CC BY
69
Вестник ДВО РАН. 2007. № 6
А.В.СОКОЛОВ, М.Ю.ФЛЕЙШМАН, Е.Н. САЗОНОВА
Олигопептиды с опиоидной активностью и повышение эффективности искусственного воспроизводства амурских осетровых рыб
Изучены возможности применения биологически активных веществ для оптимизации искусственного воспроизводства осетровых рыб, а также влияние синтетических олигопептидов с опиоидной активностью при однократной обработке развивающейся икры на соматометрические показатели предличинок амурского осетра (Acipenser screnckii), состояние пластической функции жизненно важных органов и устойчивость молоди к острому воздействию токсических веществ. Результаты эксперимента показывают повышение у подопытной молоди массы и длины тела, улучшение состояния клеток жизненно важных органов и большую устойчивость к острым токсическим воздействиям. В целом после обработки молодь лучше адаптирована к неблагоприятным факторам среды и более подготовлена к выпуску в естественные условия.
Application of oligopeptides with opioidic action in artificial propagation of Amur basin sturgeons.
A.V.SOKOLOV (The Institute of Aquatic and Ecological Problems FEBRAS, Khabarovsk), M.Yu.FLEYSHMANN, E.N.SAZONOVA (Far Eastern State Medical University, Vladivostok).
The work is devoted to the survey of possibility to use biologically active substances for optimization of artificial propagation of sturgeons in the Amur basin. The effect of synthetic oligopeptids with opioidic action on somatometric indices of Acipenser shcrenckii juveniles under the condition of a single cultivation of developing eggs is investigated. Status of the plastic function of the most important organs as well as stability of juveniles to the hard effect of toxic substances is examined. The results of this experiment show the increase of weight and length of the studied juveniles, improvement of cell status in the most important organs and the great stability to the hard toxic influence. On the whole, after treatment juveniles are better adapted to unfavorable environmental factors and better prepared to be released to the natural conditions.
В бассейне Амура обитают многие ценные виды рыб, некоторые из них стали редкими или находятся на грани исчезновения, в том числе представители семейства осетровые - амурский осетр и калуга. В настоящее время их промысел невозможен [6, 18, 20]: так, в 1997 г. численность амурского осетра в возрасте более 2 лет составила лишь 95 000 особей (в нижней части бассейна Амура) [2, 19]. Причиной этого являются антропогенные воздействия, в особенности бесконтрольный браконьерский вылов и разрушение среды обитания [12]. Положение осложняется высокой требовательностью осетровых рыб к качеству окружающей среды и поздним наступлением половозрелости [4, 12, 14]. Поэтому, чтобы восстановить численность амурского осетра и калуги, необходимо их искусственное воспроизводство [6].
На сегодняшний день воспроизводством занимаются лишь несколько предприятий, влияние которых на пополнение запасов незначительно [14]. Существующая технология рыбоводства далека от совершенства [6, 11]. Кроме того, искусственное воспроизводство невыгодно отличается от естественного невозможностью полностью воссоздать
СОКОЛОВ Антон Викторович (Институт водных и экологических проблем ДВО РАН, Хабаровск), ФЛЕЙШ-МАН Марина Юрьевна - кандидат медицинских наук, САЗОНОВА Елена Николаевна - кандидат медицинских наук (Дальневосточный государственный медицинский университет, Хабаровск).
необходимые условия. Выпускаемая молодь характеризуется невысокой жизнестойкостью и плохо подготовлена к жизни в естественных условиях [11, 14, 15]. Этим обусловлена необходимость оптимизации рыбоводного процесса с помощью применения различных биологически активных препаратов.
В настоящее время накоплен опыт по использованию ряда веществ в рыбоводстве: пара-аминобензойная кислота, эпибрассинолид [5], различные гормоны [3, 16] и нейропептиды [11]. Так, при обработке оплодотворенной икры эпибрассинолидом уменьшается отход при инкубации и повышается устойчивость молоди к неблагоприятным условиям [5].
Особый интерес представляют регуляторные опиоидные пептиды. Эти соединения в очень малых дозах оказывают долговременное влияние на различные функции организма. В то же время каких-либо побочных эффектов на организм пока не отмечено. Так, исследованиями Т.И.Лаптевой с соавторами [7], а позднее Е.В.Микодиной [9] показано положительное влияние пептида даларгина и его аналогов на развитие молоди и даже на увеличение плодовитости радужной форели. Все это делает регуляторные пептиды очень перспективными для использования в воспроизводстве ценных видов рыб. Однако вопрос о влиянии данных соединений на развитие амурского осетра в литературе не освещен.
