CC BY
43
© МАКАРОВА Н.Г., ВАСИЛЬЕВА Л.С., ГАРМАЕВА Д.В. — 2010
СТРУКТУРА ПЕЧЕНИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ГИПОТИРЕОЗЕ
Н.Г. Макарова, Л.С. Васильева, Д.В. Гармаева (Иркутский государственный медицинский университет — ректор д.м.н., проф. И.В.Малов, кафедра гистологии, цитологии и эмбриологии, зав. — д.б.н., проф. Л.С.Васильева)
Резюме. При гипотиреозе, вызванном введением в организм в течение 2 месяцев мерказолила, в печени изменяется внутридольковый кровоток, развивается дистрофическое и некротическое поражение гепатоцитов, торможение пролиферации и дифференцировки клеток. Через 28 суток некротизация гепатоцитов не прекращается, хотя большая часть структурных нарушений устраняется.
Ключевые слова: печень, гипотиреоз, введение мерказолила.
STRUCTURE OF THE LIVER IN EXPERIMENTAL HYPOTHYREOSIS
N.G. Makarova, L.S. Vasilyeva, D.V. Garmaeva (Irkutsk State Medical University)
Summary. In hypothyreosis, caused by introduction in an organism merkazolil within 2 months, in a liver changes intralobular a blood-flow, dystrophic and necrosis lesion develops hepatocytes in 28 day necrosis hepatocytes does not stop, though the most part of structural infringements is eliminated.
Key words: a liver, hypothyreosis , introduction of merkazolil.
Иркутская область относится к числу географических районов с пониженным содержанием в биосфере йода, что является причиной высокой распространенности гипотиреоза. Основными объектами исследования при гипотиреозе являются щитовидная железа, состояние нервной системы и метаболический статус, определяющие симптомокомплекс гипотиреоидного состояния. Вместе с тем, осталось недостаточно изученным структурно-функциональное состояние печени при гипотиреозе, несмотря на ее важнейшую роль в процессах метаболизма.. В печени метаболизируются биогенные амины, осуществляется ферментативная активация стероидных гормонов, инактивация инсулина, глюкагона, диуретического гормона, внетиреоидное образование Т3 из Т4 [1-5]. Исходя из этого, нарушение структуры и функций печени может оказаться важным звеном патогенеза гипотиреоза.
Цель исследования. Выявление структурных нарушений в печени при экспериментальном гипотиреозе.
Материалы и методы
Опыты проведены на 28 беспородных белых крысах — самцах массой 180-200 г. в осенне-зимний период. Семь из них оставались интактными (группа Инт.), остальным крысам моделировали гипотиреоз введением перорально с кормом мерказолила в дозе 10 мг/кг ежедневно в течение 8 недель. Материал для исследования брали через 2, 7 и 28 суток после окончания моделирования гипотиреоза. Определяли массу животного и печени. Структуру печени изучали на гистологических срезах, окрашенных гематоксилин-эозином, а также пикрофук-сином по Ван Гизону для выявления новообразованных коллагеновых волокон, проводили Шик — реакцию по Шабадашу (с контролем амилазой) для выявления гликогена, выявление общего белка бромфеноловым синим по прописи В.Г.Елисеева и др., выявляли кислую фосфатазу по методу Гомори, как маркера активных клеток Купфера. Описание и морфометрию срезов проводили на микроскопе Olympus с помощью программного обеспечения анализа изображения Imaqe Scope Color. Морфометрически оценивали [1] объемные доли паренхимы, синусоидных капилляров (содержащих и не содержащих кровь), очагов некроза (в центре и на периферии дольки), новообразованного коллагена, гликогена, общего белка, активных клеток Купфера, гепатоцитов с неизмененной структурой и дистрофически измененных (с гидропической, баллонной и гиперхромной дистрофией), гепатоцитов мелких (с диаметром меньше 14 мкм), средних (14-20 мкм) и крупных (более 20 мкм).
