CC BY
14
Раздел - молекулярная медицина Молекулярный Пап-тест в постменопаузе
Мельникова Н.В., Захаренко М.В., Яровая Н.Ю., Антонова И.Б., Бабаева Н.А., Болотина НА., Акопова Н.Б., Боженко В.К.
ФГБУ «Российский научный центр рентгенорадиологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "РНЦРР" Минздрава России), 117997, Москва, ул. Профсоюзная, 86 Информация об авторах
Мельникова Надежда Васильевна - к.м.н., в.н.с. лаборатории иммунологии, онкоцитологии и клеточной терапии в онкологии
Захаренко Маргарита Владимировна - м.н.с. лаборатории иммунологии, онкоцитологии и клеточной терапии в онкологии
Яровая Наталия Юрьевна - к.м.н., заведующая лабораторией цитологии патологоанатомического отделения
Антонова Ирина Борисовна - д.м.н., заведующая научно-исследовательским отделом профилактики, комплексной диагностики и лечения гинекологических заболеваний Бабаева Наталия Александровна - д.м.н., в.н.с научно-исследовательского отдела профилактики, комплексной диагностики и лечения гинекологических заболеваний Болотина Наталия Александровна - к.м.н., врач-патологоанатом патологоанатомического отделения
Акопова Наталия Борисовна - к.м.н., врач акушер-гинеколог клиники (Центра) комплексных методов диагностики и лечения урологических и гинекологических заболеваний
Боженко Владимир Константинович - д.м.н., проф., заведующий отделом молекулярной биологии и экспериментальной терапии опухолей
Контактное лицо
Надежда Васильевна Mельникова
117997, г. Москва, ул. Профсоюзная, д. 86., e-mail: n melnikova@list.ru Резюме
В работе проанализированы перспективы дифференциальной диагностики предраковых процессов и рака шейки матки у женщин в постменопаузе. Впервые показана возможность точной классификации 5-ти клинически важных групп: доброкачественные изменения, LSIL (низкая степень плоскоклеточного интраэпителиального поражения), HSIL (высокая степень плоскоклеточного интраэпителиального поражения), плоскоклеточный рак и эндоцервикальная аденокарцинома у пациенток в постменопаузе на основе анализа экспрессии мРНК 24 генов по материалу консервирующего раствора Пап-теста CellPrep. Дискриминантный анализ выявил 6 генов, оказывающих наибольшее влияние на правильность классификации. Разработанная методика перспективна для рефлексного тестирования в практике цитологической диагностики предраковых процессов и рака шейки матки у женщин в постменопаузе и является базовой моделью для внедрения в скрининг рака шейки матки молекулярного Пап-теста. Ключевые слова: Пап-тест, мРНК, рак шейки матки, молекулярный Пап-тест
Molecular Pap test in postmenopausal women
Melnikova N.V., Zakharenko M.V., Yarovaya N.Y., Antonova I.B., Babaeva N.A., Bolotina N.A., Akopova N.B., Bozhenko V.K.
Federal State Budgetary Institution Russian Scientific Center of Roentgenoradiology (RSCRR) of the Ministry of Healthcare of the Russian Federation Russian Scientific Center of Roentgenoradiology, 117997, Moscow, Profsoyuznaya str., 86
Authors
Melnikova N. V. - Ph.D., Leading Researcher of the Laboratory of Immunology, oncocytology and cell therapy in oncology
Zakharenko M. V. - Junior Researcher of the Laboratory of Immunology, oncocytology and cell therapy in oncology
Yarovaya N. Y. - Ph.D., Head of the Laboratory of Cytology at the Pathology department Antonova I. B. - MD, Head of the Research Department of Prevention, Comprehensive Diagnosis and Treatment of Gynecological Diseases
Babaeva N. A. - MD, Leading researcher of the Research Department of Prevention, Comprehensive Diagnosis and Treatment of Gynecological Diseases Bolotina N. A. - Ph.D., Pathologist at the Pathology department
Akopova N. B. - Ph.D., Obstetrician-gynecologist of the clinic (Center) of complex methods for the diagnosis and treatment of urological and gynecological diseases
Bozhenko V. K. - MD, Head of the Department of Molecular Biology and Experimental Tumor Therapy
Summary
The paper analyzes the possibility of differential diagnosis of precancerous processes and cervical cancer in postmenopausal women. For the first time, we showed the possibility of accurate classification of five clinically important groups: benign changes, LSIL (Low-grade squamous intraepithelial lesion), HSIL (High-grade squamous intra-epithelial lesions), squamous cell carcinoma, endocervical adenocarcinoma in postmenopausal patients based on the analysis of 24 genes mRNA expression in the Pap test CellPrep. Discriminant analysis revealed six genes most important for the accurate classification. The developed technique is a candidate for reflex testing in the practice of cytological diagnosis of precancerous processes and cervical cancer in
postmenopausal women and is a basic model for the introduction of molecular Pap test in cervical cancer screening.