Одними из представителей опиоидных пептидов являются синтетические пептиды с условными названиями 8 и 8' (безаргининовый аналог пептида 8) [13, 15]. Имеются многочисленные биологические и экономические предпосылки к возможности использования этих пептидов в воспроизводстве амурского осетра и других осетровых рыб [13, 15].
Целью настоящей работы было изучение влияния регуляторных пептидов 8 и 8' на рост, развитие и устойчивость молоди амурского осетра к воздействию неблагоприятных условий (в том числе к загрязнению воды). В предыдущих наших работах изучено влияние обработки развивающейся оплодотворенной икры пептидами 8 и 8' на динамику и успешность выклева предличинок амурского осетра, соматометрические показатели и морфометрические параметры жизненно важных органов [13, 15]. В настоящем исследовании перед нами стояли следующие задачи.
1. Измерение соматометрических показателей (длина тела, масса) молоди из подопытных и контрольных групп в течение периода подращивания до возраста 45 сут (до момента выпуска).
2. Расчет коэффициентов упитанности молоди экспериментальных групп за рассмотренный период.
3. Изучение морфометрических показателей (количество ядрышек в ядре, площадь ядра и ядрышек) клеток печени молоди исследуемых групп.
4. Определение смертности и выживаемости молоди исследуемых групп в растворах модельных токсикантов с летальной концентрацией.
Исследования проводились на икре и молоди амурского осетра, выращенной в производственно-экспериментальном цехе по воспроизводству осетровых рыболовецкого колхоза «Новоамурский» (Хабаровск). Обработка материала осуществлялась в Центральной научно-исследовательской лаборатории Дальневосточного государственного медицинского университета. Эмбрионы обрабатывали растворами пептидов с концентрацией 100 мкг/л в фазе гидратации (через 30 мин после оплодотворения) в ваннах при постоянном вертикальном перемещении инкубационных контейнеров в течение 1 ч. Одновременно инкубировали контрольный образец без добавления пептидов. Контейнеры с икрой подопытных и контрольных групп после обработки помещали в инкубационный аппарат «Осетр». Все образцы икры были получены от одной самки. После выклева предличинок подращивали по 2500 особей в бассейнах емкостью 0,4 м3.
Соматометрические показатели. Для оценки гармоничности соматического развития вычисляли относительную упитанность особей исследуемых групп по методу А.В .Морозова и К.П. Дубровской [10]. Зависимость массы тела от линейных размеров
приводили в соответствие с уравнением т = а V’, где т - масса тела, мг; Ь - полная длина тела, мм. Относительную упитанность рассчитывали как отношение эмпирической (измеренной) массы к теоретической, полученной из уравнения.
Измерения проводили в течение 48 сут с момента выклева и до выпуска в естественные условия. В одной пробе анализировали по 30 особей из каждой группы. В постэм-бриональном развитии предличинок и мальков, обработанных растворами пептидов, не наблюдалось каких-либо отклонений от нормы. Активность движений и поведенческие реакции также не отличались от контрольных параметров. На протяжении периода наблюдения каких-либо негативных отклонений соматометрических показателей у подопытных особей зарегистрировано не было. Более того, можно говорить о некоторых элементах ускоренного развития у мальков подопытных групп (табл. 1).
Таблица 1
Сравнение соматометрических показателей исследуемых групп молоди амурского осетра
Вариант Возраст, сут
12 18 21 27 31 39 48
Пептид 8 21,6 ± 0,3 27,9 ± 0,6 31,5 ± 1,2 38,1 ± 0,7** 42,9 ± 1,5** 54,2 ± 1,7 87,8 ± 2,6**
49,7 ± 2,3** 103,0 ± 6,4** 158,8 ± 20,4* 268,8 ± 14,5** 403,1 ± 44,2** 749,9 ± 61,4 2957,0 ± 208,4**
Пептид 8' 22,1 ± 0,4 26,9 ± 0,5 30,4 ± 0,9 38,1 ± 1,1** 41,6 ± 1,3** 53,0 ± 1,7 85,8 ± 2,4
46,3 ± 2,1 86,9 ± 5,1 135,5 ± 11,4 284,8 ± 27,5** 356,1 ± 37,1** 709,9 ± 64,1 2760,6 ± 179,7**
Контроль 21,6 ± 0,3 26,7 ± 0,4 29,1 ± 1,1 34,2 ± 0,7 37,9 ± 1,1 52,3 ± 1,6 78,8 ± 2,9
41,8 ± 1,4 77,6 ± 4,0 116,3 ± 11,1 191,9 ± 10,9 266,1 ± 22,2 656,2 ± 53,2 2167,4 ± 181,06
Здесь и в табл. 3, 4:
* 0,05 < р < 0,1; ** различия достоверны при р < 0,05.
