CC BY
32мест, основанный на аспирации спор мицели-ального гриба из воздуха на поверхность агари-зованной среды и подсчета выросших колоний по типичным культурально-морфологическим и физиолого-биохимическим признакам.
Материал поступил в редакцию 22.06.06.
УДК 582.282.123
Н.И.Шеина1, Э.Г.Скрябина1, Е.В.Буданова2, В.В.Колесникова1, Е.В.Голобородько1
1РГМУ, 2ММА им Сеченова, Москва
Микроорганизм Aspergillus awamori Nakazawa ВУД Т-2 1000-У
Штамм мицелиального гриба Aspergillus awamori Nakazawa ВУД Т-2 1000-У (далее по тексту Aspergillus awamori Nakazawa) является продуцентом глюкоамилазы. Получен из штамма Aspergillus awamori ВУД Т-2 F203 с помощью методов мутагенеза и селекции. Полученный штамм мицелиального гриба Aspergillus awamori Nakazawa депонирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов под номером ВКМ F - 3765D.
Штамм растет на сусло-агаре, агаре Чапека с дрожжевым экстрактом и 20% сахарозой, глю-козо-картофельном агаре и Мальц-агаре. Оптимальная температура 25°С, рН 4,5-5,0, продолжительность культивирования 7 суток.
При макроскопическом исследовании на агаре Чапека с дрожжевым экстрактом колонии имеют диаметр 30-35 мм, поверхность бархатистая, края тонкие, конидиальная область имеет окраску от темно-коричневого до черного цвета, обратная сторона шафранно-желтая.
При микроскопическом исследовании кони-диальные головки шаровидные, рыхло радиальные, распадающиеся впоследствии на отдельные колонки, конидиеносцы слабо окрашены в терминальной части, апикальные расширения шаровидные 20-45 мкм в диаметре, покрыты стеригмами по всей поверхности. Стеригмы дву-яъярусные, метулы 6-16 х 3,5-7 мкм, фиалиды 5-8 х 2-4 мкм. Конидии шаровидные 3,5-6 мкм в диаметре, гладкие.
В процессе экспериментальных исследований были изучены влияние штамма Aspergillus awamori Nakazawa на интегральные показатели состояния организма экспериментальных животных и микрофлору кишечника, иммуноток-сические свойства и возможность диссеминации его во внутренние органы с целью установления лимитирующего критерия вредного действия и обоснования ПДКр.з. и ПДК^..
Хроническое воздействие штамма в двух концентрациях (1,2-104 и 1,2-105 кл/м3) не приводи-
ло к изменению интегральных показателей состояния организма экспериментальных животных, которое оценивалось нами по динамике массы тела в течение эксперимента и в восстановительном периоде (через 2 недели), а также по величине коэффициентов массы внутренних органов.
В результате исследований по изучению им-мунотоксических свойств микроорганизма установлено, что коэффициенты массы иммуноком-петентных органов (тимус и селезенка) экспериментальных животных не отличались от таковых у животных контрольной группы.
При воздействии микроорганизма обнаружено снижение количества Т-лимфоцитов при повышенном содержании В-лимфоцитов. Снижение количества Т-лимфоцитов и увеличение В-лимфоцитов в периферической крови подопытных животных можно расценивать как результат влияния штамма на процессы миграции иммунокомпетентных клеток.
При оценке способности Aspergillus awamori Nakazawa формировать аллергическую реакцию немедленного типа использована реакция прямой дегрануляции тучных клеток, которая оценивалась нами по комплексу показателей, включающего процент дегранулированных тучных клеток перитонеальной жидкости, показатель дегрануляции и интенсивность процесса дегра-нуляции. Положительная тучноклеточная реакция немедленного типа (ГНТ) на крысах была показана с высокой степенью статистической достоверности при воздействии обеих концентраций штамма-продуцента. Положительная реакция тучных клеток отмечена у 71% животных при воздействии меньшей концентрации штамма-продуцента и у 100% животных при воздействии большей концентрации.
Полученные данные свидетельствуют о способности штамма формировать аллергическую реакцию немедленного типа, при этом сенсибилизирующая активность зависит от уровня воздействия микроорганизма.
При оценке сенсибилизирующей активности штамма в эксперименте на мышах выявлено формирование гиперчувствительности замедленного типа, обусловленной Т-эффекторами, при воздействии большей концентрации штамма. Положительная реакция отмечена у 75% животных при воздействии большей концентрации.
В то же время в периферической крови подопытных животных при воздействии обеих концентраций не выявлено статистически значимых изменений большинства изучаемых показателей. Однако наблюдалось значимое увеличение эозинофилов, которое может служить неспецифическим признаком сенсибилизации организма.
