CC BY
9деляли форменные элементы периферической крови, концентрацию гемоглобина крови, содержание гемоглобина в одном эритроците, цветовой показатель, длительность кровотечения.
Биохимическое исследование сыворотки крови проводили на 2-е сутки после ингаляционного воздействия. Изучали показатели функционального состояния печени (содержание глюкозы, холестерина, общего белка, активность ферментов в сыворотке крови) и почек (уровень мочевины, натрия, калия, кальция в сыворотке крови; уровень натрия, калия, кальция и мочевины в моче; рассчитывали суточное выведение этих компонентов с мочой; определяли величину спонтанного суточного диуреза после водной нагрузки), оценивали процессы, связанные с обменом гистамина по его содержанию в ткани легких.
При воздействии вещества в концентрации 44,76 мг/м3 отмечено стойкое повышение горизонтальной и вертикальной двигательной активности крыс, в периферической крови у этих животных отмечено снижение содержания гемоглобина в одном эритроците и длительности кровотечения.
В сыворотке крови зарегистрировано повышение содержания глюкозы. В моче наблюдалось повышение концентрации белка, мочевины и калия на фоне снижения суточного диуреза. Отмечено увеличение выведения мочевины и повышение ее клиренса.
После воздействия аэрозоля 5-бензилокси-триптамина гидрохлорида в концентрации 6,85 мг/м3 выявлено стойкое повышение горизонтальной двигательной активности крыс. В сыворотке крови зарегистрировано повышение содержания глюкозы, в моче — повышение концентрации белка, калия и мочевины, а также ее суточного выведения и клиренса.
Выявлено снижение уровня гистамина в ткани легких крыс обеих групп, которое при ингаляции вещества в концентрациях на уровне 44,8 и 6,85 мг/м3 составило соответственно 5,33±0,09 нм/г (р < 0,001) и 6,43+0,11 нм/г (р < 0,05), контроль 6,91+0,17 нм/г.
Limac (крысы, ингаляция, 4 часа) установлен на уровне 6,85 мг/м3 по влиянию на функцию нервной системы, почек и уровню гистамина в ткани легких.
В качестве ОБУВ аэрозоля 5-бензилокси-триптамина гидрохлорида в воздухе рабочей зоны утверждена величина 0,1 мг/м3 с пометкой «+» (требуется специальная защита кожи и глаз) (доп. 1 ГН 2.2.5.1828-03 к Перечню ОБУВ ГН 2.2.5.1314-03). Метод определения в воздухе — спектрофотометрический с длиной волны 277 нм. Нижний предел измерения 0,05 мг/м3.
Для атмосферного воздуха населенных мест утвержден ОБУВ 0,005 мг/м3 (доп. 1 ГН 2.1.6.1764-03 к ГН 2.1.6.1339-03).
На основании установленных в опытах пороговых концентраций (ПКорг, ПКсан и МНК) в качестве ОДУ 5-бензилокситриптамина гидрохлорида в воде водных объектов хозяйственно-питьевого и культурно-бытового водопользования рекомендована величина 0,4 мг/л по сани-тарно-токсикологическому показателю вредности, класс опасности 2.
Материал поступил в редакцию 11.12.06.
УДК 582.282.123.2
Н.И.Шеина2, Э.Г.Скрябина1, Е.В.Буданова2, В.В.Колесникова1, Е.В.Голобородько1
1РГМУ; 2ММА им. И.М.Сеченова, Москва
Микроорганизм Pénicillium canescens PlPh33
Штамм мицелиального гриба Pénicillium canescens РИР133 является продуцентом пектин-лиазы и фитазы. Получен из штамма Pénicillium canescens ВКПМ F-178 путем селекции. Депонирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов ИБФМ им. Г.К.Скрябина РАН под номером ВКМ F-3867D.
Растет на агаризованных средах (среда Чапека с дрожжевым автолизатом, сусло-агар, Мальц-агар, глюкозо-картофельный агар) при t 25—28°С в течение 5—7 суток, рН 5,0—6,0. При t 5 и 37°С роста колоний не наблюдается. На среде Чапека с дрожжевым автолизатом и сусло-агаре колонии достигают максимального диаметра 5—6 см. Колонии радиально складчатые, средней плотности, ростовая зона плотная. Мицелий белый, конидиальная зона голубовато-серебристая, конидиогенез обильный. Обратная сторона палевая, буроватая, со временем темно-коричневая.
При микроскопическом исследовании кони-диеносцы двухъярусные, терминальные, фур-катные, шероховатые, длиной 150 мкм, шириной 3—4 мкм. Метулы шероховатые, размером 10—18 х 2,5—3,5 мкм, фиалиды ампулиформные, размером 7—8 х 2—3 мкм, конидии чаще округлые, гладкие, размером 2,2—3,0 х 2,0—3,0 мкм.