Примечание. В числителе - длина тела, мм; в знаменателе - масса тела, мг.
В группе, обработанной пептидом 8, наблюдалось статистически достоверное увеличение средней длины тела особей по сравнению с контролем в трех случаях измерений из семи, а достоверное увеличение массы - в пяти случаях. В группе, обработанной без-аргининовым аналогом, статистически достоверное увеличение длины по сравнению с контролем зарегистрировано в двух случаях, а массы тела - в трех.
Таким образом, обработка икры амурского осетра растворами исследуемых пептидов не вызывает негативных отклонений в последующие 1,5 мес жизни, и даже имеют место некоторые признаки ускоренного развития. Стимулирующее влияние пептида 8 выражено сильнее, чем 8'.
Уравнение зависимости массы от длины тела молоди осетровых в возрастном интервале от выклева до 50 сут имеет вид т = 0,003861 V3 045. По этому уравнению рассчитывали теоретическое значение массы тела во всех исследуемых группах, которое использовали для вычисления относительной упитанности. Результаты вычислений приведены в табл. 2.
Согласно расчетам, несмотря на увеличение длины и массы тела, статистически достоверных различий по коэффициентам упитанности между исследуемыми группами молоди не зарегистрировано. Это показывает, что накопление массы тела происходит в пределах физиологической нормы, и даже при некотором ускорении роста у предличинок и мальков подопытных групп в первые 1,5 мес жизни гармоничность роста и развития сохраняется, а отклонения в сторону каких-либо алиментарных нарушений (ожирения или дистрофии) отсутствуют.
Морфометрические показатели. Исследуя ядрышковый организатор, можно оценить влияние регуляторных пептидов на обменные процессы, поскольку количество ядрышек косвенно отражает уровень синтеза белка в ткани [8]. Например, изучение ядрышкового
Сравнения относительных упитанностей исследуемых групп молоди амурского осетра
Вариант Возраст, сут
12 18 21 27 31 39 48
Пептид S 44,7 1,11 97,4 1,06 140,6 1,13 251,5 1,07 361,0 1,12 735,7 1,02 3196,2 0,93
Пептид S' 47,9 0,98 87,2 1,00 126,5 1,07 251,5 1,13 328,7 1,08 687,3 1,03 2979,7 0,93
Контроль 44,7 0,94 85,2 0,91 110,7 1,05 181,5 1,06 247,5 1,07 660,0 0,99 2299,4 0,94
Примечание. В числителе - теоретическая масса тела, мг, в знаменателе - относительная упитанность (по А.В.Морозову и К.П.Дубровской [10]).
организатора в гепатоцитах позволяет сделать выводы о пластической функции печени и, следовательно, о состоянии организма в целом [1, 8, 17]. Исследования были проведены по методике, описанной в [8], на 31- и 45-суточных особях. Выбранный возраст определялся тем, что к этому времени у мальков уже сформированы все системы органов [4]. Кроме того, к возрасту 45 сут молодь достигает нормативной массы для выпуска в естественные условия обитания. Забор осуществлялся согласно вариантам опыта.
Для окрашивания ядрышек в срезах печени использовалось коллоидное серебро. Серебро импрегнирует в клетках специфические классы аргентофильных протеинов (в частности, нуклеолин), которые имеют непосредственное отношение к транскрипции в клетках прерибосомной РНК и к биогенезу рибосом. Это позволяет изучить пластическую функцию гепатоцитов. Содержание гранул серебра в ядрышках соответствует количеству работающих в них РНК-полимераз I. Под микроскопом ядрышки окрашиваются в темнокоричневый цвет на фоне светло-коричневых ядер [8, 17]. Подсчет числа ядрышек в ядрах гепатоцитов, измерение площади ядер и ядрышек проводили с помощью компьютерной системы тонкой микроскопии «МеКоС-Ц» в ЦНИЛ ДВГМУ Всего изучено по 25 особей в каждой группе. В препарате печени от каждой особи анализировали по 50 ядер.
