Новый набор реагентов для определения опухолевого маркера «РЭА-Имаксиз (IMAXYZ)» Текст научной статьи по специальности «Медицинские технологии»

пшшиим

р и в с л

№ 8 (138) октябрь, 2015

[КОНСИЛИУМ. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА)

Е.Е. БЕЛУГИНА, А.А. БЕСПАЛОВ, С.С. СЫРНИКОВА, М.Ю. ПРОКОШЕВА, г. Санкт-Петербург

Новый набор реагентов для определения опухолевого маркера «РЭА-Имаксиз (IMAXYZ)»

ВВЕДЕНИЕ

Рак по-прежнему является одним из наиболее частых причин смертности во всём мире. По данным ВОЗ к 30-м годам 21 века число выявляемых случаев вырастет до 22 млн ежегодно. И среди них самые опасные для жизни виды новообразований - это опухоли лёгкого, печени, желудка, прямой кишки, груди и пищевода. Современные методы выявления и терапии онкологических заболеваний немыслимы без применения неинвазивных методов диагностики. В одном ряду с ультразвуковой диагностикой, эндоскопией и радиографией находится и определение специфических молекул в сыворотке крови - онкомаркеров.

На данный момент врачами используется более 20 онкомаркеров. Некоторые из них связаны с одним видом рака, другие - с несколькими. Нет универсального маркера, который выявлял бы все виды злокачественных опухолей. При неконтролируемом размножении опухолевых клеток создаются условия, в которых возможна экспрессия «молчащих» в нормальных условиях генов. Некоторые из этих генов кодируют дифференцировочные антигены, в норме ассоциированные с ранней стадией развития плода. К таким онкофетальным антигенам относятся альфа-фетопротеин (АФП) и раково-эмбриональный антиген (РЭА), экспрессируемый опухолями желудочно-кишечного тракта и молочной железы.

РЭА был впервые охарактеризован Голдом и Фридманом в 1965 году в

качестве маркера колоректального рака. Это гликопротеин с массой около 180 кДа, проявляющий значительную вариабельность за счёт своей аминокислотной последовательности и во многом за счёт полисахаридной части, которая составляет от 50 до 85% массы молекулы.

Повышенные сывороточные уровни РЭА можно обнаружить при наличии в организме человека разнообразных доброкачественных и злокачественных новообразований, отличающихся от карциномы толстой кишки. Состояния, которые могут вызвать повышенные уровни РЭА, включают цирроз печени, гепатиты, бронхит, панкреатит, гастрит, заболевание почек и др. Повышение уровня РЭА может наблюдаться также и у курильщиков. В этих случаях концентрация РЭА, как правило, не превышает 10 нг/мл. При злокачественных новообразованиях в легких, толстой кишке, бронхах и поджелудочной железе концентрация РЭА значительно превышает нормативные показатели, поскольку в опухолевых клетках происходит активация генов, кодирующих синтез РЭА (таблица 1).

Сейчас определено, что ген РЭА принадлежит к суперсемейству генов иммуноглобулинов. Это семейство кодирует белки межклеточной адгезии, и в том числе некоторые антигены из МНС (главного комплекса гистосовме-стимости). Поскольку изменение межклеточной адгезии напрямую связано с распространением рака и его метаста-зированием, вполне вероятно, что РЭА принимает участие в этих процессах.

Распределение значений РЭА у больных со злокачественными опухолями

Встречаемость, % от выборки

нг/мл нг/мл нг/мл

0-3,0 3,1-10 >10

Рак прямой кишки 28 20 52

Рак груди 50 27 23

Рак яичников 80 16 4

Рак легких 39 29 32

Определение концентрации РЭА не используется для выявления рака толстой кишки вследствие недостаточной чувствительности теста. Однако, уровень РЭА в крови отражает степень распространенности опухолевого процесса, его серийное определение в послеоперационном периоде хирургического лечения позволяет предположить рецидив заболевания при многократном повышении концентрации. В этом случае он может использоваться как самостоятельный маркер, так и в сочетании с определением других антигенов -СА-242, СА 19-9. Сочетанное определение онкомаркеров значительно повышает чувствительность и специфичность лабораторных тестов и помогает оценить стадию процесса у пациентов с установленным диагнозом. Также определение уровня РЭА используется в комплексе с другими маркерами для прогноза и мониторинга в послеоперационный период при раке желудка, молочной железы и шейки матки.

Недавно в ОАО «Витал Девелопмент Корпорэйшн» был разработан и внедрен в производство набор реагентов «РЭА-Имаксиз (IMAXYZ)», предназначенный для количественного определения раково-эмбрионального антигена в сыворотке крови человека. Для предотвращения перекрестной реактивности, связанной с наличием в сыворотке крови белков, перекрестно реагирующих с РЭА, в нем используются высокоспецифичные моноклональ-ные антитела к разным антигенным детерминантам. Проведенные исследования позволили подобрать условия изготовления всех важнейших компонентов набора, обеспечивающие его стабильность в течение 18 месяцев.