В процессе экспериментальных исследований были изучены возможные патогенные свойства штамма, влияние мицелиального гриба на интегральные показатели состояния организма экспериментальных животных и микрофлору кишечника, иммунотоксические свойства и возможность диссеминации его во внутренние органы с целью установления лимитирующего критерия вредного действия (ЛКВД) и обосно-
вания ПДКр.з. и ПДКав..
Показано, что при однократном внутрибрю-шинном введении высоких доз микроорганизм не проявляет вирулентных свойств ^У50 > 5-1010 кл/жив.).
«Пороговая» доза микроорганизма в наших экспериментах составила 5-109 клеток/жив. при однократном внутрибрюшинном введении штамма, что свидетельствует о низкой способности штамма к инвазивности из брюшной полости в кровяное русло и не превышает допустимых значений, представленных в нормативных документах. В соответствии с методическими рекомендациями «пороговая» доза для непатогенных штаммов должна составлять более 107 кл/жив.
Токсигенные свойства штамма не были выявлены при введении чистого центрифугата и его 2-х кратных разведений. Таким образом, токси-генность штамма-продуцента отсутствует (в соответствии с нормативными документами ток-сигенность для непатогенных микроорганизмов должна быть равна 0).
Результаты исследования способности к дис-семинации изучаемого штамма показали, что Р. сапе.ъсет РнР133 обладает способностью к кратковременному персистированию в организме теплокровных животных в течение 5 дней при однократном внутрибрюшинном введении микроорганизма в дозах 5-1010 и 5-109 кл/жив., но не способен к диссеминации в крови и внутренних органах.
В целом, на основании результатов проведенных исследований можно сделать вывод об отсутствии патогенных свойств изучаемого штамма-продуцента.
Повторное воздействие штамма в двух концентрациях (2-103 и 2-104 кл/м3) в течение 1 месяца не приводило к изменению интегральных показателей состояния организма экспериментальных животных, которое оценивалось нами по динамике массы тела в течение эксперимента и в восстановительном периоде (через 2 недели), а также по величине коэффициентов массы внутренних органов.
В результате проведенных исследований по изучению иммунотоксических свойств микроорганизма установлено, что коэффициенты массы иммунокомпетентных органов (тимус и селезенка) экспериментальных животных не отличались от таковых у животных контрольной группы.
При воздействии большей концентрации микроорганизма обнаружено снижение относительного количества Т-лимфоцитов при повышенном содержании В-лимфоцитов. Снижение количества Т-лимфоцитов и увеличение В-лим-
фоцитов в периферической крови подопытных животных можно расценивать как результат влияния штамма на процессы миграции иммунокомпетентных клеток. Выявленное изменение баланса основных популяций Т- и В-лим-фоцитов в сторону увеличения В-лимфоцитов может служить источником большей продукции антител, ответственных за формирование аллергической реакции немедленного типа (ГНТ).
При оценке способности формировать аллергическую реакцию немедленного типа использована реакция прямой дегрануляции тучных клеток. Положительная тучноклеточная реакция немедленного типа на крысах была показана с высокой степенью статистической достоверности при воздействии большей концентрации штамма-продуцента. Положительная реакция тучных клеток отмечена у 62% животных при воздействии большей концентрации.
Оценка сенсибилизирующей активности в эксперименте на мышах позволила выявить формирование у животных повышенной чувствительности замедленного типа, обусловленной Т-эффекторами, при воздействии большей концентрации микромицета. Положительная реакция отмечена у 40% животных при воздействии большей концентрации.
В то же время в периферической крови подопытных животных при воздействии большой концентрации микромицета выявлено статистически значимое увеличение содержания В-лим-фоцитов, снижение Т-лимфоцитов, а также увеличение эозинофилов.
Не обнаружено образования специфических антимикробных антител (агглютининов) в сыворотке подопытных животных обеих групп.
Иммуномодулирующая активность P. canes-cens PhPl33 была оценена также по гуморальному ответу на эритроциты барана. В экспериментах на крысах ответ на эритроциты барана, оцениваемый по титрам гуморальных антител-гем-агглютининов, был аналогичен таковому в контрольной группе животных как по средним значениям, так и вариабельности показателя внутри группы.
