CC BY
7
Проф. И. Е. МИНКЕВИЧ и Р. С. МОСТОВА.
Молочно-коагуляционный тест и сфера его
применения
Из Ленинградского научно-исследовательского санитарно-гигиенического института
Наиболее полно удовлетворяет следующая пропись среды (расчет на 1 л).
1. Среда одинарного состава (для посевов малых количеств воды от 10 см3 и меньше): молока снятого 100 см3 и 0,1.%« пеп-тонного раствора 900 см3.
2. Среда двойного состава {для посевов 100 см3 и более)г молока снятого 200 см3 и 0,2,°/» пептонного раствора 800 см3.
Одинарная среда заготовляется в пробирках по 5 см3 (для посевов 1 см3 воды и меньше) и в колбах по 50 ом3 (для посевов 10 см3 воды).
Среда двойной концентрации заготовляется в колбах по 100 см3 (для посевов воды по 100 см3).
Среда в многократно проверенных опытах ее приготовления неизменно не давала никаких следов коагуляции при обычной стерилизации в автоклаве (120° в течение 15—20 минут).
Таким образом, полностью составленная среда может подвергаться одномоментной стерилизации в автоклаве.
Проверка специфической чувствительности среды данной прописи на обнаружение В. coli была произведена в опытах с посевами на нее, на американский стандартный лактоза-бульон и на обычное молоко ряда чистых культур В. coli communae и серии образцов резко загрязненной канализационными стоками воды ленинградских каналов. Молоко и лактоза-бульон были взяты для сравнения как среды, содержащие лактозу, и в этом отношении принципиально равнозначные молочно-пеп-тонному раствору.
а) Опыты с чистыми культурами В. coli.
На косой агар посеяло 10 штаммов В. coli, свежевыделенных из-стула жителей Ленинграду 3. А. Игнатович. 'Микробы характеризуются несколько ослабленной активностью по отношению к лактозе, особенно штамм 59/2 (позднее свертывание молока).
24-часовые культуры смыты с агара стерильным физиологическим раствором, 5 см3 каждая культура. Одной и той же, отдельной для каждого штамма, пастеровской пипеткой внесено по одной капле микробной взвеси в каждую из взятых сред (все среды в пробирках, точно по 5 см® каждой среды).
Посевы помещены в термостат при 37°; через каждый час производился просмотр посевов «а протяжении первых 24 часов наблюдения и затем дополнительно через 48 часов. Результаты описанного опыта представлены в табл. 1 (стр. 34).
Первые положительные результаты отмечены на молочно-<пептонной среде (коагуляция) в большинстве случаев уже через 8 часов, а на американском лактоза-бульоне (газ)—через 16 часов. Коагуляция обычного молока еще не наступила через 27 часов и была зарегистрирована только при окончательном просмотре посевов через 48 часов.
Таким образом, в опытах с чистыми культурами кишечной палочки первое место по чувствительности заняла наша среда, которая по срокам наступления на ней индикаторного изменения (коагуляция) вдвое превосходит лактоз а-бульон американцев, не говоря уже об обычном молоке, которое остается далеко позади.
Время наступления положительной реакции
в часах
Штаммы В.
coli communae молочно-пеп- американская молоко (коа-
тонная среда лактоза-бульон гуляция)
(коагуляция) (газ)
51/4 8 16 48
54/1 8 19 48
54/5 10 16 48
54/7 8 16 48
55/10 8 16 48
56/3 10 16 48
56/5 8 16 48
58/1 8 19 48
60/3 8 16 48
59/2 27 >48 >48
Мы полагаем, что такая высокая чувствительность молочно-пептон-нои среды новой прописи обусловлена тем, что «атакующая» деятельность ферментов кишечной палочки, благодаря бедности среды пептоном, в первую очередь направляется на расщепление лактозы (молоко), что приводит к быстрому накоплению в среде кислоты, а следовательно, и к раннему наступлению коагуляции. Аналогичное построение бродильной среды оправдало себя и в ускоренной пробе Булира (Минке-вич и Гуревич).
б) Опыты с посевами воды ленинградских каналов. Решающую апробацию среды, понятно, могло дать только испытание ее путем посевов образцов воды в опытах определения соП-титра.
С этой целью было произведено 52 параллельных анализа различных образцов воды, сильно загрязненной стоками каналов Ленинграда. Результаты этих опытов приведены в сводной табл. 2.
Таблица 2. Сравнительное определение соП-титра воды ленинградских каналов по молочно-коагуляционному и американскому стандартному
методам (52 образца)
| Количество посевов Число положитель-
Примененная среда воды в см® ных результатов
1,0 0.1 0,01 0.001|0,0001 0,00001 0,000001
Молочно-пептонный раствор 51 51 50 48 42 30 18
Стандартный американский
бульон с лактозой (1/2°/о) . . 52 52 51 51 37 24 11
Как можно видеть, молочно-пептонный тест оказывается заметно более чувствительным на пределе минимальных количеств посеянной воды (0,001—0,000001 см3), давая, однако, некоторое, хотя и незначительное отставание в посевах больших объемов (1—0,01 см'). Можно полагать, что последнее зависит от подавляющего влияния на В. coli сопутствующей водной микрофлоры, более резко сказывающегося в молочно-пептонных культурах, чем в лактоза-бульонных. Однако, принимая во внимание несравненно большую бедность микрофлорой обычных питьевых вод, нужно думать, что в условиях санитарно-лаборатор-ной практики анализа воды это незначительное отставание молочно-пептонной среды на высоких coli-титрах отпадает.
