Нафтоиндол-3-карбоксамиды -новые цитотоксические соединения в ряду антрахинонов Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»



МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 41

регистрировали при использовании светофильтра Fset 45 эффект для LLC отсутствовал. Для Са-755 после введения с параметрами возбуждения 540—580 нм. С помощью МТТ- Gd: концентрация Gd в опухоли <1 мг/мл и прогнозируе-теста была изучена токсичность Mgcr8Pc в клетках HeLa. мое увеличение дозы <5 %. Но ФЗТ Са-755 с введением Gd результаты. Результаты по изучению цитотоксичности показала задержку роста опухоли на 6 сут. и флуоресцентной микроскопии показали, что морфология Заключение. Наблюдали несоответствие противоопу-клеток изменяется после 24 ч действия Mgcr8Pc в дозе IC50. холевого эффекта ФЗТ пространственному распределению Установлено, что Mgcr8Pc локализуется как в ядрах, так и величине поглощенной дозы, создаваемых ДПА. Это и в цитоплазме клеток при данном способе обработки. указывает на то, что противоопухолевый эффект ФЗТ об-Заключение. Таким образом, получены данные по на- условлен не только физическим повреждением опухоли коплению Mgcr8Pc в клетках HeLa, что позволяет продол- ионизирующим излучением, но и иными биологическими жить дальнейшее изучение на опухолевых клетках нового механизмами. Данные механизмы более выражены для Са-соединения Mgcr8Pc как потенциального ФДТ-агента. 755, чем для LLC. Возможно, что локальные всплески по- Работа поддержана глощенной дозы запускают другие механизмы подавления Программой фундаментальных научных исследований роста опухоли, которые и играют ведущую роль в создании Президиума РАН № 34 и РФФИ противоопухолевого эффекта ФЗТ (проект № 18-03-00743 А). В.А. Литвинова1-2, А. С. Тихомиров12, А. Е. Щекотихин12 А.А. Липенгольи1-2. А.В. Смирнова1-3. Т.Б. Куракина3. НАФТОИНДОЛ-3-КАРБОКСАМИДЫ -Е.А. Калабина4, Е. С. Воробьева2, И.Н. Нечкина1, НОВЫЕ ЦИТОТОКСИЧЕСКИЕ СОЕДИНЕНИЯ Ю.А. Финогенова5, М.А. Абакумов5, Е. Ю. Григорьева1, В РЯДУ АНТРАХИНОНОВ И.Н. Шейно2 1ФГБНУНИИНА, Москва, Россия; ОСОБЕННОСТИ ПРОЯВЛЕНИЯ 2РХТУ им. Д.И. Менделеева, Москва, Россия ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ЭФФЕКТА Введение. Пиррол- и фуран-конденсированные про-ФОТОН-ЗАХВАТНОЙ ТЕРАПИИ РАЗЛИЧНЫХ изводные антрахинона обладают высокой противоопухо-ОПУХОЛЕВЫХ МОДЕЛЕЙ МЫШЕЙ левой активностью, воздействуя на ряд внутриклеточных 1ФГБУ«НМИЦонкологии им. Н.Н. Блохина» ферментов (топоизомеразы 1 и 2, протеинкиназа Aurora B). Минздрава России, Москва, Россия; Соединение-лидер — антрафуран ЛХТА-2034 — прошло 2ФГБУ ГНЦФМБЦим. А.И. Бурназяна ФМБА России, доклинические испытания и рекомендовано для проведе-Москва, Россия; ния клинических исследований. 3ГБУЗ «МКНЦ им. А. С. Логинова ДЗМ», Москва, Россия; Цель исследования. Анализ влияния гетероатома и кар-4Филиал ФГБУНИБХРАН, Пущино, Московская область, бонильного фрагмента карбоксамидной группы наф-Россия; то[2,3-/|индол-5,10-дионов на цитотоксическую активность. 5ФГБОУ ВО «РНИМУим. Н.И. Пирогова» Материалы и методы. Нафто[2,3-/]индол-3-карбокса-Минздрава России, Москва, Россия миды были получены конденсацией нафто[2,3-/]индол-Введение. Фотон-захватная терапия (ФЗТ) — новый 3-карбоновой кислоты с аминами. Антипролиферативная перспективный метод лучевой терапии злокачественных активность полученных соединений была изучена в МТТ-опухолей. В ФЗТ пространственное распределение дозы тесте на линиях опухолевых клеток аденокарциномы под-определяется пространственным распределением дозопо- желудочной железы Capan-1, карциномы кишки HCT-116, вышающего агента (ДПА). карциномы легкого NC1-H460, острого лимфобластного Цель исследования. Определить зависимость эффек- лейкоза DND-41, острого миелоидного лейкоза HL-60 тивности ФЗТ от пространственного распределения погло- и хронического миелоидного лейкоза K562. щенной дозы в опухоли. Результаты. Обнаружено, что замена атома кислорода Материалы и методы. Опухолевые модели: Са-755 на азот в гетероциклическом ядре повышает растворимость и LLC, рентгеновский аппарат 200 кВ, микро-КТ IVIS, га- целевых соединений (более чем в 20 раз). Новые производ-добутрол (Gd) и йопромид (I). Облучение Ca-755 в дозе 13 Гр, ные нафто[2,3-/]индол-3-карбоксамида подавляют про-LLC — 20 Гр. Моделирование дозного распределения при лиферацию опухолевых клеток в интервале от низких ми-сосудистом поступлении и локализации ДПА в опухоли кромолярных до субмикромолярных концентраций. на модели Са-755 и в/в способе введения, а внутритканевая Энантиомерные амиды, содержащие циклический амин локализация — на LLC и и/т введении. Выбор моделей — в боковой цепи, имеют близкую биологическую актив-по данным МРТ, показавшей, что при в/в введении кон- ность, в отличие от их биоизостерных аналогов фураново-трастные средства (КС) проникают в Са-755 и не прони- го ряда, у которых наиболее активным оказалось произ-кают в LLC, а при и/т введении КС быстро выводятся водное (5)-3-аминопирролидина (ЛХТА-2034). из Са-755, но сохраняются в тканях LLC. Пространствен- Заключение. Новые аналоги противоопухолевого антра-ное распределение поглощенной дозы в опухоли вычисля- фурана ЛХТА-2034 на основе нафто[2,3-/]индол-3-карбок-ли по распределению ДПА. Контроль — группа мышей, самида являются перспективными кандидатами для изучения облученных в той же дозе, но без введения ДПА. механизма действия и дальнейшего их тестирования in vivo. Результаты. После введения I в 31 % объема опухоли Химическая часть исследований выполнена наблюдалась концентрация I, создающая при облучении при финансовой поддержке гранта Президента РФ дозу до 200 Гр, но дополнительный противоопухолевый для молодых ученых МК-2474.2018.3.

