красные колонии и выборочно по 1-—2 прочих типов колоний — бесцветных, слизистых, малотипичных. Всего снято 610 колоний, подвергнутых подробному изучению, при последующих пересевах 46 выделенных штаммов утратили способность роста, 113 не принадлежали к семейству Enterobacteriaceae (10 штаммов споровых аэробов, 7 штаммов стафилококков, 1 штамм протея, 95 штаммов бактерии рода Pseudomonas). В отношении остальных штаммов был проведен температурный тест (способность сбраживать глюкозу при 43°) и исследован комплекс ЛИМАЦ (лактоза, индол, реакция с метиловым красным,- продукция ацетилметилкарбинола и использование цитратных солей).
По температурному тесту к санитарно-показательным могло быть отнесено всего 140 (31%) штаммов, а если ориентироваться на Е. coli тип I (индольный) и II (безиндольный), то из 140 штаммов, снятых с мембранных фильтров и сбраживающих глюкозу при 43°, лишь 54 штамма могли быть квалифицированы как санитарно-показательные Е. coli, т. е. из первоначально отобранных 610 колоний типичные Е. coli составляли всего 8,9%- Эти данные серьезно дискредитируют мембранный метод в том виде, в котором он предложен ГОСТ 5216-50. Вызывается необходимость обсудить вопрос об изменении методики мембранного метода (инкубация чашек с фильтрами при 43—44° вместо 37°).
По комплексу ЛИМАЦ все выделенные штаммы (принадлежавшие к семейству Enterobacteriaceae) дали 20 различных комбинаций признаков из 32 возможных, а сбраживающие глюкозу при 43°—14 комбинаций. Свыше 85% комбинаций ЛИМАЦ описаны в различное время разными авторами или прочно вошли в классификацию бактерий группы кишечной палочки. Из не описанных до настоящего времени вариант
Печатается в порядке обсуждения.
-----^ был представлен 41 штаммом и вариант--1----Ь 14 штаммами. Из этих 55 штаммов только 9 сбраживали глюкозу при 43°.
Значение всех выделенных видов и разновидностей кишечной палочки с санитарно-показательной точки зрения можно было выявить лишь при анализе их распределения в объектах с несомненным фекальным загрязнением (1-я группа А) и в объектах, благополучных в санитарном отношении (2-я группа Б).
При проведении температурного теста все исследованные штаммы группы кишечной палочки были разбиты на 3 группы: 1) сбраживающие
Т а б л и ц^а 1
Распределение штаммов по температурному тесту
Объекты Сбраживающие глюкозу при 43° Сбраживающие зу при 43 и глюко-37° Рост без газа при 43 и 37°
абс. % абс. % абс. %
А. Объекты с фекальным за- 23 17,5
грязнением ....... 73 62,5 24 20
Б. Объекты, благополучные 49 102 30,8
в санитарном отношении 67 20,2 162
глюкозу при 43°; 2) сбраживающие глюкозу только при 37°; 3) дающие кислоту без газа при 37 и 43°. Распределение этих трех групп в объектах А и Б показано в табл. 1.
Табл. 1 свидетельствует о том, что из выделенного в объектах группы Б 331 штамма лишь 67 (20,2%) обладали способностью сбраживать глюкозу при 43°. Напротив, в фекально загрязненных водах такие штаммы составили 62,5% (73 из 120).
Таким образом, в водах с несомненным фекальным загрязнением преобладают штаммы бактерий группы кишечной палочки, дающих положительный температурный тест. В воде, благополучной в санитарном отношении, такие штаммы составляют меньшинство — преимущественно выделены штаммы, сбраживающие углевод только при 37° или лишенные способности газообразования (безгазовые). Исходя из этих данных, мы будем проводить последующий анализ лишь в отношении штаммов с положительным температурным тестом.
Прежде всего мы выяснили, в какой степени для определения происхождения бактерий группы кишечной палочки и их санитарно-показа-тельного значения необходимо прибегать к дифференциации при помощи комплекса ЛИМАЦ, рекомендуемого в ряде зарубежных стандартов и полностью игнорируемого в существующем ГОСТ 5216-50. Е. coli, расцениваемая как единственный показатель свежего фекального загрязнения индольного и безиндольного типов, соответствует формулам
+ + -1---и Н---1---. Оба эти типа были выделены как из вод
объекта А, так и из вод объекта Б, однако в различных пропорциях: из 54 штаммов этих двух типов, сбраживающих лактозу при 43°, выделено 48 (88,9%) из вод фекально загрязненных и только 6 (11,1%) из вод с благополучной санитарной характеристикой. Характерно, что только 6 штаммов Е. coli типа I и II не сбраживали глюкозу при 43°. Все эти штаммы выделены из воды с благополучной санитарной характеристикой.
В отношении всех выделенных штаммов группы кишечной палочки оба варианта Е. coli, сбраживающие глюкозу при 43°, составили в водах объекта А 65,8%, а в водах объекта Б лишь 9%. Таким образом, таксономическая характеристика выделяемых из внешней среды бактерий груп-
5 Гигиена и санитария, № 9
65
пы кишечной палочки имеет безусловное значение при оценке санитарного состояния водоема по санитарно-биологическим показателям.