Keywords: Pap test, mRNA, cervical cancer, molecular Pap test Введение
В структуре заболеваемости женского населения рак шейки матки занимает пятое место среди злокачественных новообразований - 5,2% случаев [5]. Из 100 впервые выявленных злокачественных новообразований шейки матки только в 25,3 случаев диагностируется стадия in situ [6].
В практике Пап-теста группа женщин, находящихся в постменопаузе, характеризуется низкой чувствительностью цитологического метода [14]. Также известно, что для пациенток старшего возраста цитологическое заключение о наличии атипичных клеток железистого эпителия отличается достоверно более высоким риском обнаружения патологии железистого эпителия по операционному материалу, особенно, в группе с отсутствием в анамнезе вирусов папилломы человека (ВПЧ) высокого канцерогенного риска [12]. Установлено, что эндоцервикальные аденокарциномы представляют собой гистологически разнородную группу опухолей с различными молекулярными драйверами, не все из которых связаны с ВПЧ, что диктует необходимость поиска более чувствительных методов диагностики, дополняющих цитологическое исследование [15]. На протяжении последнего десятилетия изучаются возможности транскриптомики -оценки экспрессии мРНК в комплексной диагностике предраковых процессов и рака шейки матки, в т.ч. в сочетании с жидкостной цитологией, как предпосылки внедрения молекулярного Пап-теста [1, 3, 3, 9].
Цель: повышение эффективности диагностики предраковых процессов и рака шейки матки у пациенток в постменопаузе на основе оценки экспрессии 24-генной панели мРНК
методом количественной ПЦР в материале консервирующей жидкости флакона с образцами Пап-теста CellPrep. Материалы и методы
Ретроспективно проанализированы результаты Пап-теста CellPrep (Biodyne Co., LTD, Корея) у 33 пациенток в постменопаузе, проходивших лечение в ФГБУ <<РНЦРР>> Минздрава России в 2015 - 2018 гг. Дизайн исследования включал подготовку тонкослойных цитологических препаратов [3]. Категоризация цитологических заключений выполнена согласно классификации Bethesda [7]. Гистологические исследования проведены в течение 3-х месяцев после выполнения Пап-теста, заключения давались в соответствии с гистологической классификацией опухолей женской половой системы (ВОЗ, 2014 г.) [21]. Распределение пациенток в зависимости от возраста и типа гистологического заключения представлено в таблице 1.
Таблица 1. Распределение пациенток в зависимости от типа гистологических заключений и возраста
Гистологический диагноз п - число пациенток; возрастной диапазон; средний возраст (M±SD) * лет
Доброкачественные изменения п=14; 47-68; 55,29 ± 6,18
LSIL п=4; 44-69; 60,75 ± 11,44
HSIL п=11; 49-71; 57,27 ± 7,48
Плоскоклеточный рак п=2; 47-53; 50,0 ± 4,24
Аденокарцинома эндоцервикального типа п=2; 47-75; 61,0 ±19,80
*M - среднее, SD - среднеквадратичное отклонение
LSIL (Низкая степень плоскоклеточного интраэпителиального поражения), ЖГЬ (Высокая степень плоскоклеточного интраэпителиального поражения).
