CC BY
38
Обоснование применения препарата лактин для коррекции морфогенеза рубцов кожи и его характеристик // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2014. - №4. - С.44-48.
6. Кузин М.И., Костючено Б.М. Раны и раневая инфекция. - М.: Медицина, 1981. - 688 с.
7. Лебединский В.Ю., Буланкина И.А. Морфология и биомеханика очага воспаления различного генеза. - Иркутск: Мегапринт, 2008. - 237 с.
8. Мишарев О.С., Абаев Ю.К., Прокопчук Н.Р. Изучение
биомеханики заживления инфицированной раны в эксперименте // Клиническая хирургия. - 1985. - №1. - С.48-49.
9. Озерская О.С. Рубцы кожи и их дерматокосметологиче-ская коррекция. - СПб.: Искусство России, 2007. - 224 с.
10. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ 8ТЛТКТ1СЛ. - М.: Медиа-сфера, 2002. - 312 с.
11. Чернух А.М. Воспаление: очерки патологии и экспериментальной терапии. - М.: Медицина, 1979. - 446 с.
REFERENCES
1. Vasiltsov M.K. The method of semi-quantitative determination of collagen in histological preparations // Proceedings of the conference. - Irkutsk, 1971. - P.69-70. (in Russian)
2. Vasiltsov M.K., Izatulin V.G., Lebedinsky V.Y., et al. Inflammation of the skin (score, prediction of outcomes) // Morfologia. - 1996. - Vol. 109. №2. - P.40. (in Russian)
3. Zorina A.I., Zorin V.L., Cherkasov V.R. Dermal fibroblasts: a variety of phenotypes, physiological functions, possible therapeutic use // Kosmetika I meditsina. - 2011. - №2. - P.12-24. (in Russian)
4. Izatulin V.G. Wound healing in experimental exogenous hyperprolactinemia // Bulleten Vostochno-Sibirskogo Nauchnogo Tsentra SO RAMN. - 1999. - №3. - P.51-54. (in Russian)
5. Kensovskaya I.M., Isatulin V.G., Lebedinskii V.U. The basis for use of lactin to correct morphogenesis of skin scars and its characteristics // Sibirskij Medicinskij Zurnal (Irkutsk). - 2014. -№4. - P.44-48. (in Russian)
6. Kuzin M.I., Kostyucheno B.M. Wounds and wound infection. - Moscow: Meditsina, 1981. - 688 p. (in Russian)
7. Lebedinsky V.Y., Bulankina I.A. Morphology and biomechanics of the source of inflammation of various origins. -Irkutsk, 2008. - 237 p. (in Russian)
8. Misharev O.S., Abaev J.K., Prokopchuk N.R. The study of biomechanics of healing infected wounds in the experiment // Klinicheskaia khirurgia. - 1985. - №1. - P.48-49. (in Russian)
9. Ozerskaya O.S. Scarring of the skin and dermatology correction. - St. Petersburg: Isskustvo Rossii, 2007. - 224 p. (in Russian)
10. Rebrova O.Yu. Statistical analysis of medical data. Application software package STATISTICA. - Moscow: Media sphera, 2002. - 312 p. (in Russian)
11. Chernukh A.M. Inflammation: Essays Pathology and Experimental Therapeutics. - Moscow: Medicine, 1979. - 446 p. (in Russian)
Информация об авторах:
Кенсовская Инна Михайловна - аспирант кафедры гистологии, цитологии, эмбриологии; Изатулин Владимир Григорьевич -профессор кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии, д.м.н., 664003, г. Иркутск, ул. Красного Восстания, 1, e-mail: [email protected]; Лебединский Владислав Юрьевич - д.м.н., профессор, научный руководитель центров медико-биологических проблем и здоровьесберегающих технологий.
