CC BY
29
№4(86). Ch.1. - P.174-177. (in Russian)
3. Banzaraksheev V.G., Azhunova T.A. Pharmacotherapeutic efficacy of plant remedy in experimental dislilipoproteinemiya. -Ulan-Ude, 2011. - 132 p. (in Russian)
4. Dyban A.P. Appliances teratological experiments on mammals // Methods of developmental biology. - Moscow, 1974. - P.299-313. (in Russian)
5. Majboroda A.A., Kalyagin A.N., Zobnin Yu.V., Scherbatikh A.V. Modern approaches to preparation of original article for scientific journal of the medical and biologic orientation in a view of the concept «Evidence-Based Medicine» // Sibirskij Medicinskij
Zurnal (Irkutsk). - 2008. - Vol. 76. №1. - P.5-8. (in Russian)
6. Nagaslaeva O.V., Banzaraksheev V.G., Nikolaeva G.G. Justification of multi-component plant composition for the development of medicinal remedy with hypolipidemic effect // Vestnik Buryatskogo gosudarstvennogo universiteta. Seriya meditsina i farmatsiya. - 2014. - Vol. 12. - P.138-142. (in Russian)
7. Manual on the experimental (pre-clinical) study of new pharmacological substances / Ed. R.W. Habriev. - Moscow, 2005.
- 832 p. (in Russian)
8. Chzhud-shi. Kanon tibetskoy meditsiny. - Moscow, 2001.
- 780 p. (in Russian)
Информация об авторах:
Разуваева Янина Геннадьевна - старший научный сотрудник, д.б.н., 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6, ИОЭБ СО РАН, ОБАВ, тел. (3012) 433463, e-mail: tatur75@mail.ru; Николаев Сергей Матвеевич - д.м.н., профессор; Аюшеева Виктория Валерьевна - ведущий инженер; Верлан Надежда Вадимовна; Убеева Ираида Поликарповна - д.м.н., профессор - д.м.н., профессор; Дымшеева Лариса Доржиевна - к.м.н., доцент.
Information About the Authors:
Razuvaeva Yanina G. - PhD, DSc (Biology), scientific researcher, 670047, Russia, Ulan-Ude, Sakhiyanova str. 6, tel. (3012) 433463, fax (3012) 433034, E-mail: tatur75@mail.ru; Nikolaev Sergey M. - MD, PhD, DSc, professor; Ajusheeva Viktoriya V. - Lead Engineer; Verlan Nadezhda V. - MD, PhD, DSc, professor; Ubeeva Iraida P. - MD, PhD, DSc,
professor; Dymsheeva Larisa D. - PhD, associate professor.
© НИКОЛАЕВ С.М., РАЗУВАЕВА Я.Г., УБЕЕВА И.П., ВЕРЛАН Н.В., ДЫМШЕЕВА Л.Д., ЦЫБАНОВ К.Ц. - 2015 УДК 615.322
морфофункциональная оценка фармакотерапевтической эффективности комплексного растительного средства при экспериментальном энтероколите
Сергей Матвеевич Николаев1,2,3, Янина Геннадьевна Разуваева1,3, Ираида Поликарповна Убеева2,3, Надежда Вадимовна Верлан2, Лариса Доржиевна Дымшеева3, Ким Цыбанович Цыбанов1
('Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, г. Улан-Удэ, директор - д.б.н., проф. Л.Л. Убугунов;
2Иркутская государственная медицинская академия последипломного образования, г. Иркутск, ректор - д.м.н., проф. В.В. Шпрах, кафедра клинической фармакологии, зав. - д.м.н., проф. Н.В. Верлан; 3Бурятский государственный университет, Улан-Удэ, и.о. ректора - д.т.н., проф. Н.И. Мошкин, Медицинский институт,
директор - д.м.н., проф. В.Е. Хитрихеев)
Резюме. Изучено влияние растительного средства «Фитокол» на морфофункциональное состояние кишечника при индометациновом энтероколите. Эксперименты проведены на 25 белых крысах линии Wistar. Установлено, что «Фитокол» способствует нормализации структурно-функциональной целостности слизистой оболочки кишечника, ограничивая дистрофические и некротические процессы, выраженность воспалительной реакции и повышая репара-тивные процессы на фоне индометацинового энтероколита.