Возникает вопрос, в какой степени необходимо сложное исследование выделенных штаммов по всем признакам комплекса ЛИМАЦ? Распределение изученных штаммов по отдельным признакам в объектах А и Б показано в табл. 2. Из штаммов с положительной температурной характеристикой, выделенных из воды с фекальным загрязнением,
Таблица 2
Анализ отдельных признаков комплекса ЛИМАЦ
Признаки Объекты А Объекты Б
+ +
абс. X абс. абс. х абс. %
Разложение лактозы..... 60 82,2 13 17,8 41 61,2 26 38,8
Образование индола ..... 40 54,8 33 45,2 32 47,8 35 52,1
Реакция с метиловым красным 64 87,7 9 12,3 58 86,6 9 13,4
Образование ацетилметилкарби-
нола............ 4 5,5 69 94,5 2 3 65 97
Рост в среде Козера .... 22 30 51 70 59 88 8 12
Комбинация 3 признаков (тем-
пературный тест, сбражива-
ние лактозы и отсутствие
роста в среде Козера) . . . 48 65,8 25 34,2 6 9 61 91
60 (82,2%) лактозоположительны; в водах объекта Б таких штаммов также достаточно много (61,2%). Таким образом, лактозный признак, взятый изолированно, лишь относительно указывает на возможное фекальное загрязнение.
Признак образования индола сам по себе мало способствует указанию на происхождение штамма: почти никакой разницы между содержанием штаммов с положительным индольным признаком в водах объектов А и Б не имеется.
В отношении реакции с метиловым красным (интенсивность кисло-тообразования в среде с углеводом) не найдено существенной разницы.
Вопреки ожиданиям количество штаммов, продуцирующих ацетил-метилкарбинол, в водах обоих объектов оказывается незначительным.
Использование цитратных солей как единственного источника углеродного питания — наиболее показательный признак наряду с температурным тестом: 51 штамм (70% всех выделенных из вод объекта А штаммов группы кишечной палочки, сбраживающих глюкозу при 43°) не растет в среде Козера; всего лишь 12% штаммов из воды, благополучной в санитарном отношении, обладают этим отрицательным свойством, указывающим на фекальное загрязнение.
Таким образом, из всех признаков комплекса ЛИМАЦ наибольшее значение в разграничении санитарно-показательных и не санитарно-по-казательных представителей группы кишечной палочки имеет температурный тест и отсутствие роста в цитратной среде Козера. Вместе с лак-тозным признаком, ценность которого весьма относительна, эти признаки позволяют четко разграничить санитарно-показательные Е. coli от прочих представителей группы кишечной палочки, играющих лишь ограниченную роль в оценке санитарного состояния объекта. В воде, фекально загрязненной, штаммы с ограниченной формулой ЛЦТ составили 65,8%, а в воде без явного фекального загрязнения — всего лишь 9%. Эти данные полностью совпадают с теми, которые относятся к распределению в водах обеих групп Е. coli. Следовательно, предлагаемая нами сокращенная формула может заменить полную формулу
ЛИМАЦ. Если учесть, что температурный тест можно совместить с определением способности сбраживать лактозу, то выявление фекальных кишечных палочек ограничивается дополнительным посевом (при любом бродильном или мембранном методе) в среду Козера (при условии, что «вторичная бродильная проба» будет проведена в пептонной воде с лактозой вместо среды с глюкозой).
Выводы
1. Анализ штаммов бактерий группы кишечной палочки, выделяемых из вод открытых водоемов с фекальным загрязнением и вод, благоприятных в санитарном отношении, свидетельствует о том, что показателем фекального загрязнения следует считать лишь Е. coli I (индольного) и II (безиндольного) типов. Все остальные представители группы кишечной палочки не могут быть такими показателями. Поэтому при исследовании воды открытых водоемов, выборе новых источников водоснабжения и периодическом контроле уже существующих источников необходимо учитывать только указанные разновидности Е. coli.
2. Мембранный метод колиметрии в том виде, в каком он рекомендован ГОСТ 5216-50, допускает развитие на фильтрах значительного количества (по нашим данным, свыше 90%) колоний микробов, или не входящих в группу кишечной палочки, или не сбраживающих углеводы при 43°, или не санитарно-показательных. Устранить это возможно лишь инкубированием чашек с фильтрами на диагностических питательных средах при 43—44° и проверкой в средах с лактозой и Козера.
3. При выявлении санитарно-показательных Е. coli можно ограничиться определением способности сбраживать лактозу при 43—44° и отсутствием роста в среде Козера.
Поступила 12/X 1965 г.
УДК 615.9:614.3]-092-07:616-008.922.1-074
ПОЛЯРОГРАФИЧЕСКИЙ МЕТОД ИЗУЧЕНИЯ СКОРОСТИ ПОТРЕБЛЕНИЯ КИСЛОРОДА ТКАНЯМИ IN VIVO
В САНИТАРНО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОМ ЭКСПЕРИМЕНТЕ
Т. А. Попов, И. М. Эпштейн, И. П. Березин
Институт общей и коммунальной гигиены им. А. Н. Сысина АМН СССР, Государственный онкологический институт им. И. А. Герцена, Институт экспериментальной и хирургической аппаратуры и инструментов, Москва
Нарушение окислительно-восстановительных процессов в тканях характерно для многих химических ингредиентов и веществ. Поэтому в санитарно-токсикологическом эксперименте может оказаться необходимым использование ряда методик для определения кислородного баланса в тканях. При регистрации кислорода в живых тканях возможно применение полярографического метода.
Мы использовали полярографический метод регистрации напряжения кислорода (Р02) при помощи схемы с наложением внешней электродвижущей силы (э. д. с.) на электроды.
Ставился подострый опыт на белых крысах весом 280—320 г в 3 сериях (по 8 крыс в каждой), причем 1 из них была контрольной. Крысам I серии в течение 80 дней вводили перорально водный раствор 2, 4 динитрофенола (ДНФ) в концентрации '/го LD5o, т. е. 1,5 мг/кг (Т. А. Попов). Крысам II серии вводили ту же дозу ДНФ од-
5*
67