Information About the Authors:
Kensovskaya Inna - aspirant of Histolodgy, Citolodgy and Embryolodgy; Izatulin Vladimir G. - Department of Histolodgy, Citology and Embryology, PhD, MD, Professor, 664003 Russia, Irkutsk, Krasnogo Vosstania st.,1, e-mail: iza.vladimir @rambler.ru; Lebedinsky Vladislav Y. - MD, PhD, professor, research of the Center for Biomedical Problems and health-technology.
© КОЛЕСНИКОВ С.И., МАКАРОВА Н.Г. - 2014 УДК: 591.149
НАРУШЕНИЯ ТИРЕОИДНОГО СТАТУСА, ПРОЦЕССОВ ЛИПОПЕРОКСИДАЦИИ И СТРУКТУРЫ ГЕПАТОЦИТОВ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ГИПОТИРЕОЗЕ
Сергей Иванович Колесников1, Надежда Георгиевна Макарова2 (1Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека, директор - д.м.н., проф., акад. РАН Л.И. Колесникова; 2Иркутский государственный медицинский университет, ректор - д.м.н., проф. И.В.Малов, кафедра гистологии, эмбриологии, цитологии, зав. - д.б.н., проф. Л.С. Васильева)
Резюме. В работе с использованием 42 экспериментальных животных установлено, что под влиянием мерказо-лила формируется стойкое (не менее 28 дней) гипотиреоидное состояние, которое сопровождается увеличением массы тела и печени, снижением продукции тиреоидных гормонов, активацией процессов липопероксидации, а также изменением структуры гепатоцитов. Печень, сохраняя увеличенную массу (за счет тканевых отеков), активно восстанавливается, несмотря на продолжающийся некроз клеток, который является следствием токсического действия мерказолила и торможения метаболических процессов.
Ключевые слова: печень, экспериментальный гипотиреоз, липопероксидация, мерказолил.
DISTURBANCES OF THYROID STATUS, PROCESSES PAUL AND THE CELLULAR COMPOSITION OF THE LIVER
WITH THE EXPERIMENTAL HYPOTHYREOSIS
S.I. Kolesnikov1, N.G. Makarova2 ^Research Center of Family Health Problems And Human Reproduction, Irkutsk;
2Irkutsk State Medical University, Russia)
Summary. In this paper, using 42 experimental animals revealed that under the influence of thiamazole formed resistant (not less than 28 days) hypothyroid state, which is accompanied by an increase in body weight and liver, decreased production of thyroid hormones, activation of lipid peroxidation, as well as changes in the structure of hepatocytes. Liver increased while maintaining the mass (by tissue edema) recovering active, in spite of continued cell death that is a consequence of toxic effects and deceleration thiamazole metabolic processes.
Key words: hepatocytes, hypothyreosis, lipoperoxidation, thiamazole.
Гипотиреоидное состояние, по современным представлениям [2], приводит к дефициту энергии и поражению практически всех органов и систем, в том числе, к нарушению структуры и функции печени. Учитывая широкую распространенность гипотиреоза [2] и важную роль печени в формировании метаболического статуса организма, в том числе, и при развитии адаптационных реакций, становится актуальным исследование функциональных возможностей и структуры печени при гипотиреоидном состоянии организма в условиях развития экспериментального гипотиреоза.
Цель исследования: выявить изменения, происходящие в печени при экспериментальном гипотиреозе.
Материалы и методы
Опыты проведены на 42 беспородных крысах-самцах массой 180-200 г в осенне-зимний период. Одна группа животных оставалась контрольной, а остальным животным в течение 8 недель моделировали гипотиреоз (ГТ) [6] введением перорально (с кормом) мерказолила (тиамазола) в дозе 10 мг/кг ежедневно. Материал для исследования брали после окончания моделирования гипотиреоза на 2, 7 и 28 сутки. Определяли процессы перекисного окисления липидов, концентрацию Т3 и Т4 в крови и массу печени. Структуру печени изучали на гистологических срезах, окрашенных гематоксилин-эозином. Описание и морфоме-трию срезов (табл. 1) [1] проводили на микроскопе Olympus с помощью программного обеспечения анализа изображения Imaqe Scope Color. Полученные цифровые показатели в % пересчитывали на абсолютную массу в граммах.