При визуальном осмотре препаратов печени под микроскопом (ув. 600) качественные различия между вариантами опыта не обнаружены (табл. 3), что указывает на отсутствие кардинальных патологических изменений в строении ткани. Результаты морфометрических исследований представлены в табл. 3.
Таблица 3
Морфометрические показатели (min / max / среднее) печени исследуемых групп молоди амурского осетра
Вариант Площадь ядра, мкм2 Площадь ядрышек, мкм2 Количество ядрышек
31 сут
Контроль S 34,21 / 46,11 / 40,05 ± 1,304 3,85 / 6,44 / 4,98 ± 0,235 2 / 4 / 3,04 ± 0,054 7 45 / 11 28 / 10 07** ± 50,24 / 62,91 / 57,47** ± 1,139 ’ 0373 3 / 6 / 4,25** ± 0,043
45 сут
Контроль S S' 39,08 / 57,25 / 47,31 ± 2,11 4,97 / 8,59 / 6,19 ± 0,407 2 / 3 / 2,45 ± 0,057 44,83 / 72,63 / 59,02** ± 2,94 7,29 / 9,1 / 8,22** ± 0,204 3 / 5 / 3,43** ± 0,105 48,52 / 72,62 / 54,03* ± 2,849 7,03 / 8,82 / 8,046** ± 0,213 2 / 5 / 3,506** ± 0,021
В возрасте 31 сут среднее количество ядрышек на 1 ядро в гепатоцитах подопытной группы, обработанной пептидом 8, статистически достоверно увеличено по сравнению с контролем. Кроме того, наблюдаются достоверные отличия от контроля по средней площади ядрышек в ядре. Площадь ядер и ядрышек в варианте «8» достоверно больше, чем в контроле.
В возрасте 45 сут среднее количество ядрышек на 1 ядро в гепатоцитах обеих подопытных групп статистически достоверно увеличено по сравнению с контролем. Кроме того, наблюдаются достоверные отличия обработанных пептидами вариантов от контроля по средней площади ядрышек в ядре. Площадь ядер в варианте 8 достоверно больше, чем в контроле, а в варианте 8' имеется статистическая тенденция к увеличению.
На основании этих данных можно сделать выводы о повышении уровня активности синтеза белка в клетках печени молоди амурского осетра при обработке регуляторными пептидами на ранних стадиях развития. Это свидетельствует о повышении функциональных резервов печени подопытных осетров и косвенно указывает на повышение уровня пластического обмена организма в целом. Кроме того, развитие печени влияет на устойчивость молоди к неблагоприятным условиям содержания (и в первую очередь - к токсическим воздействиям) [1, 13]. Изменение морфометрических показателей в сторону уменьшения наблюдаются при неблагоприятных воздействиях (гипоксия, отравление, температурный стресс и т. д.). Улучшение условий роста организма на ранних этапах онтогенеза способствует активации ядрышкового аппарата [1, 17], и увеличение средних значений упомянутых показателей у обработанной молоди свидетельствует о повышении ее устойчивости к неблагоприятным воздействиям.
В более раннем возрасте (31 сут) показатели количества ядрышек в ядре, площади ядер и ядрышек выше, чем в более позднем (45 сут). Это связано с тем, что в более ранние периоды развития пластические процессы в организме и отдельных органах идут более интенсивно [1]. В то же время и в этом возрасте существуют достоверные различия по морфометрическим показателям гепатоцитов между подопытными группами и контролем, что указывает на наличие эффекта регуляторных пептидов в разных возрастах.
Таким образом, изучение морфометрических показателей клеток печени молоди исследуемых групп показало, что однократная обработка икры раствором регуляторных пептидов вызвала достоверное увеличение числа ядрышек в ядре, а в случае пептида 8 - также площади ядра и ядрышек. Это свидетельствует об активации процессов синтеза РНК и белка в гепатоцитах. Выявленные изменения предполагают лучшую подготовленность мальков подопытных групп к выпуску в естественные условия. Стимулирующее влияние пептида 8 выражено сильнее, чем у его безаргининового аналога.