Ключевые слова: энтероколит, растительное средство «Фитокол».
morphofunctional assessment of pharmacotherapeutic efficacy of complex plant remedy in experimental enterocolitis
S.M. Nikolaev1,2,3, Ya.G. Razuvaeva1,3, I.P. Ubeeva2,3, N.V. Verlan2, L.D. Dymsheeva3, K.Ts. Tsybanov1 ('Institute of General and Experimental Biology SB RAS; 2Irkutsk State Medical Academy of Continuing Education;
3Buryat State University, Russia)
Summary. The paper deals with the influence of multicomponent vegetable remedy «Phytocol» on morphofunctional condition of the intestine in white rats in enterocolitis induced by indomatacin. The experiments were conducted on 25 rats (line Wistar). It was found that «Phytocol» contributes to the normalization of structural and functional integrity of the intestinal mucosa, limiting degenerative and necrotic processes, the severity of the inflammatory response and increasing the reparative processes in the intestinal mucosa in enterocolitis induced by indometacin.
Key words: enterocolitis induced by indomatacin, vegetable remedy «Phytocol».
В настоящее время осложнения со стороны желудочно-кишечного тракта наравне с кожными проявлениями и изменениями состояния сердечно-сосудистой системы преобладают среди клинических проявлений неблагоприятных побочных реакций на медикаментозную терапию [3]. Функциональные нарушения кишечника могут быть обусловлены применением различных лекарственных средств: антибактериальные препараты, нестероидные противовоспалительные средства, цитостатики и др. [2,10,13]. Перспективными для разработки методов фармакологической коррекции побочного действия лекарств являются средства растительного происхождения, отличающиеся широтой терапевтического действия, малой токсичностью и связанной с этим возможностью длительного применения
без риска возникновения побочных реакций [10].
На основе рецептуры тибетского препарата «Индра-4», применяющегося при «жаре толстой и тонкой кишки», геморрое, «вызванном желчью», поносе у детей [12], разработана растительная композиция, условно названная «Фитокол» [6]. В состав «Фитокола» входят черные листья Bergenia crassifolia (L.) Fritsch., цветки Matricaria chamomilla L., трава Achillea millefolium L. и листья Mentha piperita L. Способ получения экстракта сухого на основе данной растительной композиции защищен патентом [6]. В экспериментах на животных установлено, что экстракт «Фитокол» нетоксичен, в дозе 250 мг/кг проявляет анальгезирующее и противовоспалительное действие [1]. В исследованиях in vitro установлено его мем-браностабилизирующая и антиоксидантная активность [5].
Цель работы: морфофункциональная оценка влияния «Фитокола» на течение экспериментального энтероколита.
Материалы и методы
Исследования выполнены на 25 белых крысах линии обоего пола с исходной массой 180-200 г. Содержание животных соответствовало «Правилам лабораторной практики» (ОЬР) и Приказу МЗ РФ № 708Н от 23.08.2010 г. «Об утверждении правил лабораторной практики». Перед началом экспериментов животных, отвечающих критериям включения в эксперимент, распределяли на группы с учетом пола, возраста, массы и принципа рандомизации. Экспериментальную работу осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (приложение к приказу Минздрава
СССр №755 от 12.08.1977 п^ Примечание: * - здесь и далее различия статистически значимы между данными контрольной и «Правилами, принятыми в опытной групп при р < 0,05; п - количество животных в группе. Европейской конвенции по за-
ворсинок к глубине крипт у животных контрольной группы было в 2,2 раза ниже показателя интактных животных, что свидетельствует о нарушении функциональной активности тонкого кишечника (табл. 1).
Длительное введение индометацина животным приводило к развитию отека и воспалительной инфильтрации слизистой оболочки толстого кишечника, в результате чего складчатость у 7 из 8 животных контрольной группы отсутствовала. Дистрофическим и некротическим изменениям был подвержен как поверхностный эпителий, так и апикальные
Таблица 1
Влияние «Фитокола» на морфометрические показатели тонкого кишечника у белых крыс при энтероколите, вызванном введением индометацина
Показатели Группы животных
Интактная (вода), n=8 Контрольная (индометацин+ вода), n=8 Опытная (индометацин + «Фитокол»), n=9
Высота ворсинки, мм 1,720±0,102 0,835±0,076 1,222±0,074*
Ширина ворсинки, мм 0,157±0,002 0,202±0,007 0,172±0,003*
Глубина крипт, мм 0,374±0,008 0,389±0,053 0,34±0,013
Высота ворсинок / Высота крипт 4,6 : 1,0 2,1 : 1,0 3,7: 1,0
щите позвоночных животных (Страсбург, 1986).