Исследования выполнялись с учётом этических требований к биомедицинским работам и Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации (1964 года). Лабораторные животные содержались в соответствии с Приказом Минздравсоцразвития России от 23.08.2010 г. №708н «Об утверждении правил лабораторной практики», практическими рекомендациями «Этическая экспертиза биомедицинских исследований», с соблюдением правил гуманного обращения с животными.
Результаты исследования обработаны статистически (Statistica v. 6). Определяли тип распределения и оценивали выявленные различия с помощью t-критерия Стьюдента (данные считались статистически значимыми при p < 0,05) и F-критерия Фишера (при уровне доверительной вероятности p=0,001-0,05) [3].
Результаты и обсуждение
К концу 8 недели моделирования гипотиреоза концентрация в плазме крови Т3 уменьшалась в 5 раз, а свободного Т4 - в 6,5 раза. После отмены мерказолила концентрация4 Т3 до конца наблюдений оставалась ниже нормы в 2,5 раза, а уровень свободного Т4 - ниже нормального значения в 7 раз (рис. 1). 4
Таким образом, функциональная активность щитовидной железы не восстанавливалась после отмены мерказолила в течение месяца.
Через 8 недель после начала эксперимента у животных, получавших мерказолил, масса тела увеличилась в 1,3 раза (рис. 2). После его отмены она возрастала в течение 4-х недель и к концу наблюдений превышала массу тела интактных животных в полтора раза. Увеличивалась и масса печени (к концу наблюдений) в 1,8 раза, по сравнению с интактными животными (рис.
Рис. 1. Динамика содержания тиреоидных гормонов при экспериментальном гипотиреозе. (Ось ординат слева - Т3, справа - Т4).
2). По данным литературы [2,4], это связано с развитием тканевых отеков.
Рис. 2. Изменение массы тела и печени животных с экспериментальным гипотиреозом.
Через 7 суток у подопытных животных масса печени не уменьшается, а к 28 суткам после отмены мерказолила даже проявляется тенденция к еще большему увеличению ее массы до 2,5 раз (рис. 2) и объемной доли вну-тридолькового сосудистого русла. С начала наблюдения нарастала масса микроочагов некроза.
Процессы перекисного окисления липидов в течение всего наблюдения активизировались (рис. 3). После 8 недель введения мерказолила концентрация ДК увеличилась в крови в 2,1 раза, а в печени не изменялась.
Рис. 3. Содержание ДК и МДА при экспериментальном гипотиреозе.
Концентрация МДА не изменялась ни в крови, ни в печени. После отмены мерказолила уровень ДК в крови оставался на прежнем высоком уровне, а в печени
повышался через 7 суток в 3 раза, через 4 недели - в 4,3. Концентрация МДА, при этом в крови и в печени, оставалась в пределах нормы.
Таким образом, суммарное количество продуктов ПОЛ в крови и печени возрастает, преимущественно за счет накопления ДК.
После отмены мерказолила структура печени продолжает изменяться. На вторые сутки, при увеличении общей массы печени в 1,4 раза, объемная доля паренхимы существенно уменьшается, как и ее масса. В паренхиме печени у подопытных животных развивается мелкоочаговый некроз, общая масса которого составляет 0,85±0,05 г (у интактных крыс - 0,077±0,02; р<0,05). Некротическое поражение паренхимы печени сопровождается увеличением в 6,6 раза массы активированных клеток Купфера с высокой активностью кислой фосфа-тазы, что говорит об усилении фагоцитарной функции системы печеночных макрофагов. Кроме того, в печени в 1,5 раза увеличивается масса внутридольковых сину-соидных капилляров (до 2,5±0,3 г), у интактных крыс (0,8±0,02; р<0,05). При этом 88% синусоидов были свободны от крови, что говорит об увеличении скорости внутридолькового кровотока. На 7 сутки после отмены мерказолила в печени продолжается некротизация гепа-тоцитов, распространяясь от центра к периферии дольки, что сопровождается активацией клеток Купфера, но параллельно этому увеличивается выживаемость поврежденных гепатоцитов (рис. 4), нормализуется объем капиллярного русла и улучшается метаболизм гепато-цитов, восстанавливается до нормы масса паренхимы.
