CC BY
105
микробиология
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2013
УДК 616.34-008.87-092:612.017.1]-053.2-078.33
В. м. Чеpвинец, Ю. В. Чеpвинец, Е. С. михайлова, А. м. Самоукина, Е. А. Беляева, А. Ю. м^онов1
ми^обиоценоз кишечника и иммунный статус у детей младшего школьного
ВОЗPАСТА
Кафедpа микpобиологии и виpусологии ГБОУ ВПО Твеpская госмедакадемия Mинздpавсоцpазвития Pоссии; 1ГБОУ ВПО Пеpвый московский roсудаpственный медицинский унивеpситет им. И. м. Сеченова минздравсоцразвития России
Изучены видовой и количественный состав микробиоценоза кишечника и особенности иммунного статуса у детей 8-10 лет. У детей с наличием в анамнезе хронических тонзиллита, фарингита и бронхита и с заболеваниями желудочно-кишечного тракта (ЖКТ); билиарная дисфункция, хронических гастродуоденита и гастрита) выявлен микробный дисбаланс различной степени выраженности, преобладающий при патологии ЖКТ. Увеличение количества условно-патогенной микрофлоры индуцирует выработку как иммуноглобулинов, так и цитотоксических лимфоцитов и натуральных киллеров.
Ключевые слова: микробиоценоз кишечника, иммунный статус, дети младшего школьного возраста
V.M. Tchervinets, Yu.V. Tchervinets, Ye.S. Mikhaiylova, A.M. Samoukina, Ye.A. Beliayeva, A.Yu. Mironov THE MICROBIOCENOSIS OF INTESTINE AND IMMUNE STATUS OF CHILDREN OF PRIMARY SCHOOL
AGE
The article deals with the study of species and quantitative structure of microbiocenosis of intestine and characteristics of immune status in children aged 8-10 years. In children with chronic tonsillitis, pharyngitis and bronchitis and with diseases of gastro-intestinal tract (biliary dysfunction, chronic gastroduodenitis and gastritis) the microbe imbalance of various degree of manifestation was established which was prevailing in cases of children with pathology ofgastrointestinal tract. The increase of quantity of opportunistic microflora induces the production of both immunoglobulins and cytotoxic lymphocytes and cells-natural killers.
Key words: microbiocenosis, intestine, immune status, children, primary school age
Микрофлора желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) находится в постоянном динамическом равновесии с разнообразными факторами внешней среды, собственного организма и естественной резистентности. Это равновесие обусловлено очень тонко сбалансированным взаимодействием между клетками пищеварительной системы, микрофлоры и иммунной системой [1, 2, 7-9]. Благодаря кооперации между микроорганизмами, существующими в составе биопленочных сообществ, которые населяют организм, микроэкологическая система человека выступает как единое целое, согласованно работающее на ту систему, в которой она локализована [11-13]. У детей эти взаимодействия носят лабильный характер и зависят от анатомо-физиологических особенностей ЖКТ, возраста, характера питания и образа жизни [3, 5, 6]. В современных условиях, на фоне ухудшения экологической обстановки, вопросы формирования, сохранения и восстановления нормального микробиоценоза кишечника детей, особенно страдающих заболеваниями желудочно-кишечного тракта, приобретают особую актуальность [4, 10, 14, 15].
В связи с этим целью настоящего исследования явилось изучение видового и количественного состава микробиоценоза кишечника и особенностей иммунного статуса у детей 8-10 лет.
Для корреспонденции:
Червинец Вячеслав Михайлович, д-р мед. наук, проф., зав. каф.
микробиологии и вирусологии
Адрес: 170100, Тверь, ул. Советская д.4
Телефон: (4822) 34-55-98
E-mail: chervinets@mail.ru
Материалы и методы. Обследованы 50 детей (24 девочки и 26 мальчиков) в возрасте от 8 до 10 лет. По состоянию здоровья детей разделили на три группы. В 1-ю группу вошли 25 детей без заболеваний ЖКТ, но с наличием в анамнезе хронических тонзиллита, фарингита и бронхита, во 2-ю - 15 с заболеваниями ЖКТ (билиарная дисфункция, хронический гастродуоденит и гастрит), в контрольную - 10 практически здоровых.
