CC BY
10
обработку материала проводили при помощи статистического пакета ЙаИзИса 6.0.
Результаты проведенного исследования показали, что у крыс группы контроля ТК имели округлую или вытянутую форму, количество их колебалось от 1 до 2, среднее число их составило (1,2 ± 0,2). Площадь ТК составила (94,0 ± 20,7) мкм2. Гранулы в цитоплазме ТК располагались компактно, дегрануляцию отмечали в небольшом количестве клетках. ИДТК составил 26,8 %. Также выявляли наличие единичных ТК в нервных стволах. При смерти, наступившей сразу после глубокой гипотермии (1 группа), ТК имели овальную или неправильную форму, количество их варьировало от 1 до 3 в поле зрения, среднее число ТК составило (1,8 ± 0,4). Площадь ТК составила (130,9 ± 16,9) мкм2. Число клеток, находившихся в состоянии дегрануляции, возрастало по сравнению с контрольной группой, ИДТК составил 30,7 %. Отмечали увеличение числа ТК в нервных стволах. На 7 сутки проведения эксперимента (2 группа исследования) ТК имели преимущественно неправильную форму, количество их колебалось от 2 до 12 в поле зрения, среднее число составило (4,6 ± 0,4), а площадь сечения - (167,1 ± 13,4) мкм2. Большинство клеток находилось в состоянии де-грануляции. ИДТК составил 83 %. Отмечали значительное число ТК в нервных стволах.
ВЫВОДЫ
Таким образом, гипотермия является мощным активатором активности ТК. Внутритканевые ТК могут являться важными факторами в процессе адаптации организма к гипотермии. В судебно-медицинской практике исследование морфофункциональной активности тучно-клеточной популяции может быть дополнительным дифференциально-диагностическим критерием при смерти от гипотермии.
■ ДИНАМИКА ЭКСПРЕССИИ в-АРР БЕЛКА ПРИ ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОМ ИССЛЕДОВАНИИ В СЛУЧАЯХ ЧЕРЕПНО-МОЗГОВОЙ ТРАВМЫ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СРОКА ВЫЖИВАНИЯ_
А. Н. Шай
ФГБУ «РЦСМЭ» Минздрава России, Москва В докладе рассматривается вопрос оценки иммуно-гистохимической реакции на @-АРР белок при аксо-нальном повреждении в динамике в различные сроки выживания после черепно-мозговой травмы. Ключевые слова: диффузное аксональное повреждение, в-АРР белок, черепно-мозговая травма, динамика, иммуногистохимическая реакция, ИГХ Одним из чувствительных и информативных методов диагностики аксонального повреждения, особенно при отсутствии или минимальной выраженности макроскопических признаков черепно-мозговой травмы (ЧМТ), является иммуногистохимический метод выявления белка в-амилоидного предшественника (в-АРР). Положительная реакция по этот протеин в структурах нейрона начинает проявляться уже через 35 минут после травмы и сохраняется длительное время, до 99 суток. В ряде научных исследований установлена определенная динамика экспрессии маркера. Так, обнаружено, что первые признаки начинают определяться в течение 3 часов выживания после травмы, далее количество положительно окрашенных нейронов увеличивается в течение 24 часов и достигает своеобразного «плато», которое сохраняется в течение 10-14 дней. После этого периода интенсивность окрашивания уменьшается и через 3-4 недели с трудом идентифицируется, хотя при исследовании при увеличе-
нии х400 часто обнаруживается гранулированное окрашивание в структуре аксона.
В нашей работе исследуемые случаи разделили на группы в соответствии со сроком выживания после травмы: первая группа - проявления экспрессии в единичных клетках - до 3 часов выживания после травмы, вторая группа - увеличение количества окрашенных клеток и увеличение интенсивности реакции - от 3 часов до суток, третья группа - максимальная экспрессия белка, выживаемость от 2 до 14 суток, четвертая группа - редукция накопленного в-АРР белка, выживаемость от 14 суток и более.
Интенсивность экспрессии маркера оценивали в баллах - от 0 до 3, а также количество окрашенных структур в поле зрения - 4 степени по нарастающей. Экспрессия в первой группе представлена слабой окраской преимущественно тел нейронов и незначительной экспрессией в отростках, реакция начинает переходить с тела нейрона на отростки, количество окрашенных структур в поле зрения до 25 %. Достоверно установлена связь интенсивности окраски с количеством окрашенных структур в поле зрения. Однако и в этой группе может отмечаться интенсивная окраска части клеток, но с преимущественным окрашиванием тел нейронов и начальными признаками экспрессии белка в отростках.
Вторая группа - суточной выживаемости - характеризуется полным окрашиванием аксонов и увеличением количества окрашенных структур в поле зрения.