Полученные цифровые данные в % пересчитывали на массу печени в граммах. Результаты исследования обработаны с помощью статистического пакета программ 81а11зИса V. 6. Определяли тип распределения и оценивали выявленные различия с помощью ¿-критерия Стьюдента (сравнение средних арифметических и их ошибок; данные считались статистически значимыми при p < 0,05) и Р-критерия Фишера (сравнение дисперсий двух выборок, при уровнях доверительной вероятности р=0,001-0,05), определяли коэффициент корреляции [3].
Результаты и обсуждение
После двухмесячного приема мерказолила, на вторые сутки после его отмены масса печени была увеличена в 1,4 раза, но объемная доля и масса паренхимы существенно уменьшилась (табл.1). Выявлялись очаги некроза, преимущественно, центролобулярные. При этом не обнаружено дистрофически измененных гепатоци-тов, что, вероятно, можно объяснить быстрым переходом дистрофических изменений в некротические. На этом фоне увеличилась в 2,8 раза масса активированных клеток Купфера с высокой активностью кислой фосфа-тазы, что говорит об усилении фагоцитарной функции системы печеночных макрофагов, элиминирующих некротические массы. Несмотря на деструктивные процессы, содержание гликогена в гепатоцитах не изменялось, а содержание общего белка даже увеличилось. Возможно, это связано с компенсаторной активацией внутридолькового кровотока, о чем свидетельствует расширение синусоидных капилляров и увеличение в 1,5 раза их массы. При этом застойных явлений не наблюдалось, 88% синусоидов были свободны от крови.
Параллельно деструктивным процессам активируется коллагеногенез, масса новообразованного коллагена возросла в 2 раза. Вместе с тем, в паренхиме печени уменьшилась в 1,8 раза масса мелких гепатоцитов и в
1,7 раза — масса высокодифференцированных гепатоцитов (имеющих средний размер), что может служить свидетельством торможения их пролиферации и диф-ференцировки. Более того, если в норме (у интактных животных) соотношение массы мелких клеток к массе дифференцированных клеток равно 0,5, то при гипотиреозе это соотношение достигает 1,2, что дает основание говорить о снижении темпов дифференцировки по отношению к скорости пролиферации клеток. На основании этих данных можно видеть, что регенераторные возможности печени при гипотиреозе существенно снижены и недостаточны для восстановления численности гепатоцитов.
Через 7 суток у подопытных животных масса печени не уменьшается, но масса паренхимы в ней увеличивается (табл.1), достигая ее величины у интактных животных. Тем не менее, некротическое поражение паренхимы продолжает развиваться, распространяясь к периферии долек. Масса очагов некроза увеличивается в 1,5 раза, по сравнению с предыдущим сроком. Это сопровождается дальнейшим увеличением почти вдвое количества активированных клеток Купфера. Необходимо отметить, что в паренхиме печени в этот срок наблюдения появились клетки с гидропической и баллонной дистрофией, но особенно возросло количество гиперхромных гепатоцитов. Появление дистрофически измененных клеток можно расценивать как позитивный признак, свидетельствующий о повышении выживаемости клеток в результате, по-видимому, уменьшения токсического действия мерказолила либо увеличения резистентности гепатоцитов к нему.
Статистически значимо уменьшается доля и масса
внутридолькового сосудистого русла, значение этих показателей становится даже меньше, чем у интакт-ных животных, причем все синусоидные капилляры не были заполнены кровью, тогда как у интактных животных кровь обнаруживалась, как правило, в 25% синусоидных капилляров. Эти данные косвенно указывают на увеличение скорости внутридолькового кровотока у подопытных животных. Параллельно нормализовалось количество гликогена и общего белка, что отражает положительные сдвиги в метаболическом статусе гепато-цитов. Наблюдалась тенденция к уменьшению массы и доли новообразованного коллагена.