Особый интерес представляет факт отсутствия на 2 сутки после отмены мерказолила дистрофических изменений в сохраненных гепатоцитах, имеющих место, как правило, даже у интактных животных (рис. 4).
Среди сохраненных гепатоцитов у подопытных крыс на 2 сутки после отмены мерказолила, по сравнению с интактными, объемная доля мелких гепатоцитов уменьшилась в 1,2 раза, но, их суммарная масса не отличалась от интактных животных (рис. 5). В 2,1 раза уменьшилась суммарная масса дифференцированных клеток размером 14-20 мкм, следовательно, снижаются темпы диф-ференцировки клеток [5,6]. Через 7 суток после отмены мерказолила восстановительные процессы в паренхиме печени существенно активизируются. Это отражается в нарастании числа клеток с нормальной структурой, мелких и дифференцированных клеток. По сравнению
7 6 5 4 3 2 1 0
граммы
114-20 мкм
П>20 мкм
Шрррр
Т
Ш:
- Г-Т"""- Ё$Щ
Ц-г
ин
Г-2с
Г-7 с
Г-28с
□ норм.кл агидроп ибаллоная ¡згиперхром
Рис. 4. Масса гепатоцитов с нормальной и дистрофически измененной структурой у животных с экспериментальным гипотиреозом в течение 1 месяца после отмены мерказолила.
По-видимому, это можно объяснить быстрым переходом дистрофических изменений в некротические при гипотиреозе. К 7 суткам в паренхиме печени среди гепа-тоцитов появляются клетки с гидропической и баллонной дистрофией, но особенно возрастает количество гиперхромных гепатоцитов. Появление дистрофически измененных клеток в этот срок наблюдений можно расценивать как позитивный признак, свидетельствующий о повышении выживаемости клеток в результате, вероятно, уменьшения токсического действия мерказо-лила, либо увеличения резистентности гепатоцитов к нему. Через 28 суток, в паренхиме печени увеличилась в 1,4 раза масса гепатоцитов с нормальной структурой (р<0,05), проявилась тенденция к увеличению массы ге-патоцитов с наиболее легкой формой дистрофии - ги-дропической (рис. 4), а также к снижению массы клеток с наиболее тяжелыми формами дистрофии - баллонной и гиперхромной. Из этого следует, что токсическое поражение гепатоцитов уменьшилось, а большинство тяжело пораженных гепатоцитов разрушилось, что и обусловило рост очагов некроза.
Рис. 5. Масса мелких, средних и крупных гепатоцитов в паренхиме печени у животных с экспериментальным гипотиреозом в течение
1 месяца после отмены мерказолила.
со 2 сутками наблюдений, возросла в 1,12 раза масса гепатоцитов, имеющих нормальную структуру (р<0,05, рис. 4). Появилась тенденция к увеличению количества мелких клеток (их масса изменилась с 1,45±0,06 до 1,88±0,3 г, р<0,05, рис. 5), что может быть связано с ускорением темпов пролиферативных процессов в печени. Возросла в 2,3 раза доля и в 2,4 раза масса дифференцированных клеток размером от 14 до 20 мкм (р<0,05, рис. 5). Из этого можно сделать предположение, что через 7 суток после отмены мерказо-лила полностью нормализуются процессы пролиферации и дифференцировки гепатоцитов. При этом численность крупных гепатоцитов размером свыше 20 мкм проявила тенденцию к уменьшению в 2 раза (с 0,2±0,1 до 0,1±0,03 г), вероятно, в результате их гибели. К 28 суткам восстановительные процессы в паренхиме протекают интенсивно. Масса мелких гепа-тоцитов остается на прежнем уровне (рис. 5), вместе с тем, выявляется выраженная тенденция к увеличению массы гепатоцитов среднего размера, что говорит об активации процесса дифференцировки клеток. Доля и суммарная масса крупных гепатоцитов не изменилась. Эти данные дают основание считать, что при гипотиреозе существенно снижается устойчивость гепатоцитов к различным воздействиям.