Целью настоящей работы было проведение предварительных сравнительных испытаний нового набора реагентов «РЭА-Имаксиз (IMAXYZ)» в сравнении с набором CanAg CEA EIA, производства Fujirebio Diagnostics Inc.

КОНСИЛИУМ. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА!

№ 8 (138) октябрь, 2015

РШШШМ Ц

привслжье

Витал Девелопмент Корпорэйшн

Комплексное оснащение лабораторий

Наборы реагентов для биохимических исследований

■ контрольные материалы • ферменты

■ специфические белки ■ субстраты • электролиты • липиды

/

V

УГГАНАУ 420 - автоматический анализатор для биохимических и иммунотурбидиметрических исследований

в комплекте с

Р1ЮОЕ1СЖ 10 - интеллектуальная система очистки воды

Разработаны специально для применения в лабораторной диагностике

Наборы реагентов для иммуноферментного анализа

тироидная панепь онкомаркеры репродуктивная панель

1МАХ¥2-4 -автоматический иммуноферментный анализатор открытого типа

■ автоматизированное выполнение всех этапов ИФА для 96-луноч]*ш микропланшетов

■ 4 независимых программируемых модуля для инкубации • встроенный компьютер с программным обеспечением

ОАО "Витал Девелопмент Корпорэйшн" 194156, Санкт-Петербург, пр. Энгельса, 27, кор. 38, лит. К тел./факс: +7 (812) 702-10-86, 326-61-98 e-mail: sale@vital-spb.ru, www.vital-spb.ru

В пшшиим

_привслжье

№ 8 (138) октябрь, 2015

КОНСИЛИУМ. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

В обеих тест-системах реализован «сэндвич» - вариант одностадийного твердофазного ИФА

Характеристики тест-систем:

♦ CanAg CEA EIA - диапазон измерения 0,25-75 мкг/л, аналитическая чувствительность - 0,25 мкг/л, дискриминационный уровень (ДУ) - 5 мкг/л;

♦ РЭА-Имаксиз (IMAXYZ) - диапазон измерения 0,25-100 нг/мл,

аналитическая чувствительность -0,25 нг/мл, ДУ - 5 нг/мл.

В работе использовались 37 образцов сыворотки крови, полученных из Клинического научно-практического центра современных видов медицинской помощи (онкологической) и НИИ Онкологии им. Н.Н. Петрова. Постановка проводилась параллельно в соответствии с инструкциями к наборам реагентов. Измерение результатов

Результаты статистической обработки данных

Результаты статистической обработки данных

CanAg CEA EIA

РЭА-IMAXYZ

Correlation - r

36

Minimum

0,451932607

0,500000000

0,989

Maximum

74,548660219

78,698867903

Weighted Deming Fit

Equation

Variance ratio

x/Y (a)

РЭА-IMAXYZ = 0,07018 + 1,057 CanAg CEA

EIA

1,000

Parameter

Intersept

Slope

Estimate

0,07018

Jakknife 95% CI

-0,02346 to 0,1638

0,9794 to 1,135

Jakknife SE

0,046079

0,038336

t statistics

1,52

1,5

p-value

0,1370'

0,1440'

H0: a = 0; p = 1

The intercept is equal to 0 and the slope is equal to 1. H1: a * 0; p * 1

The intercept is not equal to 0 and the slope is not equal to 1. 'Do not reject the null hypothesis at the 5% significance level.

проводилось спектрофотометрически после добавления стоп-реагента при длинах волн 405 нм (CanAg CEA EIA) и 450 нм (РЭА-Имаксиз (IMAXYZ)). РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Количественно результаты оценивались с помощью программы Analyse-it (Analyse-it Software, Ltd) (рис.).

При достаточно высокой сходимости результатов (R=0.989) и отсутствии статистически значимого смещения между сравниваемыми данными (p-value>0.05) встречаются образцы, концентрации которых, определенные наборами реагентов CanAg CEA EIA и РЭА-Имаксиз (IMAXYZ), отличаются. Связано это с тем, что РЭА, наряду с рядом других онкомаркеров, относится к антигенам сложного гетерогенного состава. Для количественного определения данных антигенов в наборах реагентов разных производителей используются моноклональные антитела, выявляющие различные антигенные детерминанты. Поэтому точное определение концентрации таких антигенов в индивидуальной сыворотке двумя методами могут различаться. Это обуславливает необходимость при обследовании пациентов в динамике применять одни и те же наборы реагентов. Применение же тестов разных производителей часто приводит к несопоставимым результатам или результатам, не отражающим истинную картину течения заболевания.

Результаты определения РЭА следует оценивать и интерпретировать только в совокупности с другими методами исследования и клиническими данными.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, предварительные исследования нового набора реагентов РЭА-Имаксиз (IMAXYZ) показали, что по чувствительности и специфичности он не уступает набору сравнения, а результаты определения РЭА в сыворотках крови, содержащих концентрации антигена по всему диапазону измерения, имеют хорошую сходимость. Набор РЭА-Имаксиз (IMAXYZ) разрешен Росздравнадзором к применению в учреждениях здравоохранения. ®

РИСУНОК

ТАБЛИЦА 2

N