В третьем периоде сохраняется положительная реакция, которая достигает максимума в течение первых суток. Чем больше срок выживания, тем более заметны начальные признаки деградации пигмента - начальная грануляция.
4-й период выживания - более 15 суток после ЧМТ -характеризуется периодом деградации в-АРР протеина, что демонстрирует уменьшение количества окрашенных структур, распад пигмента и нахождение его в виде гранул. В нашем исследовании положительная реакция на белок выявлялась до 64 суток выживания после травмы.
ВЫВОДЫ
Аксональное повреждение сопровождает любую черепно-мозговую травму. Наиболее оптимальным методом его диагностики является иммуногистохимическое обнаружение в-АРР протеина, который накапливается в структурах нейрона при аксональном повреждении и нарушении быстрого транспорта по аксону.
Обнаружение корреляции количества окрашенных структур, интенсивности ИГХ реакции и ее внутриклеточного распределения позволяет использовать ИГХ выявление экспрессии в-АРР белка как одного из важнейших факторов для определения сроков выживания после ЧМТ.
МОРФОМЕТРИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НУКЛЕОЛЯРНОГО АППАРАТА ГЕПАТОЦИТОВ КРЫС ВИСТАР ПОСЛЕ ОДНОКРАТНОЙ ГЛУБОКОЙ ИММЕРСИОННОЙ ГИПОТЕРМИИ
И. П. Бобров, А. В. Лепилов, А. Ю. Долгатов, Н. Г. Крючкова, З. Н. Гулдаева, О. В. Орлова, Е. Е. Алымова, М. Н. Соседова
Кафедра судебной медицины им. проф. В. Н. Крюкова и патологической анатомии с курсом ДПО ФГБОУ ВО АГМУ Барнаул Исследование посвящено изучению активности ядрышкового аппарата печени белых крыс после воздействия однократной глубокой иммерсионной
гипотермии в эксперименте. Показано, что холо-довой стресс оказывает выраженное повреждающее воздействие на рибосомальный синтез. Ключевые слова: гепатоциты, гипотермия, ядрыш-ковые организаторы
Ядрышко - это динамичная органелла клетки, и его структура отражает уровни трех основных процессов, связанных с биогенезом рибосом: синтез прерибосомальной рибонуклеиновой кислоты (преРНК), процессинг и миграцию рибонуклеопротеидных частиц в нуклеоплазму. Одним из замечательных свойств ядрышек является их высокая пластичность, которая проявляется в изменении размеров, морфологии и локализации в ядре при реакции на многие внешние стрессовые воздействия, а также при адаптации к неблагоприятным факторам. В литературе имеется небольшое количество работ, посвященных морфологии ядрышка клеток печени при гипотермии. Ка-прелянц А. С. и соавт. (1985) в гепатоцитах, подвергнутых гипотермии, отмечали перемещение ядрышка на периферию ядра, к его мембране, что данные авторы объясняют увеличением ядерно-цитоплазматических отношений и усилением регуляторного влияния ядра на цитоплазму. По данным других авторов, под влиянием низкой температуры (2 часа при температуре 0-4 °С) в печени крыс происходила дегрануляция ядрышек, а через 10 часов после помещения экспериментальных животных снова в нормальные температурные условия ультраструктура ядрышек восстанавливалась [Логинов А. Г., 1987]. Молодых О. П. (2001) при электронной микроскопии ядрышек гепатоцитов при холодом стрессе отмечала явления сегрегации гранулярного и фибриллярного компонентов, что отражает низкий уровень синтеза рибосомной РНК и, как следствие, низкий уровень метаболизма клеток в целом. Исследований ядрышковых организаторов клеток печени методом серебрения при воздействии холодом в литературе нами не обнаружено.
Целью исследования являлся морфометрический анализ ядрышковых организаторов гепатоцитов крыс Вистар при одноразовой глубокой иммерсионной гипотермии и в постгипотермическом периоде.