Смертность и выживаемость. Для оценки устойчивости к острым токсическим воздействиям использовали выдерживание в растворах модельных токсикантов 2п804. №2Сг04. В 2п804 токсичен катион, а в №2Сг04 - анион. В растворах для выдерживания рыб создавали такую концентрацию токсикантов, при которой гибель всех особей достигалась в течение не более 4 ч (№2Сг04 - 0,6 г/л, 2п804 - 0,2 г/л), чтобы исключить влияние других факторов (гипоксия, накопление продуктов обмена). Растворы токсикантов вливали в аквариумы емкостью 10 л (каждое вещество - в 3 аквариума, согласно вариантам опыта), затем туда одновременно подсаживали по 20 31-суточных особей амурского осетра. Воду в каждом аквариуме непрерывно аэрировали с помощью компрессоров одинаковой мощности. Через одинаковые промежутки времени (20') во всех аквариумах подсчитывали количество погибших особей. Гибель диагностировали не по отсутствию движений тела, а по остановке сердца (у молоди сердце хорошо просматривается сквозь стенку тела). Определяли следующие показатели: время гибели первой особи (Т0), время гибели половины особей (Т50), время гибели всех особей (Т100) и среднее время жизни особей в растворе модельного токсиканта (Т) (табл. 4).
Выживаемость молоди осетра (мин) в растворах ZnSO4 и Na2CrO4
Статистическую обработку данных осуществляли с помощью программы 81а118Йса 5.0. Различия между группами считали достоверными при р < 0,05. При 0,05 < р < 0,1 отмечали статистическую тенденцию к появлению различий.
Гибель молоди обеих подопытных групп в растворах как сульфата цинка, так и хромата калия начинается как минимум на 30' позже, чем у особей контрольной группы. 50 и 100% рыб погибает в обработанных группах также существенно позднее, чем в контроле. Среднее время выживания особей подопытных групп превышает этот показатель как минимум на 24' в растворе 2п804 и не менее чем на 29' в растворе №2Сг04, и эти различия статистически достоверны. Следовательно, молодь, обработанная растворами регуляторных пептидов, в воде, загрязненной летальными дозами модельных токсикантов, выживает дольше, чем необработанная. Это свидетельствует о повышении устойчивости организма к острым токсическим воздействиям. Молодь, обработанная растворами пептидов, очевидно, более подготовлена к выпуску в естественные условия, так как устойчивее к залповым выбросам загрязняющих веществ, чем необработанная. Пептид 8 в целом оказывает более сильное стимулирующее влияние, чем 8'.
Результаты настоящего исследования свидетельствуют о позитивном влиянии пептида 8 и его безаргининового аналога на развитие молоди амурского осетра в первые 1,5 мес жизни. Однократная обработка оплодотворенной икры в растворе данных пептидов в течение 1 ч привела к некоторому ускорению соматического развития по сравнению с особями контрольной группы: увеличению длины и массы тела. Данный факт можно интерпретировать как косвенное свидетельство повышения устойчивости обработанной молоди к неоптимальным условиям выращивания. Увеличение массы и длины тела происходит пропорционально, гармонично, что выражается в отсутствии различий по показателю относительной упитанности в исследуемых группах.
Морфометрическое изучение клеток печени исследуемой молоди в возрасте 45 сут выявляет достоверное увеличение количества и площади ядрышек, а также площади ядер в группе, обработанной пептидом 8, и количества ядрышек в группе, обработанной его безаргининовым аналогом, по сравнению с контролем. Это свидетельствует об усилении пластической функции рассматриваемых органов и организма в целом. Данные изменения предполагают лучшую подготовленность подопытных мальков к выпуску в естественные условия. Различия между исследуемыми группами по морфометрическим показателям имеются и в более раннем возрасте (за 14 суток до выпуска).
В растворах модельных токсикантов обработанная молодь в среднем выживает достоверно дольше, чем необработанная. Это указывает на повышение устойчивости особей
подопытных групп к воздействию неблагоприятных факторов среды, в том числе загрязненной воды (особенно при залповых выбросах поллютантов). В целом стимулирующий эффект пептида S выражен несколько сильнее, чем у его безаргининового аналога.
Таким образом, однократная инкубация оплодотворенной икры в растворе исследуемых пептидов оказывает существенное позитивное воздействие на эмбриональный и пост-эмбриональный онтогенез и улучшает подготовленность молоди к выпуску в естественные условия за счет повышения устойчивости к неблагоприятным факторам.
ЛИТЕРАТУРА
1. Архипчук С. В. Морфология ядрышек в эмбриогенезе карповых рыб // Цитология. 1996. № 3. С. 325-335.
