CC BY
83БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ГРИБОВ РОДА
ТМСНОБЕЯМА Ь0^1ВКАСН1АТиМ 1 2 Хомидова С.Х. , Зульфикоров А.Н.
1Хомидова Саодат Хикматовна - кандидат биологических наук, доцент, кафедра микробиологии и фармакологии;
2Зульфикоров Абдурахим Найимович - кандидат биологических наук, доцент, кафедра медицинской биологии и гистологии, Бухарский государственный медицинский институт им. Абу Али Ибн Сино, г. Бухара, Республика Узбекистан
Аннотация: грибы рода Trichoderma longibrachiatum-9 (TL-9) обладали высокой скоростью роста. На 3 сутки роста занимали всю поверхность чашки Петри радиусом 7 см. Колонии белого либо оливкового-зеленого цвета. На конечной ветви штамма гриба П-9 имелась одна фиалида. Фиалоспоры эллиптической формы. Ключевые слова: грибы, колонии, микроскопирование, штамм, рост, мицелии, конидиефоры, фиалиды.
Trichoderma - это естественный род почвенных грибов, обладающих способностью к активному подавлению ряда патогенов растений. Trichoderma очень эффективен и как средство борьбы с возбудителями большого количества болезней, и как стимулятор роста, и как иммуностимулятор растений [1-3].
Trichoderma производит целый ряд антибиотиков, которые могут сильно конку -рировать с другими микроорганизмами за источники питания, вырабатывают ферменты, которые могут делить крупные молекулы целлюлозы и хитина на более мелкие [2, 4-6].
Цель работы - изучение микробиологических свойств грибов рода Trichoderma longibrachiatum-9 (^-9).
Материалы и методы
Исследовали образцы почвы и гниющие остатки растений (гузапаи - стебли хлопчатника, костры кенафа, рисовой и пшеничной соломы). Из них выделили 260 штаммов грибов рода Trichoderma. Изучение микробиологических свойств проводили на сусло-агаре, картофельно-сахарозной и агарозной среде Mandels с фильтровальной бумагой. Описание морфологических признаков проводили на стандартной среде Чапека. Макроскопические свойства штаммов изучали в динамике роста гигантских колоний в чашках Петри диаметром 14 см при ^ = 28-30°С. В процессе работы использовали фазово-контрастную, электронную и сканирующую микроскопию. Для просвечивающей микроскопии материал выращивали на среде Чапека и на целлюлозном агаре, фиксировали 2,5% глютаральдегидом с последующей окончательной фиксацией в 1% растворе, затем их заключали в смолы по общепринятой методике.
Культуры грибов для исследования на сканирующем электронном микроскопе инокулировали в центр чашки Петри с агаризованной средой. Посев производили уколом в центр чашки Петри. Препараты для микроскопирования брали задолго до того, как колонии достигали предельной пигментации, так как в более старых культурах трудно различить разветвлённую систему конидиефоров и расположени фиалид. Из колонии гриба, выросшей на агаризованной среде, вырезали стерильным скальпелем квадратики размером 1,5 х 1,5 см и фиксировали их в течение 48 ч в 6% -ном растворе глютарового альдегада с последующей дофиксацией в 1% растворе 0804 (четырехокись осмия) в течение 1-2 ч при ^ +4 °С.
Фиксаторы готовили на фосфатном буфере с рН 7.4. Далее материал обезвоживался в серии спиртов и в абсолютном ацетоне. Материал после высушивания напыляли золотом с помощью ионного напылителя 1В-3, а затем изучали в сканирующем электронном микроскопе 405А (Хитачи, Япония) при ускоряющем напряжении 25 кв.
Результаты исследований и их обсуждение
Штаммы гриба 1Ъ-9 росли с высокой скоростью. Время максимального образования фермента целлюлазного цикла совпадало с периодом конидиогенеза. Максимальная продукция фермента и синтез белка у штамма 1Ъ-9 совпадали во времени. Колонии гриба 1Ъ-9 на всех средах росли интенсивно: на 3-е сутки роста на картофельно-сахарозной среде и целлюлозном агаре колонии занимали всю поверхность чашки Петри с радиусом 7 см (Рис. 1 (I и III)).
