CC BY
25analysis in soil and biological studies] / A.I.Obukhov, I.O.Plekhanova. - M.: MGU, 1991. - 136 p.
12. Lakin, G.F. Biometriya: uchebnoe posobie dlya biol. spec. vuzov. - 4-e izd., pererab. i dop [Biometrics: textbook for biol. specialist of Universities. - 4-th edition, revised and added] / G.F. Lakin. - M.: Vysshaya shkola, 1990. - 352 p.
13. Koefficienty perekhoda svinca iz raciona v perifericheskuyu krov ovec [Conversion factors of lead from diet to peripheral blood of sheep] / E.B. Mirzoev, V.O. Kobyalko, O.A. Gubina [et al.] // Problemy veterinarnoy sanitarii, gigieny i ekologii. - 2016. - № 2 (18). - P. 90-95.
14. Rumbeiha, W.K. A retrospective study on the disappearance of blood lead in cattle with accidental lead toxicosis / W.K.Rumbeiha, W.E.Braselton, D.A.Donch // J.Vet Diagn Invest. - 2001. - № 13. - P. 373-378.
15. Sakai, T. Delta-aminolevulinic acid in plasma or whole blood as a sensitive indicator of lead effects, and its relation to the other heme-related parameters / T.Sakai, YMorita // Int Arch Occup Environ Health. - 1996. - № 68. - P. 126-132.
16. Comparison of blood lead and blood and plasma 8-aminolevulinic acid concentrations as biomarkers for lead poisoning in cattle / G. K. Hwan [et al.] // J Vet. Diagn. Invest. - 2010. - № 22. -P. 903-907.
17. The relationship between trace elements and cardiac markers in acute coronary syndromes / E. Altekin, C. Coker, A.R. Sizman [et al.] // J. Trace Elem. Med. Biol. - 2005. - № 3 (18). - P. 235-242.
18. Zerbino, D.D. Svinec - etiologicheskiy faktor porazheniya sosudov: osnovnye dokazatelstva [Lead is an etiologic factor of vascular affection: main evidence] / D.D.Zerbino, T.I.Solomenchuk // Pospishil Mistectvo likuvannya. - 2009. -№ 38 (64). - P. 12-14.
19. Akhmetzyanova, E.H. Rol svintsa v formirovanii arterialnoy gipertenzii (obzor literatury) [The role of lead in the formation of arterial hypertension (a literature review)] / E.H.Ahmetzyanova, A.B.Bakirov // Medicina truda i promyshlennaya ekologiya - 2006. - № 5. - P. 17-22.
УДК: 636.085/087:582.28 DOI: 10.33632/1998-698X.2019-1-19-24
микологическая оценка кормов в республике татарстан
Р.М.Потехина - кандидат биологических наук, вед.н.с.; О.К.Ермолаева - кандидат биологических наук, ст.н.с.; З.Х.Сагдеева - мл.н.с.; Э.И.Семёнов - кандидат биологических наук, зав. лабораторией.
ФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности», г.Казань (420075, г. Казань, Научныйгородок-2, тел. (843)239-53-20, e-mail: vnivi@mail.ru).
Проведен микологический анализ кормов Республики Татарстан в период с 2017 по 2018 годы. Установлено широкое распространение грибов рода Aspergillus, в частности, A.flavus и A. fumigatus, Penicillium sp, Trihoderma sp, в частности, Trihoderma veride. Наибольшее распространение имели грибы рода Fusarium и особенно F. graminearum. Это связано с клматическими особенностями - влажное и прохладное лето 2017 г. Опасных изо-лятов Stachyobotrys alternans и Dendrodochium toxium не обнаружено. Общее число грибов (ОЧГ) составляло от 1*102 до 5*103 (КОЕ/г корма), что не превышает ПДК. Однако изоляты рода Fusarium, выделенные в: Апастов-ском, Елабужском, Актанышском и Кукморском районах показали высокий токсигенный потенциал -продуцировали микотоксины Т-2 токсин и дезоксиниваленол (ДОН). Установлено, что на тест-объекте стилонихиях 8,1% образцов показали выраженную токсичность, 2,7% образцов - слабую токсичность. На белых мышах токсичность не регистрировалась, кожная проба на кроликах была положительной в 2,7% образцов. Они были признаны недоброкачественными. Как следствие, нами регистрировались уже в осенний период 2017 года случаи ми-котоксикозов животных, и чаще у коров. Результаты исследования выявили тот факт, что официально принятая интерпретация результатов токсичности кормов требует корректировки в зависимости от вида животных. Только систематический мониторинг кормов и профилактические мероприятия позволят своевременно предотвращать угрозу распространения микотоксикозов в животноводческих хозяйствах.