По представленным данным можно предположить, что регенераторные возможности печени при гипотиреозе существенно снижены и недостаточны для восстановления нормальной массы паренхимы. Восстановительные процессы в паренхиме протекают интенсивно: масса мелких гепатоцитов остается на высоком уровне (рис. 5), выявляется выраженная тенденция к увеличению массы гепатоцитов среднего размера, что говорит об активации процесса дифференцировки клеток.
Таким образом, через 28 суток после отмены мерка-золила уровень тиреоидных гормонов остается низким, концентрация продуктов липопероксидации повышена, но печень, сохраняя увеличенную массу (за счет тканевых отеков), активно восстанавливается, несмотря на продолжающийся некроз клеток, который является следствием токсического действия мерказолила и торможения метаболических процессов.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсут-
ствии конфликта интересов.
Прозрачность исследования. Исследование не имело спонсорской поддержки. Исследователи несут ответственность за предоставление окончательной версии рукописи в печать.
Декларация о финансовых и иных взаимодействиях. Все авторы принимали участие в разработке концепции и дизайна исследования и в написании рукописи. Окончательная версия рукописи была одобрена всеми авторами. Авторы не получали гонорар за исследование.
ЛИТЕРАТУРА
1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. - М.: Медицина, 1990. - 384 с.
2. БудневскийА.В., Грекова Т.И., БурлачукВ.Т. Гипотиреоз и нетиреоидные заболевания. - Петрозаводск: ИнтелТек, 2004. - 169 с.
3. Гланц С. Медико-биологическая статистика - Пер. с англ. - М.: Практика, 1999. - 459 с.
4. Карпов О.И., Приходько В.П. Нарушения функции печени как дебют клинических проявлений тиреотоксикоза //
Новые Санкт-Петербургские врачебные ведомости. - 1997.
- С.42-44.
5. Козлов В.Н. Тиреоидная трансформация при моделировании эндемического эффекта у белых крыс в эксперименте // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2006. - №5.
- С.27-30.
6. Хрыщанович В.Я., Третьяк С.П., Горанов В.А. и др. Экспериментальная модель гипотиреоза // Медицинский журнал БГМУ - 2008. - №4. - С.80-82.
REFERENCES
1. Avtandilov G.G. Medical morphometry. - Moscow: Meditsina, 1990. - 384 p. (in Russian)
2. Budnevsky A. V., GrekovaT.I.,Burlachuk V.T. Hypothyroidism and netireoidnye disease. - Petrozavodsk: IntelTek, 2004. - 169 p.
3. Glantz S. Biomedical Statistics. - Translation from English. - Moscow: Praktika, 1999. - 459 p. (in Russian)
4. Karpov O.I., Prikhodko V.P. Liver dysfunction as the debut of clinical manifestations of thyrotoxicosis // Novie Sankt-
Peterburgskie Vrachebnie Vedomosti. - 1997. - P.42-44. (in Russian)
5. Kozlov V.N. Thyroid transformation at modeling endemic effect of white rats under experiment // Sibirskij Medicinskij Zurnal (Irkutsk). - 2006. - №5. - P.27-30. (in Russian)
6. Hryschanovich V.J., Tretiak S.P., Goranov V.A., et al. The experimental model of hypothyroidism // Meditsinskij Zurnal BGMU. - 2008. - №4. - P.80-82. (in Russian)
Информация об авторах:
Колесников Сергей Иванович - д.м.н., профессор, академик РАН, главный научный сотрудник ФГБНУ «Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека», 664003, г.Иркутск, ул. Тимирязеваа,16; Макарова Надежда Георгиевна -старший лаборант кафедры гистологии эмбриологии, цитологии, 664003, Иркутск, ул. Красного Восстания,1,
е-mail: [email protected].
