CC BY
49
Дюков Л. А., Шульга И.А. НЕКОТОРЫЕ ЭФФЕКТЫ ПРОБИОТИКОТЕРАПИИ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ТОНЗИЛЛИТЕ
ФГУ МО РФ войсковая часть 52236 ГОУ ВПО ОрГМА Росздрава, Оренбург, Россия
Введение. Одним из направлений в комплексной терапии инфекционно-воспалительных заболеваний различной локализации, в том числе ЛОР-органов, в настоящее время является применение биологических бактерийных препаратов на основе микроорганизмов - представителей нормальной микрофлоры человека, так называемых пробиотиков.
Оно основано на способности пробиотиков положительно воздействовать на противоин-фекционные защитные механизмы организма, оказывать иммуномодулирующее действие, способствовать коррекции кишечной микрофлоры, улучшению барьерных функций, оказывать метаболические эффекты, влиять на изменение моторики и функции кишечника (Урсова
Н.И., 2004).
Особенно актуальна пробиотикотерапия при наличии дисбиоза кишечника, который во многих случаях является фоном для хронических воспалительных процессов различных органов и систем, а также источником эндогенного инфицирования и развития внекишечных форм инфекций и осложнений посредством транслокационного механизма (Барановский А.Ю., Кондрашина Э.А., 2002).
Цель исследования. Целью нашего исследования было изучить влияние пробиотиков на общий иммунный статус и микробиоценоз кишечника. а также на продолжительность периода ремиссии заболевания больных хроническим тонзиллитом (ХТ).
Материалы и методы. Исследование прово-дилосьу 20военнослужащих-мужчин в возрасте 18 - 25 лет, страдающих ХТ и не подвергающихся воздействию профессиональных иммуносу-прессивных факторов. Оценивались системный иммунный статус и состояние микробиоценоза кишечника до и после 3-х месячного курса приема поливитаминно-минерально-пробиотического комплекса, содержащего набор витаминов, минеральных веществ, микроэлементов и три
пробиотические культуры Lactobacillus gasseri, Bifidobacterium bifidum и Bifidobacterium long-um (BION®3), а также длительность периода от начала приема средства до развития обострения (рецидива) заболевания путем наблюдения в течение 12 месяцев. Группу контроля составили 20 больных ХТ из числа военнослужащих-мужчин с аналогичными возрастным интервалом и профессиональными условиями.
Микробиоценоз кишечника исследовался на базе бактериологической лаборатории Оренбургского военного госпиталя по методике Эп-штейн-Литвак Р.В. и Вильшанской Ф.Л. (1977).
Исследование показателей иммунного статуса проводилось в проблемной лаборатории по изучению механизмов естественного иммунитета ОрГМА по следующим методикам:
лейкоцитарная формула подсчитывалась при микроскопии мазка крови, окрашенного по Романовскому-Гимзе;
лимфоциты выделялись из гепаринизиро-ваной крови на градиенте плотности фикола («Phamaciafine chemicals», Швеция) - верогра-фина («Spofa»), d= 1,078 г/смЗ (Boyum A., 1968): полученная клеточная взвесь отмывалась забу-ференным физиологическим раствором, число выделенных лимфоцитов подсчитывалось в камере Горяева;
количественная оценка параметров клеточного звена иммунного статуса обследуемых проводилась путем иммунофенотипирования субпопуляций лимфоцитов (CD3+, CD4+, С08+, CD 19+) с применением соответствующих моноклональных антител отечественного производства («Сорбент», Москва);
для определения содержания сывороточных иммуноглобулинов классов А, М, G использовался метод радиальной иммунодиффузии (Ма-ncini G. et al., 1965);
содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови исследовалось в реакции преципитации с раствором полиэтилен! ликоля (Haskova et al., 1978);
фагоцитарный показатель (ФИ), фагоцитарный индекс (ФИ), метаболическая активность нейтрофилов (тест восстановления нитросинего тетразолия - HCT-тест) определялись в соответствии с методиками, изложенными в справочнике «Медицинские лабораторные технологии» под редакцией А.И. Карпищенко (2002).
Все полученные данные были обработаны статистически с применением общепринятых методов вариационной статистики (Г Г.
Автандилов, 1990).
Степень иммунологической недостаточности (СИН) у обследуемых оценивалась по А.М.
Земскову (1994).
Обсуждение результатов. У пациентов с хроническим тонзиллитом в обеих группах в общем иммунном статусе до лечения отмечались лейкопения (2 СИН), относительный лимфоци-тоз, снижение уровней абсолютного и относительного количества СОЗ-лимфоцитов (2 СИН), С08-лимфоцитов (1 СИН), показателей кисло-родзависимых механизмов фагоцитоза: НСТ-те-ста спонтанного (2 СИН), НСТ-теста стимулированного (3 СИН), уровень сегментоядерных нейтрофилов на нижней границе нормы с общим процентом показателей, отклоняющихся от нормы, равным 50,2 (2 СИН). Значения прочих показателей находились в границах нормы.