КЛЮчЕВЫЕ СЛОВА: сельскохозяйственные корма, гриб, микотоксины, зерно, фузариум, стило-нихии, токсичность.
Заражение кормов микотоксинами, являющимися продуктами плесневелых грибов рода Fusarium, Penicillium и Aspergillus, представляет значительную проблему, так как микотоксикозы - болезни, возникающие в результате поедания таких
кормов, которые могут привести к массовым отравлением животных, вплоть до их гибели [1]. За последние 20 лет во всем мире быстро увеличивается объем теоретических и прикладных исследований по этой проблеме. Они носят междисциплинарный ха-
рактер, поскольку многие виды токсинообразующих грибов и микотоксинов могут перекрестно поражать растения, животных и человека, нанося существенный ущерб сельскохозяйственному производству и здоровью населения.
Грибы - продуценты микотоксинов хорошо растут и вырабатывают токсины на различных субстратах, практически повсеместно и немалую роль играют нарушение технологии возделывания полевых культур, хранения урожая и готовой продукции. Известно около 200 видов микромицетов, образующих свыше 400 микотоксинов, но, вероятно, их число по мере дальнейших исследований будет расти [2]. Одним из существенных аспектов исследования микотоксикозов у человека и животных является необходимость микологического анализа кормов.
Целью наших исследований было проведение микологический анализ кормов Республик Татарстан.
Материалы и методы. В качестве объекта исследования использовали пробы кормов, поступивших для исследования из различных районов РТ в период с 2017 по 2018 годы. Микологические исследования кормов проводили в соответствии с нормативными документами [2-8], по методике, описанной Курасо-вой В.В. и соавт. [4]. Видовую идентификацию проводили в соответствии с Пидопличко Н.М., Билай В.И.
[1, 6] и [3]. Токсичность выделенных штаммов грибов определяли на простейших Paramecium caudatum. Общее число грибов (ОЧГ) определяли методом серийных разведений и последующим посевом на плотные питательные среды, с последующим подсчетом суммарного количества грибов в 1 г по формуле:
1с
0,1*^ + 0,01*У2+0,001*У3
где: Х - суммарное число грибов, выраженное количеством колонеобразующих единиц (КОЕ) в 1 г продукта;
1с - сумма колоний на всех чашках, подсчитываемая в посевах всех трех последовательно разведенных взвесей;
- объем взвеси 1 (разведение 10-1);
V - объем взвеси 2 (разведение 10-2);
V - объем взвеси 3 (разведение 10-3).
Родовую и видовую идентификацию грибов проводили с помощью специальных определителей и атласов. Общую токсичность определяли по ГОСТ 316742012 [2] на 3 видах тест-объектах: стилонихиях, на кроликах и белых мышах.
Результаты исследований. Данные микологической оценки степени пораженности кормов, представлены в таблице.