Уровень экспрессии мРНК 21 гена: Ki-67, STK-15, CCNB1, CCND1, MYC, MYBL2, P16INK4A, PTEN, BIRC5, BCL2, BAG1, TERT, NDRG1, ESR1, PGR, HER2, GRB7, MGB1, MMP11, CTSL2, CD68 и 3 референсных генов: GUSB,HPRT1, B2M исследовали методом количественной ПЦР с помощью набора реагентов для определения профиля экспрессии генов с целью оценки прогностического индекса рецидивирования рака молочной железы методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени (Глобал Индекс РМЖ) по ТУ 9398-09246482062-2017 в материале консервирующего раствора после Пап-теста CellPrep.
Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием метода дискриминантного анализа. Различие групп считали статистически значимым при Р<0,05. Обработку полученных результатов выполняли в программном пакете Statistica 7.0 (Stat Soft, США). Результаты
Информативный цитологический материал получен во всех 33 (100%) случаях Пап-теста CellPrep, что согласуется с ранее представленными данными для женщин различных возрастных категорий [3]. В таблице 2 даны результаты сопоставления цитологического исследования с заключениями по операционному/биопсийному материалу.
Таблица 2. Точность цитологической диагностики Пап-теста Се11Ргер у женщин в постменопаузе
Цитологическое заключение Гистологический диагноз, п- число пациенток Всего наблюдений
Интраэпителиальные изменения, злокачественные процессы не обнаружены Доброкачественные изменения, п=5; ЬБ1Ь, п=1; Ш1Ь, п=1 7
ASC-US Доброкачественные изменения, п= 3; ЬБТЬ, п=1 4
ASC-H Доброкачественные изменения, п= 1; ШШ, п=1 2
LSIL Доброкачественные изменения, п=4; LSIL, п=2 6
HSIL Доброкачественные изменения, п=1; ЖГЬ, п=8; плоскоклеточный рак, п=1 10
Плоскоклеточный рак Аденокарцинома эндоцервикального типа, п=1; ЖГЬ, п=1; плоскоклеточный рак, п=1 3
Аденокарцинома Аденокарцинома эндоцервикального типа, п=1 1
ASC-H - Атипичные клетки плоского эпителия, не позволяющие исключить HSIL; ASC-
US - Атипичные клетки плоского эпителия неясного значения; HSIL, Высокая степень
плоскоклеточного интраэпителиального поражения; LSIL, Низкая степень
плоскоклеточного интраэпителиального поражения)
У 15 пациенток подтверждены истинно положительные заключения о наличии
изменений не менее LSIL (порог позитивности LSIL для гистологически подтвержденных
изменений HSIL+). Выявлено 2 ложноотрицательных цитологических заключения, в
которых последующее гистологическое исследование подтвердило наличие LSIL (n=1) и
HSIL (n=1). Негативная предсказательная значимость (NPV) Пап-теста CellPrep у женщин
в постменопаузе составила 71,43% случаев. С учетом ложноположительных
цитологических заключений о LSIL (n=4) и HSIL (n=1) положительная предсказательная
значимость (PPV) Пап-теста составила 75%, что лучше результатов Gilani S.M. и Mazzara
P.F. - 66% и 38% [11]. Диагностическая чувствительность и специфичность теста
составили 88,24% и 50%, что сопоставимо с данными Gilani S.M. и Mazzara P.F., у
21
которых чувствительность теста была 87%. Точность Пап-теста Се11Ргер для группы ЖГЬ+ у пациенток в постменопаузе составила 74,07%, что позволяет рекомендовать внедрение методик рефлексного тестирования для оптимальной категоризации различных клинических групп.
Во всех 33 (100%) случаях методом количественной ПЦР определена экспрессия мРНК 24 генов, включая 3-хаускиперных гена, в материале консервирующей жидкости флакона с образцами Пап-теста Се11Ргер, что соответствует результатам, полученным ранее [3] (Таблица 3).