Изменения показателей < у больных ХТ до и после 3-х
После трехмесячного курса лечения комплексным средством ВЮЫ®3 у больных опытной группы (группа ВКЖ) все указанные показатели существенно изменились в сторону' нормализации, причем уровни относительного содержания С08-лимфоцитов, сегментоядерных нейтрофилов, НСТ-теста (спонтанного и стимулированного) вошли в границы нормы. Значения отклонения от параметров нормальной иммунограммы показателей содержания лейкоцитов, суммарных лимфоцитов, СОЗ-лимфоци-тов, НСТ-теста, общего процента показателей, отклоняющихся от нормы, уменьшились на 1 степень. В группе контроля заметных изменений в иммунограмме не произошло (таблица 1).
Таблица 1
истемного иммунитета месячного приема ВЮЫ®3
До лечения После лечения
i Группа BIÓN Показатель I M¡m(n 20) (степень | отклонения) Группа контроля М±т (п~ 20) (степень отклонения) I руппа В ION M±m tn 20) (степень отклонения) Группа контроля М±гп (11=20 ) (степень отклонения)
Лейкоциты I 3,65 ± 0,38 3,68±0,4 1 4,54 ± 0,22 3,69±0,4 1
109/л [ (2) (2) (О (2)
1 Лимфоциты °/о \ 53 ,Н ± 4,09 53.6±4,22 43,9 ±2,28 52,9±4Д V
(3) (3) (2) (3)
! CD3 % ! 37,75 ± 2,76 37,67±2,89 47,33 ± 1,81* 37,97±2,86
(2) (2) (1) (2)
10 /л 1 0,743 ±0,12 0,742±0,16 0,944 ± 0,08 0,742±0,16 I
(2) (2) (2) (2)
CD 4 % ! 28,4 у 2.05 28,8+2,17 29,6 * J.43 29, J-h 1,84
i О) <1) (1) (1)
CD 8 % \ 16,8 ±1,43 1 6,7± 1,38 20,3 ±1,71 17,1± 1,48
(1) (I) (1) (О
Нентрофилы с/я 4 1,0 i 3,8 4 1,6±4,2 49,75 ± 2,38 43,8±3,7
% 1 ( 1) (1) 0) (1)
I НСТ споит. °/о Í 3,8 ± 0,39 3,6±0,45 9,3 ± 1,27* 4,2±0,47
(2) (2) (1) (2)
НСТстим. % ¡ 11,6 ±2,24 1 1,2±2,17 26,1 ± 2,38« 11,8±2,32
.... ! (3) Ш S г i
Общий процент
показателей, j 50,2±2,95 50,3±2,88 41.4 ± 2,28* 50,4±2,98
отклоняющихся от 1 (2) (2) (0 (3)
нормы % | !
* Примечание: р< 0,05 по сравнению с группой контроля
Достоверность различия показателей оцени- Таким образом, действующие компоненты ВЮ-
валась по критерию Стьюдента.
Достоверно в группе ВЮК по сравнению с контрольной группой улучшились показатели относительного содержания СОЗ-лимфоцитов, НСТ-теста (как спонтанного, так и стимулированного), общего процента показателей, отклоняющихся от нормы (р < 0,05), в то время как изменения уровней лейкоцитов, относительного содержания суммарных лимфоцитов и С08-лимфоцитов, абсолютного количества СОЗ-лимфоцитов оказались недостоверны (р > 0,05).
N®3 достоверно положительно влияют на уровни СОЗ-лимфоцитов и кислородзависимые механизмы фагоцитоза, а также в целом улучшают иммунный статус больных ХТ.
Признаки дисбиоза кишечника были выявлены у 95% обследованных больных ХТ. Только по 1 пациенту из группы ВЮЫ и группы контроля имели показатели микробиоценоза кишечника на нижней границе нормы. Изменения микробиоценоза кишечника у обследованных касались бифидофлоры, лактобактерий, ки-
шечной палочки, грибов рода Candida и соответствовали дисбиозу I степени (Хавкин А.И., 2004). Снижение количества кишечной палочки с нормальными свойствами до 105 КОЕ/г отмечено у 85% больных, причем у 55% пациентов оно сочеталось с повышением процентного содержания кишечной палочки с гемолизирующи-ми свойствами (от 5 до 70% от общего количества E.coli), а в 10% случаев - с повышением содержания лактозонегативной E.coli. В 75% случаев количественные и качественные изменения кишечной палочки сопровождали снижение количества на 1-2 порядка бифидобактерий, в 15% - сочетались со снижением лактобацилл на 2 порядка. У 30% пациентов изменения количества бифидобактерий и кишечной палочки дополнялись повышением содержанием грибков рода Candida на 1 порядок. Еще у 10% пациентов наблюдалось изолированное увеличение количества грибов Candida.
В 100% случаев применение B10N®3 не
оказало никакого влияния на изменение (нормализацию) количества в кишечном содержимом нормальной кишечной палочки, а также кишечной палочки с гемолитическими или лактозонегативными свойствами у наблюдаемых пациентов, также как и на содержание грибов Candida.