Рис. 1. Морфо-культуральные признаки ТЬ-9
Зона спороношения представлена плотным невысоким мицелием, на котором расположены дерновинки, образованные органами спороношения, близко расположенными друг к другу. Цвет колонии вначале был белым, а затем на 5-е сутки переходил в оливково-зеленый цвет. На сусло-агаре в центре колонии образуется рыхловатый, войлочно-бесцветный мицелий с усиливающимся развитием воздушного мицелия к периферии (Рис. 1 (II)).
На всех средах гриб вырабатывает яркий желто-зеленый пигмент. Гифы прозрачные, септированные, гладкостенные, диаметром 3 -14 мкм. Хламидоспоры терминальные или интеркалярные, образуются чаще в погруженном мицелии. Они широко эллиптические, от 5 до 14 мкм в диаметре. Конидиеносцы имеют довольно простую систему ветвления (Рис. 2 (I)).
II
Рис. 2. I - Строение конидиефоров (х 4000), II - Строение фиалид (х 10000)
На основных длинных ветвях располагаются под прямым углом к носителю неравномерно боковые ветви диаметром от 2 до 7 мкм. Боковые ветви более длинные у основания и более и короткие на верхушке главного ствола. Конечные ветви оканчиваются одной терминальной фиалидой, удлиненной до 15 мкм (Рис. 2 (II)).
Интеркаляные фиалиды чаще формируются неравномерно, одиночно, кеглеобразной формы размером 6,5-15 х 2,5-3,1 мкм.
Фиалоспоры эллиптические, субцилиндрические 5,5 - 2,5 мкм. Гриб был выделен из почвы, содержащей растительные остатки, в районе академгородка г. Ташкента. В Узбекистане распространен повсеместно.
Таким образом, штаммы гриба TL-9 характеризуются интенсивным ростом и высокой скоростью одновременного синтеза ферментов и белков. Штаммы гриба TL-9 образовывали гигантские колонии уже на 3 сутки роста.
Список литературы
1. Алимова Ф.К., Тазетдинова Д.И., Тухбатова Р.И. Промышленное применение грибов рода Trichoderma // Учебн.-мет. пособ. Казань: УНИПРЕСС ДАС, 2007. 234 стр.
2. Буракаева А.Д. Микофильные грибы в биотехнологии фунгицидных препаратов // Вестник ОГУ, 2014. Том 167. № 6. С. 98-103.
3. Azin M., Moravej R., Zareh D. Production of xylanase by Trichoderma longibrachiatum on a mixture of wheat bran and wheat straw: Optimization of culture condition by Taguchi method // Enzyme and Microbial Technology, 2007. Vol. 40. № 4. P. 801-805.
4. Druzhinina I.S., Komon-Zelazowska M. Ismaiel A. at al. Molecular phylogeny and species delimitation in the section Longibrachiatum of Trichoderma // Fungal Genetics and Biology, 2012. Vol. 49. № 5. P. 358-368. doi:10.1016/j.fgb.2012.02.004.
5. Mikkola R., Andersson M.A., Laszlo Kredics L. et al. 20-Residue and 11-residue peptaibols from the fungus Trichoderma longibrachiatum are synergistic in forming Na+/K+-permeable channels and adverse action towards mammalian cells // FEBS Journal. 2012. DOI: 10.1111/febs.12010.
6. Samuels G.J., Chaverri P., Farr D.F. and McCray E.B. Trichoderma Online // Systematic Mycology and Microbiology Laboratory, ARS, USDA. Re-trieved March 17, 2015. [Электронный ресурс]. Режим доступа: /taxadescriptions/keys/TrichodermaIndex.cfm./ (дата обращения: 30.03.2018).