Таблица
Загрязнение кормов микромицетами
Наименование корма ОЧГ, КОЕ/г Выделенные грибы Токсичность изолятов на P. Caudatum
1 2 3 4
Аксубаевский район (ООО «Аксу-Агро»)
Жмых рапсовый 3Х103 Penicillium sp., Aspergillus flavus, F. avenaceum. не токсичный
Ячмень плющеный 1Х103 Penicillium sp., Rizopus sp., Trihoderma sp., дрожжевые грибы не токсичный
Зерносмесь 1Х104 Penicillium sp., Trihoderma sp., Mucor sp. не токсичный
Комбикорм 1Х102 Penicillium sp., Mucorsp., дрожжевые грибы. не токсичный
Жом 2Х103 Rizopussp.,Mucorsp. не токсичный
Апастовский район (МТФ «Чуру-Барышево»)
Сено 3Х103 Fusarium sp., F.graminearum Penicillium sp., Aspergillus fumigatus., Mucor sp. не токсичный
Сенаж 1Х102 Penicillium sp., Mucor sp. не токсичный
Комбикорм 4Х103 Penicillium sp., Aspergillus flavus., Mucor sp. не токсичный
Комбикорм для телят 3-6 мес. 3Х102 Penicillium sp., Mucor sp. не токсичный
Комбикорм (род. Отд телятам) 3Х103 Penicillium sp., Aspergillus flavus., Mucor sp. не токсичный
Продолжение таблицы
1 2 3 4
Елабужский район (село Поспелово)
Зеленка 3Х103 Fusarium sp., Penicillium sp., Aspergillus flavus., Mucor sp. не токсичный
Почва 1,5Х104 Fusarium sp., F. graminearum Penicillium sp.,Mucor sp. не токсичный
Елабужский район (село Костенеево)
Зеленка 4Х102 Rizopus sp, Trihoderma veride, Mucor sp. не токсичный
Почва 3Х103 Rizopussp, Trihoderma veride., Penicillium sp., Mucor sp. не токсичный
Мамадышский район (поселок Пятилетка)
Зеленка 1Х102 Fusarium sp., Penicillium sp., Aspergillus sp., Mucor sp. не токсичный
Почва 5Х103 Fusarium sp., Penicillium sp., Aspergillus flavus., Mucor sp. не токсичный
Мамадышский район (село Нижние Яки)
Зеленка 3Х102 Fusarium sp., Penicillium sp., Aspergillus sp., Mucor sp. не токсичный
Почва 2Х103 Fusarium sp., Penicillium sp., Aspergillus flavus., Mucor sp. не токсичный
Пестричинский район (село Шали)
Зеленка 5Х102 Fusarium sp., Penicillium sp., Aspergillus sp., Mucor sp. не токсичный
Почва 4Х103 Aspergillus flavus токсичный
A. niger., Mucor sp. не токсичный
Пестричинский район (село Кулаево)
Зеленка 2Х102 Fusarium sp., Penicillium sp., Aspergillus sp. не токсичный
Почва 3Х103 As.flavus., A. niger., Rizopus sp. не токсичный
Актанышский район (поселок Актаныш)
Сено 2Х102 Fusarium sp., F. graminearum сл. токсичный
Mucor sp. нетоксичный
Почва 5Х103 Mucor sp., Rizopus sp., Penicillium sp. нетоксичный
2018 года из Кукморского района СХПК «Урал»
Шрот рапсовый 1Х103 Aspergillus flavus токсичный
Mucor sp, Penicillium sp. не токсичный
Кукуруза 2,5Х102 Mucor sp, Aspergillus niger, Fusarium sp. не токсичный
Отруби 2Х103 Fusarium sp, дрожжи не токсичный
Жмых подсолнечный 1,2Х103 Aspergillus flavus токсичный
Mucor sp, Fusarium sp. не токсичный
Силос методом раскладки Mucor sp, Penicillium sp, дрожжи не токсичный
Продолжение таблицы
1 2 3 4
Сенаж методом раскладки Mucor sp, Aspergillus flavus не токсичный
Сенаж методом раскладки Aspergillus flavus. токсичный
Мензелинского района из ООО Калмурзино
Зернофураж 2Х101 Aspergillus flavus, Mucor sp, Penicillium sp. не токсичный
Кукуруза 1Х102 Mucor sp, Aspergillus niger, Fusarium sp. не токсичный
Отруби 2Х103 Fusarium sp, дрожжи не токсичный
Жмых подсолнечный 1,2Х103 Aspergillus flavus, Mucor sp, Fusarium sp. не токсичный
Силос методом раскладки Mucor sp, Penicillium sp, дрожжи не токсичный
Сенаж методом раскладки Mucor sp, Aspergillus flavus не токсичный
Сенаж методом раскладки Aspergillus flavus, дрожжи не токсичный