Видовой и количественный состав просветной микрофлоры изучали с использованием классических бактериологических методов. Степень дисбиотических нарушений микробиоты толстой кишки определяли согласно отраслевому стандарту "Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника" [8]. Выделенные микроорганизмы идентифицировали по морфологическим, тинкториальным, культуральным и биохимическим свойствам с использованием API-систем "bio Мегеих" (Франция). Количество бактерий определяли путем подсчета колониеобразующих единиц на 1 г фекалий (в lg КОЕ/г).
Для оценки состояния иммунного статуса определяли содержание лимфоцитарных клеток с поверхностными маркерами CD3+, CD4+, CD8+, CD16+ и CD20+, используя проточную цитофлюометрию. Уровень сывороточных IgA, IgM, IgG определяли методом иммуноферментно-го анализа (ИФА) ("Вектор-Бест", Россия). Для статистической обработки полученных данных использовали параметрические и непараметрические критерии оценки. Все расчеты осуществляли на персональном компьютере с применением стандартного пакета программ Excel.
Результаты и обсуждение. При бактериологическом исследовании кала в контрольной группе (см. таблицу) нормальный биоценоз выявили у 80% детей, I—II степень
клиническая лабораторная диагностика, № 1, 2013
микробиология
дисбиотических изменений, характеризующуюся снижением содержания лактобацилл и бифидобактерий, - у 20%, представителей патогенной и условно-патогенной микрофлоры (УПМ) не обнаружили.
В 1-й группе нарушения, соответствующие I степени дисбиотических расстройств, обнаружили у 40% детей, дис-биоз II степени - у 20%, III степени - у 8%, что составило в общем 68% (см. таблицу). Дисбиотические изменения характеризовались снижением количества Bifidobacterium spp. ниже 8 lg КОЕ/г у 15 (60%) детей, Lactobacillus spp. ниже 6 lg КОЕ/г у 12 (48%). При изучении анаэробной составляющей просветной микрофлоры толстой кишки у 11 (44%) детей отметили пониженное содержание бактерий родов Bacteroides spp., Peptococcus spp. и Peptostreptococcus spp. Кроме того, у 8 (32%) детей выявили достоверное повышение содержания Enterococcus spp. по сравнению с таковым в контрольной группе. Снижение общего количества E. coli с нормальными ферментативными свойствами наблюдали у 9 (36%) детей. E. coli с измененными ферментативными свойствами обнаружили в повышенном количестве: лактозонега-тивные E. coli - у 5 (20%), E. coli, обладающие гемолитическими свойствами, - у 7 (28%).
У 14 детей (56%) 1-й группы выявили УПМ. S. aureus в количестве 6 lg КОЕ/г обнаружили у 7 (28 %) детей. У 9 детей (36%) отметили другие представителей рода Staphylococcus spp. в количестве 7 lg КОЕ/г, при этом 96% выделенных стафилококков обладали гемолитической активностью. Значительно реже у 8-12 % детей выделяли Enterobacter spp., Proteus spp., Klebsiella spp. Citrobacter spp. в количестве, превышающем норму. У 2 (8%) детей данной группы с дисбактериозом I-II степени обнаружили бактерии рода Shigella spp.