2. Атлас пресноводных рыб России: в 2 т. / под ред. Ю.С.Решетникова. М.: Наука, 2003. Т. 1. 379 с.
3. Глубоков А.И. Некоторые нейрофизиологические предпосылки использования биологически активных веществ и факторов для стимуляции созревания рыб // Биологически активные вещества и факторы в аквакультуре. М.: ВНИРО, 1993. С. 3-26.
4. Детлаф ТА., Гинзбург А.С., Шмальгаузен О.И. Развитие осетровых рыб. М.: Наука, 1981. 224 с.
5. Егоров М. А. Морфофизиологические эффекты фитогормона эпибрассинолида на позвоночных животных в раннем онтогенезе // Изв. Самар. науч. центра РАН. 2003. Вып. 5, № 2. С. 355-362.
6. Иванов С.А., Литовченко Ж.С., Кошелев В Н. Искусственное воспроизводство осетровых рыб как способ сохранения и увеличения их запасов // Четвертые Гродековские чтения: материалы регион. науч.-практ. конф. Хабаровск: ХККМ им. Гродекова, 2004. С. 290-293.
7. Лаптева Т.И., Микодина Е.В., Фомина Г.Г., Филиппович Ю.Б. Влияние синтетического аналога лей-эн-кефалина даларгина на содержание белка и нуклеиновых кислот в мышцах радужной форели // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1989. № 4. С. 473-476.
8. Мамаев Н.Н., Ковалева О.В., Аминева Х.К. Оценка пластической функции кардиомиоцитов методом серебрения ядрышек у оперируемых больных ишемической болезнью сердца // Архив патологии. 1993. № 3. С. 42-45.
9. Микодина Е.В. Физиолого-биохимические основы регуляции функций у рыб пептидами энкефалинового ряда: автореф. дис. ... д-ра биол. наук. М.: Изд-во ВНИИРХ, 1999. 65 с.
10. Морозов А.В., Дубровская К.П. О коэффициенте упитанности рыб // Зоол. журн. 1951. № 3. С. 267-273.
11. Никоноров С.И., Витвицкая Л.В. Эколого-генетические проблемы воспроизводства осетровых и лососевых рыб. М.: Наука, 1993. 254 с.
12. Новомодный Г.В., Золотухин С.Ф., Шаров П.О. Рыбы Амура: богатство и кризис. Владивосток: Апельсин, 2004. 64 с.
13. Соколов А.В., Флейшман М.Ю., Сазонова Е.Н. Влияние регуляторных пептидов на состояние клеток печени молоди амурского осетра (Acipenser schrenckii) // Природные ресурсы Хабаровского края: проблемы науки и образования: материалы межрегион. науч.-практ. конф. Хабаровск: Изд-во ХГПУ, 2004. С. 115-119.
14. Соколов А.В. К проблеме сохранения и восстановления запасов осетровых бассейна Амура // Материалы междунар. науч. чтений «Приморские зори-2005», посвященные 10-летию со дня образования ТАНЭБ. Владивосток: Изд-во ТАНЭБ, 2005. С. 183-187.
15. Соколов А. В. Разработка методов оптимизации искусственного воспроизводства осетровых бассейна Амура // Наука - Хабаровскому краю: материалы VII краевого конкурса молодых ученых и аспирантов. Хабаровск: Изд-во ХГТУ, 2005. С. 33-44.
16. Тренклер И. В., Семенкова Т. Б. Гормональная регуляция роста рыб в аквакультуре // Гидробиол. журн. 1990. Т. 26, № 2. С. 49-59.
17. Штейн Г.И., Кудрявцева М.В., Кудрявцев Б.Н. Изменение морфометрических параметров окрашенных серебром ядрышек гепатоцитов крыс при циррозе печени и в процессе ее реабилитации // Цитология. 1999. № 7. С. 574-579.
18. Billard R., Lecointre G. Biology and conservation of sturgeon and paddlefish // Rev. in Fish Biol. and Fisheries. 2001. Vol. 10. P. 355-392.
19. Krychtin M.L., Svirskiy V.G. Endemic sturgeons of Amur river: kaluga, Huso dauricus, and Amur sturgeon, Acipenser schrenckii // Envir. Biol. of Fishes. 1997. Vol. 48. P 231-239.
20. Wei Q., Ke F., Zhang J. et al. Biology, fisheries and conservation of sturgeons and paddlefish in China // Envir. Biol. of Fishes. 1997. Vol. 48. P. 241-255.