Не обнаружено образования специфических антимикробных антител (агглютининов) в сыворотке подопытных животных обеих групп по сравнению с контролем.
Иммуномодулирующая активность штамма Aspergillus awamori Nakazawa была изучена также по гуморальному ответу на эритроциты барана. В экспериментах на крысах ответ на эритроциты барана, оцениваемого по титрам гуморальных антител-гемагглютининов, был аналогичен таковому в контрольной группе животных.
Таким образом, штамм-продуцент Aspergillus awamori Nakazawa обладает сенсибилизирующей активностью и иммуномодулирующим действием.
Бактериологические исследования микрофлоры кишечника показали, что на фоне хронического воздействия Aspergillus awamori Nakazawa в большой концентрации наблюдается значимое снижение содержания бифидобактерий, одного из показателей анаэробной составляющей микроценоза, что указывает на дисбаланс микроэкологии кишечника крыс. Кроме того, анализ частоты высе-ваемости микрофлоры указывает на меньшую вы-севаемость лактозопозитивных эшерихий, а также большую высеваемость стафилококков и дрожже-подобных грибов Candida при воздействии большей концентрации микромицета по сравнению с контролем. По-видимому, интраназальное воздействие штамма-продуцента Aspergillus awamori Nakazawa в большей дозе способствуют развитию дисбактериоза. Однако эти изменения не стойкие, они нивелируются в восстановительном периоде. В восстановительном периоде микрофлора кишечника крыс, подвергшихся воздействию микроорганизма в обеих концентрациях, по качественным и количественным показателям не отличается от таковых контрольных животных.
Штамм-продуцент при хроническом воздействии в обеих концентрациях не обладает способностью к диссеминации в кровь и внутренние органы (легкие, печень, почки, селезенка) экспериментальных животных ни через 1 месяц введения микроорганизма, ни через 2 недели восстановительного периода.
На основании полученных данных рекомендованы ПДКрз A. awamori Nakazawa на уровне 1,2-103 кл/м3 и ПДКав на уровне 1,2-102 кл/м3 с пометкой «Аллерген» в обоих случаях.
Разработан количественный микробиологический метод контроля содержания штамма в воздухе производственных помещений и атмосфере населенных мест, основанный на аспирации спор плесневого гриба из воздуха на поверхность ага-ризованной среды и подсчета выросших колоний по типичным культурально-морфологическим и физиолого-биохимическим признакам.
Материал поступил в редакцию 22.06.06.
УДК 613:615.9.623.95
С.М.Куриязова, Б.Дусчанов
Ургенчский филиал Ташкентской медицинской академии
Стимулятор роста растений «Дорилин»
«Дорилин» 10% раствор — препарат для предпосевной обработки семян хлопчатника и зерна пшеницы. Препарат синтезирован в Институте химии растительных веществ АН РУз. Действующие вещества препарата: 8% рослин и 2% медный купорос. Рослин — тройной сополимер волокна нитрон с молекулярной массой 50000— 60000. Препарат представляет собой аморфный порошок, темно-коричневого цвета, без запаха. Температура воспламенения 605°С, хорошо растворим в воде и водных растворах щелочей, не растворим в органических растворителях. Синтезирован рослин на основе многотоннажных биохимических (гидролизных) отходов заводов — лигнина. Получают рослин сополиме-ризацией нитролигнина с нитроном. Структурная формула не установлена. Элементный состав в процентах составляет: С — 48,85, Н — 5,1, N - 8,13, N - 1,5, О2 - 36,18.
Для определения параметров острой токсичности «Дорилина» при внутрижелудочном воздействии нами проведены исследования на 3-х видах экспериментальных животных: белых мышах, белых крысах и кроликах.
Средне-смертельные дозы: для белых крыс 3700 (4133^3266), для белых мышей 3275 (3499^3051) и для кроликов — 3200 мг/кг. Коэффициент видовой чувствительности, равный 1,1, свидетельствовал о том, что препарат видовой чувствительностью не обладает. Клиническая картина отравления была однотипной у разных видов животных и характеризовалась угнетением двигательной активности, отсутствием аппетита, сонливостью, саливацией. Гибель животных от токсических доз отмечалась на 2—4 сутки.
С целью исследования состояния антиок-сидантной системы при воздействии «Дорили-на» на организм экспериментальных животных проведен острый эксперимент на белых крысах. Животные были разделены на 4 группы: 1-я группа получала однократно внутрижелудочно «Дорилин» в дозе 1000 мг/кг; 2-я группа — 100 мг/кг; 3-я группа — 10 мг/кг; 4-я группа служила контролем. У животных в динамике через 2, 24, 48, 72 ч, 7 и 14 суток в цельной крови определяли активность ферментов каталазы и супероксид-дисмутазы (СОД). Активность фермента катала-зы определяли методом М.А.Коралюк с соавторами, а активность СОД — методом В.Г.Мхита-рян.