Information About the Authors:
Kolesnikov Sergey - MD, PhD, DSc, professor, academician of the Russian Academy of Sciences, chief researcher Scientific Center of family health problems and human reproduction, 664003, Irkutsk, Timiryazeva str., 16; Makarova Nadezhda G. - Senior Laboratory Department of Histology embryology, cytology, 664003, Irkutsk, Krasnogo Vosstania str., 1, e-mail: [email protected]
© ДЭЛГЭРМАА Э., МИЕЭГОМБО А., ЧОЙЖАМЦ Г. - 2014 УДК: 616.333-008.17:616-08:615
РЕЗУЛЬТАТЫ ИЗУЧЕНИЯ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТА «ШИНГУН-5» ПРИ ОЛИГОМИЦИН-ИНДУЦИРОВАННОЙ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МОДЕЛИ «ИНГИБИРОВАНИЕ ПОТОКА ПРОТОНОВ» НА ЖИВОТНЫХ
Дэлгэрмаа Энхдалай1, Амбага Миеэгомбо2, Чойжамц Готов3 ('Медицинский Институт «Ач», ректор - д.м.н., проф. Н. Баасанжав, кафедра традиционной медицины, зав. - д.м.н., проф. Ш. Болд; 2Медицинский Институт «Новая Медицина», ректор - д.м.н., проф. М. Амбага; 3Медицинский Институт «Оточ Манрамба», ректор - к.м.н., проф. Г. Чойжамц, Улан-Батор, Монголия)
Резюме. Изучено влияние препарата Монгольской Традиционной медицины «Шингун-5» на экспериментальной модели олигомицин-индуцированного «ингибирования потока протонов» на животных. «Ингибирование поток апротонов» моделировали внутрибрюшинным введением олигомицина («Sigma-Aldrich», США) в дозе 0,5 мг/ кг вещества на животное в течение 3 дней. Эта модель эквивалентна состоянию, которое в Монгольской традиционной медицин называется абстрактным символическим термином «ветер». Препарат «Шингун-5» оказывал мембраностабилирующий эффект и проявлял антиоксидантную активность.
Ключевые слова: АТФ-синтаза, ингибирование потока протонов, олигомицин, «Шингун-5».
THE RESULTS OF SOME PHARMACOLOGICAL ACTIVITIES OF THE TRADITIONAL MEDICINE «SHINGUN-5» ON OLIGOMYCIN - INDUCED "THE INHIBITION OF PROTON FLOW" EXPERIMENTAL ANIMAL MODEL
Enkhdalai Delgermaa1, Miegombo Ambaga2, Gotov Choijamts3
('Department of Traditional Medicine, «Ach» Medical Institute of Mongolia, Ulaanbaatar; 2«New Medicine» Medical Institute of Mongolia, Ulaanbaatar; 3«Otoch Manramba» Medical Institute of Mongolia, Ulaanbaatar, Mongolia)
Summary. There has been studied the pharmacological effect of the traditional medicine «Shingun-5» on oligomycin - induced "the inhibition of proton flow" experimental animal model. In the rabbits, inhibition of proton flow in ATP synthase was induced by the intraperitoneal administration of oligomycin (Sigma-Aldrich, USA) with a dose of 0.5 mg/kg, for three days. This experimental model was closely equivalent to the conditions of the abstract rlung symbolic terminology in Traditional medicine Mughal. The aqueous extract of «Shingun-5» exhibited the membrane stabilizing and the antioxidant activity.
Key words: ATP synthase, inhibition of proton flow, oligomycin, «Shingun-5».