Таблица 3. Уровень экспрессии исследованных генов в группах с гистологически подтвержденными доброкачественными изменениями, ЬБГЬ, НБГЬ, плоскоклеточным раком и аденокарциномой эндоцервикального типа
Функцио- Ген Доброка- ЬБ1Ь Ш1Ь Плоскокле- Аденокар-
нальная чественные М*, п=4 М*, п= 11 точный рак цинома
группа изменения М*, п=14 М*, п=2 эндоцерви-кального типа М*, п=2
Пролифе- Ш7 12,55 8,12 24,565 20,45 36,1473
рация STK15 5,33 6,36 5,666 4,69 4,5567
30,28 38,68 38,861 32,79 33,8261
PTEN 3,75 2,59 4,231 1,13 4,6057
CCND1 48,65 63,72 39,274 24,68 5,5952
P16INK4A 30,02 7,20 27,836 33,15 39,8630
MYC 20,36 21,23 21,890 16,80 18,1255
MYBL2 18,32 18,96 43,556 58,03 87,0583
BCL2 12,30 6,80 10,966 2,13 3,0689
BAG1 6,10 6,32 4,119 3,86 2,2873
Апоптоз NDRG1 52,90 38,63 106,146 37,68 61,5679
BIRC5 5,89 6,66 8,149 10,38 5,6824
TERT 9,96 5,95 23,885 16,54 26,1466
Клеточные ESR1 92,95 144,27 41,829 28,69 3,2462
рецепторы и PGR 231,09 550,67 12,837 161,45 7,2100
другие HER2 18,00 22,75 16,536 19,28 3,5844
маркеры GRB7 27,27 12,69 37,054 17,97 17,5714
MGB1 48550,89 54315,18 4639,021 56400,79 776,1002
Протеиназы ММР11 184,89 74,52 66,489 427,51 145,4986
CTSL2 49,32 19,26 35,943 4,13 12,4090
Маркеры
активирован ных CD68 10,16 5,32 14,700 5,01 8,7952
макрофагов
M -среднее, п- число пациенток
О HSIL
□ Доброкачественные изменения
0 Эндоцервикальная аденокарцинома LSIL
• Плоскоклеточный рак
Рисунок 1. График распределения значений дискриминантных функций
Комбинированная оценка панели экспрессии 24 генов позволила, согласно дискриминантному анализу, провести правильную классификацию для всех 5 групп (доброкачественные изменения, LSIL, HSIL, плоскоклеточный рак, аденокарцинома эндоцервикального типа) в 100% случаев (Рисунок 1). Дискриминантный анализ показал, что наибольший вклад в правильность классификации оказывает оценка экспрессии 6-ти генов: CTSL2, BIRC5, BAG1, PGR, CCNB1, MMP11 (Таблица 4).
Таблица 4. Итоги анализа дискриминантных функций гистологически подтвержденных диагностических категорий: доброкачественные изменения, ЬБГЬ, НБГЬ, плоскоклеточный рак, аденокарцинома эндоцервикального типа
Ген Лямбда Уилкса Частная Лямбда F- исключение (4,8) P-значение Толерантность 1- толерантность (R-кв.)
MGB1 0,001029 0,747155 0,676819 0,626813 0,128849 0,871151
CTSL2 0,002482 0,309753 4,456756 0,034623 0,069312 0,930688
BCL2 0,001260 0,610363 1,276741 0,355096 0,074869 0,925131
MYC 0,001092 0,704319 0,839622 0,537126 0,163463 0,836537
BIRC5 0,003045 0,252513 5,920378 0,016222 0,007818 0,992182
CCND1 0,001517 0,506918 1,945410 0,196267 0,116525 0,883475
NDRG1 0,001067 0,720788 0,774741 0,571373 0,172813 0,827187
CD68 0,000926 0,830581 0,407953 0,798428 0,094026 0,905974
KI67 0,001194 0,643768 1,106707 0,416502 0,069268 0,930732
TERT 0,001807 0,425560 2,699691 0,108159 0,041163 0,958836
HER2 0,002036 0,377655 3,295840 0,070979 0,038997 0,961003
PTEN 0,000875 0,878630 0,276271 0,885301 0,361575 0,638425
BAG1 0,002288 0,336141 3,949874 0,046669 0,044207 0,955793
PGR 0,002576 0,298469 4,700854 0,030205 0,060362 0,939639
CCNB1 0,002531 0,303863 4,581904 0,032265 0,007278 0,992722
ESR1 0,001310 0,587199 1,406002 0,315198 0,109931 0,890069
GRB7 0,001329 0,578736 1,455809 0,301214 0,040039 0,959961
MMP11 0,003595 0,213865 7,351708 0,008670 0,118035 0,881966
STK15 0,002237 0,343773 3,817799 0,050627 0,068027 0,931974
MYBL2 0,002123 0,362170 3,522262 0,061100 0,054955 0,945045
P16INK4A 0,001450 0,530251 1,771799 0,227597 0,040916 0,959084
Лямбда Уилкса: 0,00077 прибл. F (84,34) = 2,0848, p< 0,0092
Жирным шрифтом выделены гены, вносящие наибольший вклад в правильность
классификации.