Энтероколит вызывали введением животным индометацина в виде водной суспензии per os в дозе 35 мг/кг в течение 5 дней [4]. Животным опытной группы за 4 часа до введения индометацина ежедневно вводили per os водный раствор экстракта сухого «Фитокол» в дозе 250 мг/кг. Животные контрольной группы получали воду очищенную в эквивалентном объеме по аналогичной схеме. Через сутки после последнего введения индометацина животных декапитиро-вали под легким эфирным наркозом. Для проведения пато-морфологических исследований материал фиксировали в 10% нейтральном формалине, обезвоживали в спиртах восходящей концентрации и заливали в целлоидин-парафин. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином, а также азур-эозином [9]. Морфометрические исследования проводили с помощью компьютерной программы «Motic Images 2000». В тонком кишечнике определяли высоту и ширину ворсинок, высоту крипт; в толстом кишечнике - высоту складок и слизистой оболочки, объемную долю желез.
Значимость различий между указанными параметрами среди экспериментальных групп оценивали с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни. Различия считали существенными при р<0,05 [8].
Результаты и обсуждение
Результаты патоморфологических исследований показали, что на фоне введения индометацина в тонком кишечнике у белых крыс развиваются структурные изменения, характеризующиеся частичной, а в некоторых случаях субтотальной атрофией ворсинок и углублением крипт. Некротизированные ворсинки вместе с экссудатом десква-мировались в просвет кишечника. Высота ворсинок у животных контрольной группы в среднем была в 2 раза ниже таковой интактных животных. В строме сохранившихся ворсинок наблюдали микроциркуляторные нарушения, отек, интенсивную лейкоцитарную инфильтрацию, увеличение количества бокаловидных клеток, в результате чего ворсинки имели нехарактерный для них бокаловидный вид. Энтероциты, выстилающие ворсинки, были значительно уплощены, в них отмечали ка-риопикноз, кариолизис, утрату
щеточной каемки, что свидетельствует об уменьшении их абсорбционной функции. Криптальный слой слизистой оболочки тонкого кишечника также имел выраженные структурные изменения, характеризующиеся отеком, инфильтрацией межкриптального пространства. Соотношение длины
слои крипт. Некротизированный эпителий десквамировал-ся в просвет кишечника, в результате чего образовывались эрозии.
Использование «Фитокола» способствовало ограничению нарушений структурно-функциональной целостности кишечника белых крыс, вызванных введением индометаци-на. Так, у животных опытной группы в тонком кишечнике некротическим изменениям подвергались единичные ворсинки, большинство из которых имело пальцевидную форму. В сохранившихся ворсинках дистрофическим и некротическим изменениям подвергались лишь клетки поверхностного эпителия. Дистрофические энтероциты имели кубическую, а в единичных случаях - плоскую форму, гиперхром-ное ядро и менее четкую щеточную каемку, цитоплазма их была базофильной. Отмечали умеренные отек и клеточную инфильтрацию стромы ворсинок, полнокровие и стаз эритроцитов и лимфы в кровеносных и лимфатических сосудах соответственно. Данные морфометрических исследований показали (табл. 1), что у животных, получавших «Фитокол», длина ворсинок была на 47% выше, ширина ворсинок - на 15% ниже таковых контрольных животных. В криптальном слое тонкого кишечника животных опытной группы наблюдали умеренные отек и клеточную инфильтрацию межкрип-тального пространства. Соотношение длины ворсинок к глубине крипт у животных опытной группы было в 1,7 раз выше показателя в контроле.
У животных, получавших «Фитокол» на фоне введения индометацина, в слизистой оболочке толстого кишечника наблюдали сохранность складчатости, умеренный отек и воспалительный инфильтрат, ограничивающиеся ее пределами, в собственной пластинке - также полнокровие капилляров и диапедезные кровоизлияния. Некрозу и десквамации подвергался поверхностный эпителий и апикальные слой клеток крипт с образованием микроэрозий. На фоне введения испытуемого средства глубина эрозий была в 1,9 раза ниже та-
Таблица 2
Влияние «Фитокола» на морфометрические показатели толстого кишечника у белых крыс при энтероколите, вызванном введением индометацина
Показатели Группы животных
Интактная (вода), n=8 Контрольная (индометацин+ вода), n=8 Опытная (индометацин + «Фитокол»), n=9
Высота слизистой оболочки, мм 0,90±0,04 0,560±0,018 0,829±0,063*
Глубина эрозии, мм - 0,368±0,059 0,191±0,030*
Объем желез, % 79,1±2,34 47,0±1,42 67,0±0,75*
ковой животных контрольной группы (табл. 2). У животных опытной группы отмечали уменьшение количества бокаловидных клеток эпителия и повышение объемной доли желез на 30% по сравнению с контролем. В сохранившемся эпителии наблюдали признаки регенерации, проявляющиеся в увеличении ядер эпителиоцитов и появлении фигур митозов.