Результаты полученных исследований после введения «Дорилина» в дозе 1000 мк/кг пред-
Таблица
Активность ферментов антиоксидантной системы в крови белых крыс после однократного внутрижелудочного введения «Дорилина» в дозе 1000 мг/кг
Срок исследований, часы Активность каталазы, мкат/л Активность супероксидисмутазы (4Е)
контроль опыт контроль опыт
2 21,07+0,4 14,74+0,82* 19,16+1,00 15,56+0,43 *
24 21,14+0,39 10,21+0,38* 18,72+0,72 10,15+0,57*
48 19,38+0,61 8,14+0,37* 21,14+0,37 7,52+0,24 *
72 19,97+0,51 9,74+0,49* 19,54+0,9 9,51+0,46*
7 суток 20,17+0,44 15,21+0,54* 20,14+0,70 15,44+0,26*
14 суток 21,02+0,43 16,82+0,46* 19,17+0,37 16,72+0,75*
Примечание: * — р < 0,05 статистически достоверно по отношению к контролю
ставлены в табл.
Наиболее выраженные изменения активности ферментов каталазы и СОД выявлены у 1-ой группы животных. Так, активность каталазы в крови подопытных белых крыс ингибировалась больше, чем в 2 раза через 24, 48 и 72 ч после введения «Дорилина» (р < 0,001). Через 7 суток активность каталазы преобретает четкую тенденцию к восстановлению, однако даже через 14 суток после затравки показатели не нормализовались.
Активность СОД в крови у животных этой же группы во все сроки исследований значительно снижалась, причем самым значимым это снижение было через 48 ч и достигало значений 7,52±0,24 УЕ, при контрольных уровнях 21,14+0,37 УЕ (р < 0,001).
У животных 2-ой группы, получавших «До-рилин» в дозе 100 мк/кг, активность каталазы и СОД изменялись со статистической достоверностью только через 24—48 ч после затравки и составляла 15,62—13,7 мкат/л и 14,42—15,42
Лекарственные средства: 5000 наименований лекарств. препаратов и их форм: Свойства, применение, взаимодействие, противопоказания / Под ред. М.А.Клюева. — 12-е изд., доп., перераб.
- М.: Книж. Дом ЛОКУС, РИПОЛ КЛАССИК, ИКТЦ «ЛАДА», 2006. - 768 с. 9000 экз.
Окислительный стресс: Прооксиданты и анти-оксиданты / Е.Б.Меньщикова и др. — М.: Слово, 2006. - 556 с. 500 экз.
О санитарно-эпидемиологической обстановке в Российской Федерации в 2004 году. Государственный доклад. — М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2005. - 269 с. 1000 экз.
Полный справочник фармацевта / О.В.Ананьев
и др. — М.: Эксмо, 2006. — 768 с. 3000 экз.
Экологическая экспертиза: Учеб. пособие для вузов / Под ред. В.М.Питулько. — 3-е изд., сте-
УЕ соответственно, при контрольных значениях 21,14—19,38 мкат/л и 18,72—21,14 (р < 0,001). В другие сроки исследований и у животных 3-й группы активность каталазы и СОД не отличались от контрольных значений.
Таким образом, нами установлено, что в защите клеток от повреждающего действия продуктов перекисного окисления липидов важное место занимает антиоксидантная система. Изменения активности ее ферментов приводит к нарушению клеточного гомеостаза, повышению агрессивности молекулярного кислорода и гидроперекисей, образующихся в процессе метаболизма. Степень ингибирования активности ка-талазы и СОД в организме зависит от вводимой дозы «Дорилина» и сроков исследования. Полученные данные будут положены в основу разработки патофизиологических механизмов биологического действия «Дорилина».
Материал поступил в редакцию 16.02.06.
реотип. — М.: Изд. центр «Академия», 2006. — 480 с. — (Высш. проф. образование: Естеств. науки). 2000 экз.
WHO Library Cataloguing in Publication Data. International Programme on Chemical Safety (IPCS). Harmonization Project Series: «Principles of Characterizing and Applying Human Exposure Models.
WHO, Geneva, 2005. Web page: http:// www.who. int/ipcs/en.
WHO Classification of Tumours. Volume 6. Pathology and Genetics of Skin Tumours. Volume 9. Pathology and Genetics of Head and Neck Tumours. WHO, Geneva, 2005.
IARC Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans. Vol. 87: Inorganic and Organic Lead Compounds. IARC, LYON, France, 2006, 506 pp.
К.К.Сидоров, А.А.Виноградова
НОВЫЕ ПУБЛИКАЦИИ ПО ТОКСИКОЛОГИИ И СМЕЖНЫМ ДИСЦИПЛИНАМ