Обсуждение
В нашей работе впервые показано, что комбинированная оценка панели экспрессии 24 генов позволяет, согласно дискриминантному анализу, провести правильную классификацию для всех 5-ти групп (доброкачественные изменения, LSIL, HSIL, плоскоклеточный рак, аденокарцинома эндоцервикального типа) в 100% случаев. Ранее в литературе сообщалось о возможности дифференцировать только две группы: HSIL+ и LSIL/доброкачественные изменения ткани шейки матки на основе оценки экспрессии панели из 21 генов в практике Пап-теста CellPrep [3, 4]. Кроме того, продемонстрировано, что наибольший вклад в правильность классификации оказывает оценка экспрессии 6-ти генов: CTSL2, BIRC5, BAG1, PGR, CCNB1, MMP11.
CTSL2 (Катепсин L2/катепсин V) является лизосомальной цистеиновой протеазой
и относится к семейству папаиноподобных протеинолитических ферментов [18]. В нашей
работе максимальные значения экспрессии CTSL2 получены для доброкачественных
изменений и HSIL. В литературе сведения об экспрессии CTSL2 по материалу Пап-теста
отсутствуют. Сообщается, что для материала клеточных культур рака шейки матки
25
характерен высокий уровень экспрессии катепсина L2 и MMP11 [8]. В нашей работе наиболее высокие значения экспрессии MMP11 (стромелизина-3), относящегося к семейству цинковых металлопротеиназ, характеризовали случаи инвазивного плоскоклеточного рака. Интересные результаты на когорте женщин различных возрастных групп получены Valdivia A. С соавторами, показавшими возрастание экспрессии MMP11 в ряду неизмененная ткань - LSIL - HSIL [19].
Del Pino M. и соавторы впервые сообщили о возможности оценки мРНК клеточных биомаркеров в материале консервирующей жидкости флакона с образцом Пап-теста ThinPrep для диагностики HSIL. Так, изолированная оценка экспрессии мРНК гена BIRC5 в образцах Пап-теста (жидкостная цитология) как диагностического маркера HSIL демонстрирует 90% чувствительность и 58% специфичность. В нашей работе наиболее высокие уровни экспрессии мРНК онкогена сурвивина BIRC5 также получены для групп HSIL и плоскоклеточного рака. Ген BIRC5, как и другой выделенный нами ген CCNB1 (циклин В1) являются ключевыми генами-хабами цервикального канцерогенеза [22].
Уровень экспрессии мРНК ингибитора апоптоза BAG1 (Bcl 2-сязанного атаногена 1) и кошаперона белка теплового шока Hsp70 у женщин в постменопаузе был максимальным в группе доброкачественных процессов и LSIL. Hassumi-Fukasawa M.K. с соавторами, напротив, на основе оценки иммуногистохимической экспрессии отметили, что доля BAG1 позитивных клеток в образцах HSIL и SCC значительно выше, чем в случае LSIL [13]. Подобный феномен также описан для колоректального рака [16]. Авторы обнаружили, что увеличение экспрессии белка BAG1, связанное со снижением уровня РНК, наблюдается чаще в аденомах и опухолях 4 стадии. Такое отсутствие корреляции между уровнями экспрессии мРНК и белка предполагает посттранскрипционную регуляцию мРНК BAG1 в колоректальных опухолях.