Во 2-й группе нарушения, соответствующие I степени дис-биоза, выявили у 26,6% детей, дисбиоз II степени - у 46,6%, III степени - у 20%, что составило в общем 93,4% (см. таблицу). Среднее количество бифидобактерий составило 6,94 ± 1,11 lg КОЕ/г. Содержание лактобацилл по сравнению с таковым в контрольной группе имело достоверные различия - 6,32 ± 0,88 и 7,47 ± 0,78 lg КОЕ/г соответственно. Уровень бактероидов составил 7,73 ± 0,74 lg КОЕ/г Наряду с повышением частоты встречаемости значительно возрастала плотность колонизации кишечника детей микроорганизмами, имеющими гемолитическую активность 3,79 ± 1,42 lg КОЕ/г У лиц контрольной группы гемолитических бактерий не обнаружили. Значительно повышалось содержание стафилококков (5,64±0,93 lg КОЕ/г) по сравнению с таковым в контрольной группе (2,75 ±0,38 lg КОЕ/г). Количество кишечной палочки у больных составило 7,07 ± 2,67 lg КОЕ/г, а лактозонегативной кишечной палочки - 4,86 ± 0,89 lg КОЕ/г. От 4 (26,6%) детей выделены дрожжевые грибы рода Candida spp. в количестве 3,76 ± 0,78 lg КОЕ/г. Патогенная микрофлора при дисбактериозе III степени представлена шигеллами (Shigella flexneri) у 2 (13,3%), Salmonella typhimurium - у 1 (6.6%).
При оценке иммунного статуса определяли концентрацию лимфоцитов, несущих на своей поверхности кластеры дифференциации CD3+ (Т-лимфоциты), CD4+ (Т-хелперы), CD8+ (цитотоксические Т-киллеры), CD16+ (натуральные киллеры, NK-клетки), CD20+ (В-лимфоциты). У детей 1-й группы отметили умеренные сдвиги параметров по сравнению с таковыми в контроле: в 1,2 раза повышалось относительное количество CD3+ , в 1,3 раза - CD4+-клеток, в 1,1 раза - CD8+-лимфоцитов, при этом соотношение CD4+/CD8+ увеличивалось в 1,4 раза. Среднее количество CD20+ у детей 1-й группы достоверно не отличалось от средневозрастных показателей у здоровых детей.
У детей 2-й группы отметили более выраженные изменения показателей иммунного статуса. Относительное содержание CD3+ у детей 2-й группы в среднем превышало аналогичный показатель в контроле и 1-й группе (p < 0,05). Средний уровень CD4+ у детей 2-й группы, напротив, оказал-
Частота встречаемости дисбактериоза кишечника у детей
Биоценоз кишечника Контроль(n = 10) 1-я группа (n = 25) 2-я группа (n = 15)
Нормальный биоценоз 8 (80) 8 (32)* 1 (6,6)
I степень дисбиоза 1 (10) 10 (40)* 4(26,7)*
II степень дисбиоза 1 (10) 5 (20) 7(46,7)*/**
III степень дисбиоза 0 2 (8) 3 (20)
Примечание. * - достоверность различий с показателями в контрольной группе (p < 0,05), ** - с показателями в 1-й группе. В скобках указаны проценты.
ся достоверно ниже, чем у детей в контрольной и 1-й группах (p < 0,05). Среднее относительное содержание CD8+ у детей обеих групп оказалось повышенным, причем в 1-й группе оно достоверно не отличалось от возрастных нормативов, а во 2-й группе достоверно превышало таковые значения в контроле (p < 0,05). Среднее количество CD20+ во 2-й группе оказалось достоверно более высоким по сравнению с аналогичным показателем в контрольной и 1-й группах (p < 0,05). Среднее содержание CD16+ у детей обеих групп было достоверно выше средневозрастной нормы (p < 0,01 иp < 0,02 соответственно). При сравнении среднего количества CD16+ у детей 1-й и 2-й групп различия оказались недостоверными. Содержание IgM, IgG, IgA в сыворотке крови у детей 1-й и 2-й групп было достоверно выше, чем в контроле (p < 0,05 и p < 0,01 соответственно).