У больных опытной группы, имевших кроме изменения количественного и/или качественного содержания E. coli и повышенного содержания Candida снижение содержания бифидо- и лактобактерий на 1 -2 порядка, применение ВЮ-N®3 способствовало восстановлению нормального количества бифидобактерий (р < 0,05 по сравнению с группой контроля) и лактофлоры (р < 0,001).
Таким образом, несмотря на восстановление нормального количества бифидобактерий и лактобактерий, у обследованных пациентов сохранились явления дисбиоза кишечника за счет изменений содержания других представителей кишечного микробиоценоза (таблица 2).
Таблица 2
Состояние микробиоценоза кишечника у больных XT
Показатель ! (норма) До лечения После лечения
Г руина Bl ON Mrfcm (п=20) Группа контроля M±m (n=20) Группа В ION Mim (n=20) Группа контроля M±m (n=20)
Бифидобактерии КОЕ/г, log (9-10) 7,65 i-0,19 7,55i0,19 9,25i 0.12* 7.65 t 0.19
J laicro бактер и и КОЕ/г. log (7-8) 7,05=0,12 7, і =0,12 7.S±0,06* 7,! ±0,1 2
Кишечная палочка с норм, свойствами КОЕ/г, log (7-8) 5,6±0,19 5,7.tO, 19 5,5*0,19 5,6i0,19
Кишечная палочка лактозонегативная КОЕ/г, log (0-4) о о er*. 4,1 1:0,06 4,1 -L0,06 4,1*0,06
Кишечная палочка ! е м о л и з 11 р у ю I пая х ! 0 КОЕ/г (0) 0.1 2=0.04 0,12±0,04 0,1 3+0,03 0,13+0,03
Грибы рода Candida КОЕ/г, log (0-3) 3,4-ü0,06 3,3=0,06 3,3dh0,06 3,2±0,06
* Примечание: р< 0,05 по сравнению с группой контроля
До приема комплексного средства у наблюдаемых пациентов длительность ремиссии заболевания составляла в среднем 3,5 ± 0,24 месяца. После трехмесячного приема препарата за весь период наблюдения ни у одного из пациентов группы В1(Ж развития метатонзиллярного процесса не отмечалось, минимальный срок до развития обострения заболевания составил 7 месяцев. Средняя длительность ремиссии составила 10,2 ±0,19 месяцев. В контрольной группе этот
показатель составил 4,9 ±0,12 месяцев (р <
0,05).
Выводы. Применение пробиотиков на основе бифидо- и лактобактерий при ХТ: 1) улучшает общий иммунный статус больных, способствует нормализации содержания Т-лимфоцитов, сегментоядерных нейтрофилов и кислородзави-симых механизмов фагоцитоза; 2) увеличивает длительность периода ремиссии заболевания; 3) нормализует количество бифидобактерий и лак-
тобактерий в кишечном микробиоценозе. Дл* полного устранения кишечного дисбиозау больных XT необходимо применение дополнительно пробиотических культур с антагонистическими свойствами в отношении лактозонегативной и гемолизирующей кишечной палочки и грибков рода Candida, а также стимулирующих рост кишечной палочки с нормальными свойствами.
Литература
1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфоме-трия / Г.Г. Автандилов. - М.: Медицина, 1990. -384 с.
2. Барановский А.И. Дисбактериоз и дис-
биоз кишечника/ АЛО. Барановский,
Э.А. Кондрашина. - СПб.: Питер, 2002. - 224 с.
3. Земсков А.М. Дополнительные методы оценки иммунного статуса / А.М. Земсков, В.М. Земсков //Клиническая лабораторная диагностика. - 1 994. - № 3. - С. 34-35.
4. Медицинские лабораторные технологии. Справочник / Под редакцией проф. А. И. Карпищенко. - СПб.: Интермедика, 2002. - 600 с.
5. Урсова Н.И. Дисбактериозы кишечника
у детей / Н.И. Урсова. - М.: Компания Бор-
гез, 2006. - 239 с.
6. Хавкин А.И. Нарушения микроэкологии кишечника. Принципы коррекции / А.И. Хавкин. - М., 2004. - 40 с.
7. Эпштейн-Литвак Р.В. Бактериологическая диагностика дисбактериоза кишечника / Р.В. Эпштейн-Литвак, Ф.Л. Вильшанская. - М.: Медицина, 1977. - 173 с.
8. Boyum A. Isolation of leucocytes from human blood. A two-phase system for removal of red cells with methylcellulose as erythrocyte-aggregating agent / A. Boyum // Scand J Clin Lab Invest Suppl. - 1968. - Vol.97. - P. 9-29.
9. Haskova V. Simple method of circulation immune complex. Detection in human sera by polyethylene glucol precipitation / V. Haskova, V. Ka-slik, I. Riha et al. // J. Immun. - Forsch. - 1978. -Vol. 154.-P. 399-401.
10. Mancini G. Immunochemical quantitation of antigens by singal radial immunodiffusion / G. Mancini, A.O. Garborana, G.F. Heremans // Inf. Immunochem. - 1965. - Vol. 2. - P. 235-254.