В литературе сообщается, что анализ экспрессии мРНК BCL2, BAG1, CCNB1, MKI67 (Ki-67) и рецепторов эстрогена должны составить дифференциально-
диагностическую панель маркеров для оценки цервикальных интраэпителиальных неоплазий и РШМ [2]. На основании иммуногистохимического исследования было предположено, что коэкспрессия ER, PR и BCL2 может быть маркером для пациентов с низким риском прогрессирования до инвазивного рака шейки матки в случае CIN III [10]. В образцах предраковых процессов шейки матки экспрессия рецепторов прогестерона была ниже, чем при плоскоклеточном раке шейки матки [17]. У женщин в постменопаузе прослеживается аналогичный характер изменения экспрессии мРНК рецепторов эстрогена, однако максимальные значения экспрессии мРНК рецепторов прогестерона также характеризуют группу неизмененного эпителия. В литературе сообщается о значимой роли оценки экспрессии мРНК рецепторов стероидных гормонов в дифференциальной диагностике предраковых процессов и РШМ [2]. Ряд исследователей акцентирует внимание на концентрации мРНК именно рецепторов прогестерона для построения прогностической модели в случае предраковых процессов шейки матки [8]. Заключение
Оценка экспрессионного профиля 24-генной панели по материалу консервирующей жидкости флакона Пап-теста CellPrep позволяет дифференцировать 5-ть клинически важных групп: доброкачественные изменения, LSIL, HSIL, плоскоклеточный рак и эндоцервикальная аденокарцинома у пациенток в постменопаузе и может дополнять цитологическую диагностику предраковых процессов и рака шейки матки. Данная методика может быть предложена для рефлексного тестирования и фактически служит базовой моделью для внедрения в скрининг рака шейки матки молекулярного Пап-теста.
Материалы статьи представлены на Российской секции в рамках ECC2018 - Companion Meeting Russia Russian Association of Clinical Cytologists "New trends and modern opportunities of diagnostic cytopathology" (41 Европейский конгресс по цитологии - 10-13 июня 2018 г. Мадрид, №raHra)."The application of liquid-based Pap test and the expression
analysis for postmenopausal women" авторов Melnikova N., Yarovaya N., Zakharenko M., Antonova I., Senchukova A., Babaeva N., Bolotina N., Bozhenko V.
Список литературы
1. Боженко В.К., Ашрафян Л.А., Мельникова Н.В. и др. Особенности экспрессии генов пролиферации и апоптоза при цервикальной интраэпителиальной неоплазии и раке шейки матки. Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2011. № 12. С. 54-58.
2. Боженко В.К., Ашрафян Л.А., Антонова И.Б. и др. Анализ экспрессии генов пролиферации и апоптоза при цервикальных интраэпителиальных неоплазиях. Опухоли женской репродуктивной системы. 2011. № 4. С. 72-76.
3. Мельникова Н.В., Боженко В.К., Антонова И.Б. и др. Цервикальные интраэпителиальные неоплазии: анализ профиля мРНК в практике жидкостной цитологии. Акушерство и гинекология. 2017. № 4. С. 95-100. Б01: 10.18565/^.2017.4.95-100
4. Попова Г.М., Степанов В.Н., Мельникова Н.В. и др. Нейросетевая модель классификации плоскоклеточных интраэпителиальных поражений в практике молекулярного Пап-теста. Системный анализ и управление в биомедицинских системах. 2018. Т. 17. № 4. С. 964-971 Б01: 10.25987/У8Ш.2018.17.4.019
5. Под ред. Каприна А.Д., Старинского В.В., Петровой Г.В. Злокачественные новообразования в России в 2018 году (заболеваемость и смертность) М.: МНИОИ им. П.А. Герцена - филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России. 2019. http://www.oncology.ru/service/statistics/malignant_tumors/2018.pdf
6. Под ред. Каприна А.Д., Старинского В.В., Петровой Г.В. «Состояние онкологической помощи населению России в 2018 году». М.: МНИОИ им. П.А. Герцена - филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России. 2019. http://www.oncology.ru/service/statistics/condition/2018.pdf
7. Цервикальная цитология по системе Бетесда: Терминология, критерии и пояснения. Под
ред. Р. Найяр, Д. Уилбура; перевод с англ. под ред. Н.Ю. Полонской. Издательский дом
29
"Практическая медицина". 2017. 304 с.