Таким образом, экстракт «Фитокол» способствует нормализации структурно-функциональной целостности слизистой оболочки кишечника, ограничивая дистрофические и некротические процессы, выраженность воспалительной реакции и повышая репаративные процессы на фоне ин-дометацинового энтероколита. Фармакотерапевтическая эффективность «Фитокола» обусловлена его противовоспалительной и антиоксидантной активностью [5,6] за счет широко спектра биологически активных веществ, содержащихся в его составе: каротиноиды, полифенолы, флавоноиды, антоцианы, полисахариды, аскорбиновая кислота, арбутин, тритерпеновые сапонины и др.[7].
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Прозрачность исследования. Исследование не имело спонсорской поддержки. Исследователи несут полную ответственность за предоставление окончательной версии рукописи в печать.
Декларация о финансовых и иных взаимодействиях. Все авторы принимали участие в разработке концепции и дизайна исследования и в написании рукописи. Окончательная версия рукописи была одобрена всеми авторами. Авторы не получали гонорар за исследование.
Работа поступила в редакцию: 18.05.2015 г.
ЛИТЕРАТУРА
1. Ажунова Т.А., Лубсандоржиева П.Б., Цыбанов К.Ц. Противовоспалительное, анальгезирующее действие растительного средства «Фитокол» // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2007. - Т. 72. №5. - С.90-92.
2. Арльт А.В., Савенко И.А., Сергиенко А.В., Ивашев М.Н. Побочные эффекты нестероидных противовоспалительных средств // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. - 2013. - №11-1. - С.17-18.
3. Верлан Н.В., Кочкина Е.О., Рыбалко М.В., Двойникова Н.А. Мониторинг безопасности лекарственных средств. -Иркутск, 2012. - 122 с.
4. Лоншакова К.С., Матафонов О.И. Морфологическая характеристика фармакотерапевтического влияния средств природного происхождения при энтероколите // Тибетская медицина. Состояние и перспективы исследований. - Улан-Удэ, 1994. - С.139-142.
5. Лубсандоржиева П.Б., Ажунова Т.А., Цыбанов К.Ц. Антиоксидантные свойства противовоспалительного сбора in vitro // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2006. - Т. 64. №6. - С.87-89.
6. Лубсандоржиева П.Б., Ажунова Т.А., Цыбанов К.Ц. Лекарственное растительное средство «Фитокол» // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2011. - Т. 77. №1. Ч.2. - С.148-151.
7. Лубсандоржиева П.Б., Ажунова Т.А., Цыбанов К.Ц.
Получение экстракта сухого из 4-компонентного сбора и содержание в нем биологически активных веществ // Химия растительного сырья. - 2008. - №1. - С.107-110.
8. Майборода А.А., Калягин А.Н., Зобнин Ю.В., Щербатых А.В. Современные подходы к подготовке оригинальной статьи в журнал медико-биологической направленности в свете концепции «доказательной медицины» // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2008. - Т. 76. №1. - С.5-8.
9. Микроскопическая техника: Руководство / Под ред. Д.С. Саркисова и Ю.Л. Перова. М., 1996. - 544 с.
10. Разуваева Я.Г., Николаев С.М., Бураева Л.Б., и др. Фитокоррекция структурных изменений желудочно-кишечного тракта, вызванных применением 6-меркапто-пурина // Антибиотики и химиотерапия. - 2009. - №9-10. -С.30-32.
11. Тюренков И.Н. Лекарственные поражения кишечника // Новые лекарства и новости фармакотерапии. - 2002. - №1.
- С.21-26.
12. Чжуд-ши. Канон тибетской медицины. - М.: Восточная литература, 2001. - 780 с.
13. Шевяков М.А. Антибиотик-ассоциированная диарея и кандидоз кишечника: возможности лечения и профилактики // Антибиотики и химиотерапия. - 2004. - Т. 49. №10.
- С.26-29.