В паренхиме печени нарастала в 1,9 раза масса клеток с нормальной структурой. В 2,2 раза увеличилась и достигла уровня интактных животных масса мелких клеток, что дает основание говорить о восстановлении нормальных темпов пролиферативных процессов в печени. Возросла доля (в 2,3 раза) и масса (в 4 раза) дифференцированных гепатоцитов, имеющих средний размер. К нормальному значению вернулось соотношение массы мелких клеток и дифференци-Табтца 1 рованных клеток. Из этого следует, что через 7 суток после отмены мер-казолила полностью нормализуются процессы пролиферации и диффе-ренцировки гепатоцитов. При этом численность (масса) крупных гепа-тоцитов (размером свыше 20 мкм) уменьшилась в 11 раз, вероятно, в результате их гибели.
Таким образом, на 7 сутки после отмены мерказолила в печени продолжались процессы некротизации гепатоцитов, но увеличилась выживаемость поврежденных гепатоцитов, нормализовался объем капиллярного русла, частично восстановился метаболизм гепатоцитов, нормализовались процессы их пролиферации и дифференцировки, восстанавливается масса паренхимы.
К 28 суткам после отмены мерка-золила масса печени проявляет тенденцию к еще большему увеличению. При этом масса паренхимы статистически значимо не изменилась, но в 2,5 раза увеличилась масса внутри-долькового сосудистого русла, в котором, по-прежнему, все синусоидные капилляры не содержали крови. Продолжала нарастать масса очагов некроза, распределенных одинаково в центре и на периферии дольки.
В связи с этим, возникает два вопроса. Во-первых, какими причинами обусловлен рост некротических изменений гепатоцитов. Во-вторых, с чем могут быть связаны указанные изменения в микрососудистом русле.
Ответ на первый вопрос можно получить, анализируя качество клеточного состава гепатоцитов. Установлено, что в паренхиме печени увеличилась, по сравнению с предыдущим сроком, в 1,4 раза масса гепатоцитов с нормальной структурой, проявилась тенденция к увеличению массы гепатоцитов с наиболее легкой формой дистрофии — ги-дропической, а также к снижению массы клеток с наиболее тяжелыми формами дистрофии — баллонной и гиперхромной. Из этого следует, что токсическое поражение гепатоцитов уменьшилось, а большинство тяжело
Соотношение тканевых структур в печени у интактных крыс и у животных с экспериментальным гипотиреозом
Группа крыс Сроки после моделирования гипотиреоза
Показатели Интактные 2 суток 7 суток 28 суток
Масса печени 5,6±0,76 8+0,61 8+0,11 9,9+1,11
Синусоидные капилляры 14,53±0,42 31,6+4,35’ 9,66+0,61"2 21,35+112
грамм 0,62±0,02 0,9+0,12 1 0,5+0,0312 1,26+0,0512
Синусоидные капилляры без крови 11,76±0,7 27,9+61 10,4+0,82 20,6+0,9712
грамм 0,49±0,03 0,8+0,17 0,5+0,032 1,22+0,0512
с кровью 3,09±0,09 2,12+1,36 0+01 01
грамм 0,138±0,003 0,06+0,04 0+01 01
Некроз 1,38±-0,37 10,7+0,71 9,3+0,411 9,06+11
грамм 0,058±0,01 0,3+0,021 0,45+0,0212 0,53+0,0612
Некроз Центр дольки 0,56±0,18 6,6+0,651 4,38+0,3 12 4,53+1,021
грамм 0,02±0,007 0,2+0,02' 0,2+0,0112 0,26+0,061
Периф. дольки 0,82±0,76 3,57+0,681 4,9+1,021 4,53+1,071
грамм 0,03±0,03 0,1+0,01 0,24+0,0112 0,27+0,0591
Паренхима 74,7+11,3 35,9+41 61,3+12 59,9+6,4
грамм 4,18±0,59 2,87+0,21 4,9+0,62 5,93+0,66
Баллонная дистрофия 3±1,27 0+01 0,9+0,6 0,2+0,03
грамм 0,13+0,05 0+01 0,047+0,03 0,01+0,019
Гидропическая дистрофия 16,2+3,9 0+01 4,3+1,912 6,2+4,5
грамм 0,67+0,16 0+01 0,21+0,0912 0,38+0,27