Далее мы проследили во времени ход наступающих изменений на люлочно-пептонной среде (коагуляция) в сравнении ее со стандартным
лактоза-бульоном (газообразный) в 9 параллельных опытах посевов воды из каналов. Наблюдения регистрировались по часам, как и в описанных выше опытах с чистыми культурами. Во всех случаях результаты оказались бднотипными. Для образца приводится графическая запись на кривых двух выборочно взятых опытов (рис. 1 и 2).
£ ч»
I
0.000001 ...
0.00001 • Г « — ----
0.0001 Лаь \ ■тол '-бу; 1Ь0Н ь
0.001 \ у
V* у
0.01 / * У
/
0.1 / / ^Мо лочн >-/7£/ 7/77. / аст Чор ...
1.0 V Ж
Чась. - ю и Л /3 14 15 16 24
Рис. 1
Рис. 2
Нельзя не обратить внимания на расхождение результатов, полученных в опытах с чистыми культурами кишечной палочки (табл. 1) и в данных опытов с пробами загрязненной воды. Если в первом случае явный перевес в чувствительности был на стороне молочно-пептонного раствора, то при посевах загрязненной воды, наоборот, некоторый перевес оказался на стороне лактоза-бульона. Правда, к 24 часам, как правило, а иногда уже и к 18 часам роста результаты на обеих средах выравниваются. Мы полагаем, что это любопытное явление находит свое объяснение опять-таки во влиянии сопутствующей микрофлоры, образующей в среде щелочные продукты обмена, благодаря чему кислота, вырабатываемая кишечной палочкой из разлагаемой ею лактозы, частично нейтрализуется и таким образом кислотный порог в среде, необходимый для наступления коагуляции молока, отодвигается. Понятно, что для функции газообразования (лактоза-бульон) это обстоятельство никакой роли не играет.
Приведенные данные дают нам полное основание более решительно и широко рекомендовать внедрение молочно-коагуляционного теста в санитарно-лабораторную практику.
Этот метод может полноценно заменять собой стандартный бродильный способ Булира-Эйкмана во всех тех случаях, где по тем или иным причинам имеются затруднения в снабжении лабораторий ингредиентами эйкмановекой, гевр. булировской среды (глюкоза, маннит, мясо). Это вытекает из полной доступности и дешевизны молочно-пептонной среды, для приготовления которой требуется только два ингредиента — молоко (может быть использовано и сгущенное) и пептон, который расходуется в количестве, в 10 раз меньшем, чем для среды Булира-Эйкмана.
Кроме того, молочно-коагуляционный тест можно признать даже прямо показанным в условиях наиболее южных республик нашего Союза, как Узбекская, Таджикская и Туркменская, где бродильный тест Булира при 43° мало состоятелен. Он плохо селекционирует кишечную палочку из смеси сапрофитов, имеющих в южных широтах относительно высокий температурный оптимум своего развития, и не диференци-рует на юге соП-флору теплокровных от соП-флоры холоднокровных (Минкевич). Широкий опыт применения молочно-коагуляционного теста в Таджикистане (Змеев и Войно-Ясенецкая) показал явное его преимущество перед бродильным тестом Булира.
Следует добавить, что сфера применения молочно-коагуляционного теста, повидимому, может быть расширена и за рамки анализа воды, о чем, например, свидетельствует успешное широкое применение этого метода при исследованиях на фекальное загрязнение рук п'ерсонала и предметов обстановки пищевых блоков в практике лабораторий Белорусского военного округа.
Л. Н. ШУСТОВА.
Методика выделения патогенных микробов кишечно-тифозной группы из загрязненных
вод
Из Центральной санитарно-гигиенической лаборатории Москвы
Предлагаемая методика построена на двух основных положениях:
1. Посев и обработка только самой микрофлоры воды без посева всего исследуемого объема воды, являющегося лишь балластом в производстве анализа.
2. Использование высоко элективных сред с широким диапазоном ингибиции при условии одновременного применения различных по составу сред.
Первое условие осуществляется путем использования метода мембранных фильтров. Воду в любом объеме (до нескольких литров) фильтруют через несколько мембран порциями по 50—250 мл в зависимости от степени загрязненности воды и быстроты заиливания мембраны. Для посева в жидкую среду образовавшийся на мембране осадок хорошо разрыхляют петлей и погружают мембраны в один или несколько флаконов с жидкой средой, затем помещают в термостат при 37° и через 18—20 часов (желательно и раньше — «ранний высев») вьь севают несколько петель на обычные среды (Левин, Эндо и т. п.) и на элективные среды (см. ниже). Дальнейшую обработку производят как обычно.
Для посева на твердые среды мембрану снимают пинцетом и, прижимая плотно верхней стороной к поверхности среды, производят 4—5 «отпечатков» на одной чашке, затем мембрану помещают, как обычно, на среду в другую чашку и шпаделем производят рассев по