Спецвыпуск / том 17 / 2018 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

42

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

А.А. Лушникова1, Л.Ф. Морозова1, А.А. Рудакова1, С.М. Андреев2, А.В. Балбуцкий1

индукция апоптоза клеток рака Почки катионными пептидами

ФГБУ«НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия; ФГБУ«ГНЦИнститут иммунологии» ФМБА России, Москва, Россия

введение. Рак почки (РП) отличается высокой моле-кулярно-генетической и клинической гетерогенностью, что значительно ухудшает прогноз и ответ на стандартную химиотерапию. Для молекулярно направленной терапии агрессивных опухолей почки перспективны катионные пептиды (КП), взаимодействующие с многофункциональными белками нуклеолином (С23) и нуклеофозмином (В23), которые высоко экспрессированы в большинстве опухолевых клеток, но не в нормальных клетках. Рецеп-торный С23 рассматривается как основная мишень для молекул КП, обогащенных остатками Arg-Lis.

Цель исследования. Изучение механизмов избирательной цитотоксичности КП на модельной перевиваемой линии Рпоч1-КК светлоклеточного РП с ранее выявленной цитогенетической поликлональностью и мутациями в генах-супрессорах VHL и TP53.

материалы и методы. Клетки (Кл) Рпоч1-КК культивировали в полной питательной среде RPMI-1640 с 10 %-ной эмбриональной телячьей сывороткой. Цитотоксичность 5 КП с разной структурой массой 1—2 кДа изучали в стандартных МТТ-тестах и микроскопически, используя флуоресцентно меченный Су5*-КП со структурной формулой RgK4K2KAC-NH2, вносимый с интервалом 2 ч в конечных концентрациях 0,5—1 мкг/мл в микроячейки с 2-суточной культурой Кл Рпоч1-КК. Контроль — морфологически нормальные фибробласты человека линии Н1036. После 2—6 ч инкубации Кл окрашивали DAPI и Хекст 33342. Для подтверждения апоптоза использовали проточную цитофлуо-риметрию. Экспрессию генов NCL/NPM и кодируемых белков С23/В23 анализировали с помощью ОТ-ПЦР, ИГХ-окрашивания стекол с суспензией Кл Рпоч1-К и вестерн-блоттинга.