REFERENCES
1. Azhunova T.A., Lubsandorzhieva P.B., Tsybanov K.Ts. Antibinflammatory, analgesic effects of the vegetative drug Phytocol // Sibirskij meditsinskij zurnal (Irkutsk). - 2007. - Vol. 72. №5. - P.90-92. (in Russian)
2. Arl't A.V., Savenko I.A., Sergienko A.V., Ivashev M.N. The side effects NSAIDs // Mezhdunarodnij Zhurnal prikladnikh I Fundamentalnikh issledovanij. - 2013. - №11-1. - P.17-18. (in Russian)
3. Verlan N.V., Kochkina E.O., Rybalko M.V., Dvoynikova N.A. Monitoring the safety of medicines. - Irkutsk, 2012. - 122 p. (in Russian)
4. Lonshakova K.S., Matafonov O.I. Morphological characteristics of the influence of pharmaceuticals of natural origin with the enterocolitis // Tibetskaya meditsina. Sostoyanie i perspektivy issledova-niy. - Ulan-Ude, 1994. - P.139-142. (in Russian)
5. Lubsandorzhieva P.B., Azhunova T.A., Tsybanov K.Ts. Antioxidant activity of anti-inflammatory plant drug-mixture in vitro // Sibirskij Meditsinskij Zurnal (Irkutsk). - 2006. - Vol. 64. №6. - P.87-89. (in Russian)
6. Lubsandorzhieva P.B., Azhunova T.A., Tsybanov K.Ts. Plant remedy Phytocol // Byulleten' VSNTs SO RAMN. - 2011. - Vol. 77. №1. Pt. 2. - P.148-151. (in Russian)
7. Lubsandorzhieva P.B., Azhunova T.A., Tsybanov K.Ts. Preparation of dry extract of 4-component collection and content of biologically active substances // Khimiya rastitel'nogo syr'ya. -2008. - №1. - P.107-110. (in Russian)
8. Majboroda A.A., Kalyagin A.N., Zobnin Yu.V., Scherbatikh A.V. Modern approaches to preparation of original article for scientific journal of the medical and biologic orientation in a view ofthe concept «Evidence-Based Medicine» // Sibirskij Meditsinskij Zurnal (Irkutsk). - 2008. - Vol. 76. №1. - P.5-8. (in Russian)
9. Microscopic equipment: manual / Ed. D.S. Sarkisov, Ju.L. Perova. - Moscow, 1996. - 544 p. (in Russian)
10. Razuvaeva Ya.G, Nikolaev S.M., Buraeva L.B., et al. Phytocorrection of Gastrointestinal Tract Structural Changes Caused by the Use of 6-Mercaptopurine // Antibiotiki i khimioterapiya. - 2009. - №9-10. - P.30-32. (in Russian)
11. TyurenkovI.N. Medicinal intestinal lesions // Novye lekarstva i novosti farmakoterapii. - 2002. - №1. - P.21-26. (in Russian)
12. Chzhud-shi. Kanon tibetskoy meditsiny. - Moscow, 2001. - 780 p. (in Russian)
13. Shevyakov M.A. Antibiotic-associated diarrhea and intestinal candidiasis: treatment options and prevention // Antibiotiki i khimioterapiya. - 2004. - Vol. 49. №10. - P.26-29. (in Russian)
Информация об авторах:
Николаев Сергей Матвеевич - д.м.н., профессор; Разуваева Янина Геннадьевна - старший научный сотрудник, д.б.н., 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6, ИОЭБ СО РАН, ОБАВ, тел. (3012) 433463, e-mail: tatur75@mail.ru; Убеева Ираида Поликарповна - д.м.н., профессор; Верлан Надежда Вадимовна - д.м.н., профессор; Дымшеева Лариса Доржиевна - к.м.н., доцент; Цыбанова Ким Цыбанович - аспирант. Information About the Authors: Nikolaev Sergey Matveevich - MD, PhD, DSc, professor, 670047, Ulan-Ude, Sakhiyanova str. 6, tel. (3012) 433463, fax (3012) 433034, E-mail: tatur75@mail.ru; Razuvaeva Yanina Gennadyevna - Doctor of biological science, scientific researcher; Ubeeva Iraida Polikarpovna - Doctor of medical science, professor; Verlan Nadezhda Vadimovna - Doctor of medical science, professor; Dymsheeva Larisa Dorzhievna - Ph.D., associate professor; Tsybanova Kim Tsybanovich - graduate student.