Бактериологические исследования микрофлоры кишечника показали, что на фоне хронического воздействия P. canescens РнР133 не происходило значимого изменения (дисбаланса) микробиоценоза кишечника крыс. Штамм не оказывает ощутимого влияния на показатели анаэробной составляющей (бифидобакте-рии, лактобациллы) микробиоценоза кишечника. Штамм-продуцент не оказывает ощутимого влияния на показатели анаэробной составляющей (бифидобактерии, лактобациллы) микробиоценоза кишечника. Отмечается более высо-
кая высеваемость слабоферментирующих эше-рихий, энтерококков и энтеробактерий у подопытных животных. Коэффициент массы слепой кишки не различался у крыс контрольной и подопытных групп.
В восстановительном периоде микрофлора кишечника крыс, подвергшихся воздействию микроорганизма в обеих концентрациях, по качественным и количественным показателям не отличается от таковых контрольных животных.
Штамм-продуцент при хроническом воздействии в обеих концентрациях не обладает способностью к диссеминации в кровь и внутренние органы (легкие, печень, почки, селезенка) экспериментальных животных ни через 1 месяц введения микроорганизма, ни через 2 недели восстановительного периода.
На основании полученных данных рекомендованы для утверждения ПДКр з Р. canescens PhPl33 на уровне 2-103 кл/м3 и ПДКав. P. canescens РнР133 на уровне 2-102 кл/м3, с пометкой «Аллерген» в обоих случаях.
Разработан количественный микробиологический метод контроля содержания штамма в воздухе рабочей зоны и атмосфере населенных мест, основанный на аспирации спор мицели-ального гриба из воздуха на поверхность агари-зованной среды и подсчета выросших колоний по типичным культурально-морфологическим и физиолого-биохимическим признакам.
Материал поступил в редакцию 20.12.06.
УДК 574.6: 574.64
С.А.Остроумов
МГУ им. М.В.Ломоносова, биологический факультет
ФТОРТИТАНАТ КАЛИЯ (воздействие на фильтрацию воды мидиями
Mytilus galloprovincialis)
K2TiF6. М.м. 240,067. Potassium fluorotitanate, potassium hexafluorotitanate — соль белого цвета, кристаллы без запаха, растворимые в воде. Используется в металлургии (сплавы с участием алюминия, титана, бора; процессинг алюминия и др.), в стоматологии (компонент материала Orthoprint — alginate for dental impression material).
Цель работы — охарактеризовать воздействие фтортитаната калия на фильтрационную активность морских моллюсков, мидий Mytilus galloprovincialis. Использовали методику [1].
В начале опыта в сосуды 1 и 2 с морской водой (по 500 мл в каждом сосуде) помещали моллюсков Mytilus galloprovincialis, выращенных на коллекторах в бухте Мартынова (Черное море,
Севастополь). В каждый сосуд помещали по 8 моллюсков. Обе выборки были подобраны так, чтобы моллюски соответствовали друг другу по весу и размеру [1].
Общий вес (сырой вес с раковинами) моллюсков в сосуде № 1 составлял 103,1 г, в сосуде № 2 — 109,4 г. Длина раковин моллюсков в сосуде № 1 составляла 46—50 мм, в сосуде № 2 — 46— 51 мм.
В сосуд (опытный вариант, сосуд № 2) вносили соль K2TiF6 в виде 50 мл раствора в морской воде. После добавки соли ее конечная концентрация в сосуде составила 89,3 мг/л. В контрольный сосуд (№ 1) вносили равный объем морской воды. После добавления раствора соли в сосуде № 2 объем воды составил 550 мл, в сосуде № 1 (контроль) объем воды также составлял 550 мл. Температура воды при проведении опыта 21°С.
Через 10 мин после добавления раствора соли в оба сосуда вносили по 10 мл суспензии клеток Saccharomyces cerevisiae и начинали измерения оптической плотности. Длительность инкубации отсчитывали с момента внесения в сосуды суспензии клеток S. cerevisiae.
Оптическую плотность (OD) измеряли при 660 нм, длина оптического пути 10 мм. Результаты представлены в табл.
В конце опыта визуальное наблюдение показало, что створки моллюсков в сосуде с солью титана не были полность сомкнуты. Снижение оптической плотности в этом сосуде доказывает, что фильтрация воды в присутствии соли титана продолжалась, хотя шла с меньшей скоростью, чем в контроле.
Таблица
Воздействие К2Т1Р6 на изменение фильтрационной активности МуЫив galloprovincialis(ВЭ\A
- воздействие на эффективность изъятия взвеси из воды [6])
Время от начала инкубации, мин OD 660 ВЭИ, (B/A) 100%
сосуд № 1 (контроль) сосуд № 2 с K2TiF6 (опыт)
1 0,211 131,75
2 0,278
6 0,108 277,78
7 0,246
11 0,049 430,61
12 0,211
16 0,031 583,87
17 0,181
21 0,019 736,84
22 0,140
26 0,016 512,50
27 0,082