Исследование было выполнено на 20 белых крысах линии Wistar. Гипотермию моделировали путем помещения животных, находящихся в индивидуальных клетках, в воду температурой 5 °C, при температуре окружающего воздуха 7 °C. Критерием прекращения эксперимента служило достижение животными ректальной температуры 20-25 °C, что соответствовало глубокой степени гипотермии. Время экспозиции было индивидуальным и в среднем составляло (40 ± 5) мин. В ходе эксперимента животные были разделены на 4 группы: 1 группы (n = 5) - животные выводились из эксперимента декапита-цией сразу после прекращения охлаждения; 2 группа (n = 5) - через 2 суток; 3 группа (n = 5) - через 7 суток и 4 группа (n = 5) - через 14 суток. Выявление ядрышковых организаторов осуществляли по двухступенчатому методу Daskal Y. et al., в нашей модификации. При увеличении х1000 под масляной иммерсией микроскопа высчитывали число ядрышек, суммарную площадь аргирофильных гранул (AgNORs) на 1 ядро, площадь одного ядрышково-го организатора и ядрышко-ядерное соотношение (Ядр/ яд) в относительных единицах (отн. ед.). Морфометри-ческие измерения проводили с помощью аппаратно-программного комплекса, состоящего из программного обеспечения для морфометрического анализа ВидиоТест-Морфология 5.2, цифровой камеры VIDI CAM (Россия), адаптированной к световому микроскопу Nikon Eclipse E200 (Япония) и персонального компьютера. У каждого животного исследовали не менее 25-30 ядер гепатоцитов.
Статистическую обработку материала проводили при помощи статистического пакета 81аЙ8Йса 10.0.
Результаты проведенного исследования показали, что при окраске гистологических срезов печени экспериментальных животных ядрышковые организаторы четко выявлялись в виде черных гранул (А§МОК.8) на желтоватом фоне нуклеоплазмы ядра.
Непосредственно после гипотермии среднее число А^ОКз составило (1,2 ± 0,1) на 1 ядро. Средняя площадь А^ОКз составила (2,7 ± 0,2) мкм2 на 1 ядро. Средняя площадь 1 А§МОК.8 составила (2,1 ± 0,1) мкм2. Ядр/яд соотношение составило (0,11 ± 0,01) отн. ед.
Через 2 суток после проведения гипотермии среднее число А§МОК.8 составило (2,35 ± 0,1) на 1 ядро. Средняя площадь А§МОК.8 составила (5,6 ± 0,2) мкм2 на 1 ядро. Средняя площадь 1 А§МОК.8 составила (2,2 ± 0,1) мкм2. Ядр/яд соотношение составило (0,15 ± 0,004) отн. ед.
Через 7 суток после проведения гипотермии среднее число А§МОК.8 составило (3,4 ± 0,1) на 1 ядро. Средняя площадь А§МОК.8 составила (8,7 ± 0,2) мкм2 на 1 ядро. Средняя площадь 1 А§МОК.8 составила (2,6 ± 0,1) мкм2. Ядр/яд соотношение составило (0,16 ± 0,004) отн. ед.
Через 14 суток после гипотермии среднее число А^ОКз составило (2,0 ± 0,1) на 1 ядро. Средняя площадь А^ОКз составила (4,2 ± 0,2) мкм2 на 1 ядро. Средняя площадь 1 А§МОК.8 составила (2,1 ± 0,1) мкм2. Ядр/яд соотношение составило (0,11 ± 0,004) отн. ед.
ВЫВОДЫ
Результаты проведенного исследования показали, что холодовой стресс оказывал выраженное воздействие на активность ядрышкового аппарата клеток печени экспериментальных животных. Непосредственно сразу после воздействия гипотермии в гепатоцитах отмечали низкую морфофункциональную активность нуклеолярного аппарата, что может быть связано с повреждающим действием холодового фактора. Далее, на 2-й день эксперимента (начальный период адаптации) наблюдали возрастание морфофункциональной активности нуклеол, что сопровождалось образованием новых ядрышек. На 7-й день (в период адаптации) количественные и морфометриче-ские параметры А§МОК.8 были наиболее высоки, что являлось следствием гипертрофии ядрышек и затем на 14-й день эксперимента активность ядрышковых организаторов значительно уменьшалась и приходила к норме. Таким образом, ядрышковый аппарат печеночных клеток подвергается повреждению при холодовом воздействии, но в постгипотермическом периоде возникают адаптивные компенсаторно-приспособительные процессы, которые характеризуются гипертрофией и амплификацией нуклеол, что приводит к нормализации рибосомного синтеза и регенерации гепатоцитов.
ИССЛЕДОВАНИЕ ПЛОИДНОСТИ ЯДЕР КЛЕТОК ПЕЧЕНИ БЕЛЫХ КРЫС ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ЭКПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ГИПОТЕРМИИ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СРЕДЫ ОХЛАЖДЕНИЯ_
Н. Г. Крючкова, И. П. Бобров, А. В. Лепилов, А. Ю. Долгатов, З. Н. Гулдаева, О. В. Орлова, Е. Е. Алымова, М. Н. Соседова
Кафедра судебной медицины им. проф. В. Н. Крюкова и патологической анатомии с курсом ДПО ФГБОУ ВО АГМУ Барнаул Материал посвящен исследованию плоидности гепатоцитов печени белых крыс при воздействии глубокой иммерсионной и умеренной воздушной гипотермии в эксперименте. Проведен анализ индекса