результаты. Уровни экспрессии С23/В23 в Кл Рпоч1-КК выше контроля в 7,6 и 4,2 раза соответственно, что подтверждает дифференциальную экспрессию С23/В23 в опухолевых и нормальных Кл. МТТ-тест выявил высокую цитотоксичность изученных КП с разной молекулярной структурой в концентрациях 0,5—4 мкг/мл. Выживаемость клеток в 3-суточной культуре Кл после инкубации с КП снизилась до 12,9—18,4 %, в контрольных лунках — не изменилась, и цитотоксичность КП в отношении фибробластов не выявлена. Результаты вестерн-блоттинга и ОТ-ПЦР показывают, что в основе избирательной цитотоксичности изученных КП лежит конкурентное взаимодействие молекул КП с рецептор-ными С23 и В23, высоко экспрессированными в опухолевых клетках и регулирующими ключевые клеточные процессы, в том числе апоптоз, с последующим высвобождением супрес-сора р53. После инкубации с КП в Кл Рпоч1-КК наблюдалось значительное повышение экспрессии р53 и снижение уровня свободного С23. Показано также, что в апоптоз Кл Рпоч1-КК, индуцированный КП, вовлечены каспазы 3, 8 и 9.

Заключение. На модельной перевиваемой линии Рпоч1-КК показана избирательная цитотоксичность 5 низкомолекулярных КП. В механизм апоптоза вовлечены белки С23, В23 — возможные мишени пептидов, р53 и каспазы 3, 8, 9. Эти КП перспективны для предклинического исследования.

Е.C. Лылова1, А.В. Савинкова2, Л.Р. Тилова2, Е.М. Жидкова2, В.П. Максимова2, К.А. Кузин2, О.А. Власова2, К.И. Кирсанов2, А.Ю. Портянникова2, М.Г. Якубовская2, Е.А. Лесовая2,3 поиск ингибиторов REDD1 и оЦЕнкА

их влияния на рост и жизнеспособность клеток лейкозов и лимФом

1МИТХТ, Москва, Россия;

ФГБУ«НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина»

Минздрава России, Москва, Россия;

ФГБОУВО РязГМУМинздрава России, Рязань, Россия

введение. Глюкокортикоиды (GC) часто применяются в терапии онкологических заболеваний. Однако их использование ограничено возникновением побочных эффектов и развитием резистентности. Биологические эффекты GC реализуются посредством активации глюкокортикоидного рецептора (GR), который регулирует экспрессию генов путем транс-репрессии, обусловливающей терапевтическое действие GC, и транс-активации, отвечающей за побочные эффекты. Было показано, что GR-зависимый ген REDD1 (regulated in development and DNA damage response 1) имеет большое значение в развитии побочных эффектов GC. Были отобраны потенциальные ингибиторы REDD1 — антипротозойное средство эметин и ингибитор протеинкиназы CGP-60474.

Цель исследования. Оценка эффектов потенциальных ингибиторов REDD1 эметина и CGP-60474 на рост и жизнеспособность клеток лимфомы и лейкоза.

материалы и методы. Потенциальные ингибиторы REDD1 отбирали с помощью биоинформатического анализа. Их свойства оценивали на клетках острого лимфоб-ластного лейкоза СЕМ и мантийноклеточной лимфомы Granta. Клетки обрабатывали эметином или CGP-60474, затем, спустя 6 ч после обработки веществами, глюкокор-тикоидом дексаметазоном (Dex) в течение 24—72 ч. Цито-токсический эффект определяли с помощью прямого подсчета клеток. Экспрессию REDD1 оценивали с помощью количественной ПЦР после обработки клеток ингибиторами REDD1 в течение 6 ч и последующей обработки Dex в течение 6—24 ч.

результаты. Эметин и CGP-60474 не снижали цито-токсический эффект Dex на клетки обеих линий, а при определенных дозах мы наблюдали кооперативное цитотоксиче-ское действие глюкокортикоида и тестируемых соединений. В то же время эметин и CGP-60474 подавляли базальный и GC-индуцированный уровень экспрессии REDD1.

Заключение. Эметин и CGP-60474 являются ингибиторами REDD1 и не снижают цитотоксический эффект GC. Перспективным является исследование их действия на моделях лейкозов и лимфом для оценки их влияния на развитие побочных эффектов GC.

Работа поддержана грантом РНФ № 17-75-20124.

Спецвыпуск / том 17 / 2018

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