Таким образом, у детей 1-й и 2-й групп выявили значительные изменения микробиоценоза, а именно - снижение доминирующего количества бифидо- и лактобактерий и повышение содержания представителей УПМ. Результаты количественного анализа кишечной микрофлоры у детей 2-й группы свидетельствуют о более выраженном снижении содержания кишечной палочки, бифидобактерий, лактобактерий и пролиферации энтерококков по сравнению с таковым в 1-й группе. Другие представители микробиоценоза (гемолитические и лактозонегативные штаммы кишечной палочки, протей, клебсиеллы) хотя и имели тенденцию к повышению частоты встречаемости, их различие с показателями в контрольной и 1-й группах было статистически недостоверным. При сравнении показателей микробиоценоза у детей 1-й и 2-й групп и у детей в контроле отметили более выраженные сдвиги в сторону наибольшего неблагополучия во 2-й группе. У этих больных достоверно чаще выявили дефицит бифидо- и лактофлоры, в 3,5 раза чаще выделяли гемолитические штаммы кишечной палочки; в 3 раза чаще высевались лактозонегативные Е. coli, в 5,5 раза чаще обнаруживали гемолитические стафилококки. У всех детей 2-й группы в микробиоценозе присутствовали многокомпонентные микробные ассоциации, в то время как у пациентов 1-й группы в 2 раза реже встречали ассоциативный рост бактерий. Доминирование УПМ может повышать риск развития гнойно-воспалительных процессов в условиях снижения антибактериальной защиты.
При оценке иммунного статуса отличиями между сравниваемыми группами стали достоверные изменения, которые в целом можно характеризовать как функциональную активацию гуморального звена иммунной системы с преобладанием накопления в крови IgG, IgA, IgM, поддерживаемого ростом количества NK-клеток. Однако если сопоставить полученные значения в 1-й и 2-й группах со средними значениями нормы, то можно заметить однонаправленность данных сдвигов. Этот факт указывает на общность иммунных изменений в обеих группах, отличающихся прежде всего их выраженностью. Вероятно, выявляемые отличительные признаки между группами являются разными этапами однонаправленного процесса становления эффективной специфической защиты.
Заключение. В сравнительном аспекте изучено состояние микрофлоры кишечника и иммунного статуса у детей 8-10 лет. Показано, что дисбиотические изменения выявляют у 94% детей с хроническими заболеваниями ЖКТ и 68% с хроническими заболеваниями других органов. При этом независимо от нозологической формы хронической патологии практически у всех детей наблюдается микробный дисбаланс, однако степень выраженности дисбиотических изменений преобладает при патологии ЖКТ. Развитие у детей различных форм дисбактериоза кишечника сопровождается выраженной степенью нарушений в клеточном и гуморальном звеньях иммунитета. Увеличение количества УПМ индуцирует выработку как иммуноглобулинов, так и цитотоксических лимфоцитов и ПК-клеток. Выявленная направленность иммунных сдвигов и их выраженность указывают на важную патогенетическую роль иммунных механизмов в развитии и прогрессировании у этих детей хронической патологии. Расшифровка иммунных нарушений и дисбиотических сдвигов позволяет подобрать адекватную терапию и тем самым добиться коррекции данных расстройств.
ЛИТЕРАТУРА.
1. Бельмер С. В., Хавкин А. И. // Лекции по педиатрии. Гастроэнтерология. - М., 2003. - Т. 3. - С. 101-111.
2. Бондаренко В. М., Мацулевич Т. В. Дисбактериоз кишечника как клинико-лабораторный синдром: современное состояние проблемы. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. - С. 8-35.
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2013 УДК 618.15/.16-008.87-078
Л.Д. Андосова, К.Н. Конторщикова, О.В. Качалина, А.В. Белов, Е.С. Гонова, С.Ю. Куделькина
характеристика биоценозов урогенитального тракта у женщин репродуктивного возраста
ГБОУ ВПО Нижегородская государственная медицинская академия минздравсоцразвития России, медицинсий центр "Тонус1, Нижний Новгород
Цель исследования - изучить характеристики биоценозов урогенитального тракта (УГТ) у женщин репродуктивного возраста с применением теста "Фемофлор".