Гиперхромная дистрофия 0,4+0,15 0+01 13,5+212 7,5+3,21
грамм 0,02+0,006 0,01+0,0011 0,66+0,112 0,4+0,241
Нормальные клетки 52,9+3,09 34,7+1,81 38,9+3,11 43,58+3,3
грамм 2,2+0,13 1+0,05' 1,9+0,152 2,58+0,192
Гликоген 41,2+6,6 36,4+4,7 47,7+10,4 63,8+4,41
грамм 1,72+0,27 1,04+0,13 2,3+0,52 3,78+0,2612
Общий белок 42,1+2,23 50,3+3,31 30,5+5,92 30,9+7,5
грамм 1,76+0,09 1,44+0,091 1,49+0,3 1,83+0,4
Клетки до 14мкм 22,4+2 18,6+2,31 23,48+6,5 19+2,1
грамм 0,94+0,06 0,52+0,151 1,15+0,152 1,14+0,08
Клетки от 14 до 20 мкм 44,8+2 15,2+7,91 36+9,72 36,4+2,01
грамм 1,87+0,06 0,43+0,0051 1,7+0,00312 2,3+0,00912
Клетки более 20 мкм 7,5+3,5 2,7+4,1 1,47+0,71 4,31 + 1,8
грамм 0,31+0,1 0,77+0,036 0,07+0,0161 0,25+0,07
Клетки Купфера 5,9+1,68 12,6+2,91 20,1+4,81 9,9+2,9
грамм 0,24+0,07 0,58+0,141 0,98+0,21 0,6+0,17
Новообразованный коллаген 2,6+0,18 7,5+1,31 4,6+0,92 2+1,6
грамм 0,11+0,007 0,27+0,121 0,17+0,032 0,12+0,09
1 — отличие от интактных животных, р<0,05.
2 — отличие от животных предыдущего срока, р<0,05.
пораженных гепатоцитов разрушилось, что и обусловило рост очагов некроза.
В поиске ответа на второй вопрос необходимо учитывать особенности структуры синусоидных капилляров печени, не имеющих типичной для кровеносных капилляров стенки с эндотелием на базальной мембране, а отграниченных от гепатоцитов только ретикуло-эндотелиальными клетками, отдельными ретикулярными волокнами и пространствами Диссе с основным веществом. Из этого следует, что изменение просвета синусоидных капилляров может быть обусловлено либо изменением размера окружающих их гепатоцитов, либо давлением протекающей по ним крови. По нашим данным, в этот срок наблюдений в паренхиме в 1,35 раза увеличилось количество гепатоцитов среднего размера, следовательно, изменение размера окружающих капилляры гепатоцитов не является причиной увеличения доли капиллярного русла. Этот вывод подтверждается отрицательной корреляционной связью между массой микрососудистого русла и крупных гепатоцитов ((г = —0,77). Вторая предполагаемая причина — увеличение давления протекающей по капиллярам крови — более вероятна. Учитывая, что при гипотиреозе снижается интенсивность метаболизма в тканях, можно предположить снижение мышечного тонуса стенки сосудов, приносящих кровь в дольку печени — междольковых артерии и вены, что и приводит к увеличению давления и скорости кровотока в синусоидных капиллярах.
С изменениями в микрососудистом русле связаны, по-видимому, и метаболические изменения в гепато-цитах. В частности, усилилась гликоген-депонирующая функция гепатоцитов, содержание гликогена в печени увеличилось в 1,6 раза, по сравнению с предыдущим сроком и с интактными животными. Вместе с тем, со-
держание общего белка осталось в пределах нормы. Вероятно, при повышенной скорости кровотока гепа-тоциты получают больше глюкозы, которой хватает и на энергетическое обеспечение функций клеток, в том числе синтеза белка, и на ее депонирование в виде гликогена. Подтверждением этого предположения является положительная корреляция массы сосудистого русла с массой гликогена (г=+0,5) и общего белка (г=+0,78).
Восстановительные процессы в паренхиме протекают интенсивно. Масса мелких гепатоцитов остается на прежнем уровне, следовательно, пролиферативные процессы не снижают активности. Вместе с тем увеличивается в 1,4 раза масса гепатоцитов среднего размера, что говорит об активации процесса дифференцировки клеток.