8. Bourmenskaya O., Shubina E., TrofimovD., et al. Host gene expression profiling of cervical smear is eligible for cancer risk evaluation. J Clin Pathol. 2013. V.66. No. 4. P. 282-285. doi:10.1136/j clinpath-2012-201313
9. Del Pino M., Svanholm-Barrie C., Torné A., et al. mRNA biomarker detection in liquid-based cytology: a new approach in the prevention of cervical cancer. Mod Pathol. 2015. V. 28. No. 2. P. 312-320. doi: 10.1038/modpathol.2014.106.
10. Fonseca-Moutinho J.A., Cruz E., Carvalho L., et al. Estrogen receptor, progesterone receptor, and bcl-2 are markers with prognostic significance in CIN III. Int J Gynecol Cancer. 2004. V. 14. No. 5. P. 911-920. doi:10.1111/j.1048-891X.2004.14529.x)
11. Gilani S.M., Mazzara P.F. Cytohistologic Correlation in Pre- and Postmenopausal Women Acta Cytologica. 2013. V. 57. No. 6. P. 575-580. DOI: 10.1159/000353769
12. Harbhajanka A., Chahar S., Michael C. W. The pathological outcome of ThinPrep Pap tests diagnosed as glandular cell abnormalities alone versus combined glandular and squamous abnormalities. Diagn Cytopathol. 2019. V.47. No. 2. P. 88-93. https://doi.org/10.1002/dc.24024
13. Hassumi-FukasawaM.K., Miranda-Camargo F.A., Zanetti B.R., et al. Expression of BAG-1 and PARP-1 in precursor lesions and invasive cervical cancer associated with human papillomavirus (HPV). Pathol Oncol Res. 2012. V. 18. No. 4. P. 929-937.
14. Hermansson R.S., OlovssonM., HoxellE., Lindstrom A.K. HPV prevalence and HPV-related dysplasia in elderly women. PLoS ONE. 2018. V. 13. No. 1. e0189300.
15. Hodgson A., Park K.J. Cervical Adenocarcinomas: a heterogeneous group of tumors with variable etiologies and clinical outcomes. Arch Pathol Lab Med. 2019. V. 143. No. 1. P. 3446. https://doi.org/10.5858/arpa.2018-0259-RA
16. Jodoin R., Carrier J.C., RivardN., et al. G-quadruplex located in the 5'UTR of the BAG-1 mRNA affects both its cap-dependent and cap-independent translation through global
secondary structure maintenance. Nucleic Acids Res. 2019. V. 47. No. 19. P. 10247-10266. doi: 10.1093/nar/gkz777.
17. Nikolaou M., Koumoundourou D., Ravazoula P., et al. An immunohistochemical analysis of sex-steroid receptors, tumor suppressor gene p53 and Ki-67 in the normal and neoplastic uterine cervix squamous epithelium. Med Pregl. 2014. V. 67. No. 7-8. P. 202-207.
18. Santamaría I., Velasco G., Cazorla M., et al. Cathepsin L2, a novel human cysteine proteinase produced by breast and colorectal carcinomas. Cancer Res. 1998. V. 58. No. 8. P. 1624-1630.
19. Valdivia A., Peralta R., Matute-González M., et al. Co-expression of metalloproteinases 11 and 12 in cervical scrapes cells from cervical precursor lesions. Int J Clin Exp Pathol. 2011. V. 4. No. 7. P. 674-682.
20. Vazquez-Ortiz G., Pina-Sanchez P., Vazquez K., et al. Overexpression of cathepsin F, matrix metalloproteinases 11 and 12 in cervical cancer [published correction appears in BMC] BMC Cancer. 2005. V. 5. P. 68. Erratum in BMC Cancer. 2005. V. 5. No. 4. P. 164.
21. World Health Organisation Classification of Tumours of the Female Reproductive Organs. / Kurman, Robert J; Carcangiu, ML; Herrington, C Simon. 4th Revised ed. International Agency for Research on Cancer. 2014.
22. Wu X., Peng L., Zhang Y., et al. Identification of key genes and pathways in cervical cancer by bioinformatics analysis. Int J Med Sci. 2019. V. 16. No. 6. P. 800-812. doi:10.7150/ijms.34172. eCollection 2019.