Соскобы с заднебоковой стенки влагалища исследовали методом полимеразно-цепнойреакции в реальном времени с использованием реагентов "Фемофлор" (ООО "НПО ДНК-Технология, Россия). Комплексная оценкаурогенитальной биоты позволила выделить три основных типа биоценоза влагалища: I тип - нормоценоз (n = 50 или 11,5%); II тип - умеренный дисбиоз (n = 88, или 20,1%); III тип - выраженный дисбиоз (n = 133, или 30,6%). В структуре нарушений биоценозов УГТ основную роль играют анаэробные микроорганизмы при участии кандид, уреаплазм и микоплазм.
Ключевые слова: биоценоз, нормоценоз, тест "Фемофлор"
L.D. Andosova, K.N. Kontorschikova, O.V. Katchalina, A.V. Belov, Ye.S. Gonova, S.Yu. Kudelkina THE CHARACTERISTIC OF BIOCENOSIS OF UROGENITAL TRACT IN WOMEN The article deals with the study of characteristics of biocenosis of urogenital tract in women of reproductive age with using of "Femoflor" test. The scrapings of posterolateral wall of vagina were analyzed using the technique of real-time polymerase chain reaction using the reagents "Femoflor". The complex evaluation of urogenital biota identified three main types of biocenosis ofvagina: type I - normocenosis (n=50 or 11.5%); type II - mild dysbiosis (n=88 or 21%); type III - marked dysbiosis (n=133 or 30.6%). In the .structure of alterations of biocenosis of urogenital tract the main role play the anaerobic bacteria with involvement of candida, ureoplasma and mycoplasma.
Key words: biocenosis, normocenosis, "Femoflor"test
В настоящее время инфекционно-воспалительные заболевания урогенитального тракта (УГТ) занимают важное место в акушерско-гинекологической, дерматовенерологической и урологической практике. Одной из ведущих причин такого рода нарушений является дисбаланс нормальной и условно-патогенной микробиоты [4,6]. Дисбиотические
3. Дяковецкая Н. К., Лапшина Г. Н., Шулаева М. П., Федоpов Р. В. Особенности микробиоценоза кишечника у детей. — Казань,
2005.
4. КоневЮ. В. // Справочник поликлинического врача. - 2007. - № 7. — С. 34—38.
5. Коpниенко Е. А. Актуальные вопросы коррекции кишечной микрофлоры у детей. — М., 2006.
6. Малов В. А., Гюлазян Н. М. // Лечащий врач. — 2007. — № 6. — С. 10—14.
7. Мщонов А. Ю., Хаpсеева Г. Г., Клюкина Т. В. Основы клинической микробиологии и иммунологии: Учебное пособие / Под ред. А. Ю. Миронова. — Ростов-н/Д.: ГОУ ВПО РостГМУ 2011.
8. Отраслевой стандарт "Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника" (ОСТ 91500.11.0004-2003, утвержден Приказом Министерства здравоохранения РФ № 231 от 09.06.2003).
9. Урсова Н. И. // Практика педиатра. — 2006. — №3. — C. 30—37.
10. Хавкин А. И. Микрофлора пищеварительного тракта. — М.: Фонд социальной педиатрии, 2006.
11. Чеpвинец Ю. В., Чеpвинец В. М., Бондаренко В. М. и др. // Журн. микробиол. — 2010. — № 6. — С. 80—83.
12. Чеpвинец Ю. В., Чеpвинец В. М., Миронов А. Ю. и др. // Клин. лаб. диагн. — 2011. — № 2. — С. 44—46.
13. ШендеpовБ. А. // Пробиотики и функциональное питание. — М.: Грант, 2001. — Т. 3.
14. Щеpбаков П. Л. // Фарматека. — 2007. — № 14. — С. 28—34.
15. Rambaud J. C. et al. Gut microflora. — Paris: John Libbey Eurotext,
2006.
Поступила 17.01.12
Для корреспонденции:
Андосова Лариса Дмитриевна, канд. мед. наук, ассистент каф. клин. лаб. диагностики
Адрес: 630087, Нижний Новгород, пл. Минина, 10/1 Телефон: (831) 438-33-94 E-mail: lагisa-andosova@yandex.гu