Таким образом, через 28 суток после отмены мерка-золила печень, сохраняя увеличенную массу, активно восстанавливается, несмотря на продолжающийся некроз клеток, который является последствием токсического действия мерказолила и торможения метаболических процессов.
Подводя итог анализа представленных материалов, следует подчеркнуть, что введение в организм в течение 2 месяцев мерказолила приводит не только к развитию гипотиреоидного состояния, но и нарушает структуру и функции печени — важнейшего органа жизнеобеспечения. Эти нарушения выражаются в изменении вну-тридолькового кровотока, дистрофическом и некротическом поражении гепатоцитов, торможении пролиферации и дифференцировки клеток. Через 7 суток после отмены мерказолила активизируются восстановительные процессы, но даже через 28 суток не прекращается некротизация гепатоцитов, хотя большая часть структурных нарушений устраняется.
ЛИТЕРАТУРА
1. Герасимов Г.А. Цитопарофорфоз щитовидной железы.// Актуальные вопросы современной эндокринологии и иммунологии. — 1986. — №2. — С. 10-17.
2. Дедов И.И., Мельниченко Г.А. Диагностика, лечение и профилактика ятрогенных йодиндуцированных заболеваний щитовидной железы. // Вестник РАМН. — 2006. — №2. — С.15-22.
3. Зельцер М.Е. Эутиреоидная гиперплазия щитовидной
железы — актуальная проблема современной эндокринологии. — 1988. — №4. — С. 43-45.
4. Кандрор В.И. Молекулярно — генетические аспекты ти-реоидной патологии.// Проблемы эндокринологии. — 2001. — № 5. — С. 3-10.
5. Карпов О.И., Приходько В.П. Нарушения функции печени как дебют клинических проявлений тиреотоксикоза. //Новые Санкт-Петербургские врачебные ведомости. — 1997. — С.42-44.
Информация об авторах: 664003, Иркутск, ул. Красного восстания,1. Васильева Людмила Сергеевна — зав. кафедрой, д.б.н., проф. Макарова Н.Г. —
Гармаева Д.В. —
© ЛУБЯНСКИЙ В.Г., ЖАРИКОВ А.Н. — 2010
ПРИМЕНЕНИЕ РЕЗЕКЦИЙ ТОНКОЙ КИШКИ С ОТСРОЧЕННЫМ АНАСТОМОЗИРОВАНИЕМ У БОЛЬНЫХ С ПОСЛЕОПЕРАЦИОННЫМ РАСПРОСТРАНЕННЫМ ПЕРИТОНИТОМ
В.ГЛубянский, А.Н. Жариков (Алтайский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., проф. В.М. Брюханов, кафедра госпитальной хирургии, зав. — д.м.н., проф. В.Г. Лубянский)
Резюме. Послеоперационный перитонит является одной из наиболее важных проблем современной хирургии. Установлено, что основными причинами несостоятельности кишечных швов являются воспалительная инфильтрация кишечной стенки с микробной контаминацией и синдром энтеральной недостаточности. Применение обструктивных резекций тонкой кишки с кишечной интубацией и последующим отсроченным анастомозиро-ванием позволило уменьшить риск несостоятельности кишечных швов на фоне послеоперационного перитонита и снизить количество летальных исходов.
Ключевые слова: Послеоперационный перитонит, обструктивная резекция кишки, отсроченный межкишечный анастомоз.
APPLICATION OF RESECTIONS OF SMALL INTESTINE AND DELAYED INTERINTESTINAL ANASTOMIZATION IN PATIENTS WITH DIFFUSE POSTOPERATIVE PERITONITIS
V.G. Lubiansky, A.N. Zharikov (Altai State Medical University of Roszdrav, Barnaul)
Summary. The postoperative peritonitis is one of the most important problems of modern surgery. Principal causes of an inconsistency of intestinal seams are inflammatory infiltration an intestinal wall with microbic contamination and a syndrome enteral insufficiency. Application of obstructive resections of a thin gut with intestinal intubacion and the subsequent delayed anastomization