Менгер Атнинского района
Жмых подсолнечниковый 2Х103 Mucor sp., A. flavus., A.sp. не токсичный
Овёс 2Х101 Mucor sp., A. flavus. не токсичный
Ячмень 1Х102 A. sp., Mucorsp. не токсичный
Пшеница 1Х104 Penicillium sp., Mucor sp., дрожжевые грибы. не токсичный
Кукуруза 3Х102 Rizopus sp., Mucor sp., A. flavus. не токсичный
Как видно из данных, представленных в таблице, проведенный микологический анализ кормов показал широкое распространение грибов рода Aspergillus, в частности, A.flavus и A.fumigatus, Pénicillium sp, Trihoderma sp, в частности, Trihoderma veride. Следует отметить, что особенно распространённым было поражение грибами рода Fusarium и особенно F.graminearum. Кроме того выделялись достаточно часто микромицеты Mucor sp. и Rizopus sp.
ОЧГ составляло от 1х102 до 5х103 (КОЕ/г корма), что не превышает ПДК и свидетельствует об отсутствии плесневения. Из указанных родов микромице-тов, изолятов, обладающих выраженной токсигенно-стью не обнаружено, за исключением изолятов рода Fusarium выделенные в Апастовском, Елабужском, Актанышском и Кукморском районах. Они показали высокий токсигенный потенциал. Изоляты продуцировали микотоксины Т-2 токсин и дезоксиниваленол (ДОН). Опасных изолятов Stachyobotrys alternans и Dendrodochium toxium не обнаружено.
Вероятно, высокую степень зараженности зерна и распространение фузариоза, спровоцировали по-годно-климатические условия 2017 года. Повышенное содержание осадков, наряду с понижением температу-
ры воздуха в фазах цветения, и формированием зерна способствовало поражению растений фузариозом. Что согласуется с данными, что наиболее благоприятный период для развития грибов - когда растения испытывают стрессовую ситуацию: засушливое, дождливое, холодное лето, недостаток удобрений, наличие вредителей посевов (зерна). Подобные погодные условия обеспечивают возможность хорошего сохранения в почве и растительных остатках агрессивных возбудителей, таких как F.graminearum, F.nivale и других фитопа-тогенных и сапрофитных микромицетов.
Существующая в нашей стране практика учитывать только видимые проявления фузариоза и рассматривать в качестве единственного возбудителя заболевания F. graminearum не отражает реальную ситуацию с фузари-озом и не позволяет правильно оценить его вредоносность. В результате исследований установили, что на тест-объекте стилонихиях 8,1% образцов показали выраженную токсичность; 2,7% образцов - слабую токсичность. На белых мышах токсичность не была зарегистрирована, кожная проба на кроликах была положительной в 2,7% образцов. Следовательно, большая часть кормов является условно доброкачественной (по результатам данного теста), 2,7% токсичных образцов не рекоменду-
ется скармливать. В то же время результаты исследования выявили тот факт, что официальная интерпретация результатов требует корректировки в зависимости от вида животных. Так, например, в случае токсичности на стилонихиях (первичный скрининг) и отсутствии токсичности на мышах и кроликах (основные методы) официально корм считается нетоксичным, но учитывая, что в пищеварении у жвачных особая роль принадлежит микрофлоре рубца, в том числе инфузориям, корм необходимо считать токсичным. Как следствие нами регистрировались уже в осенний период 2017 года при скармливании животным заготовленных кормов сена, силоса, зерна пораженных фузариозом культур, случаи микотоксикозов животных, и что характерно - коров.
Заключение. В результате микологических исследований кормов Республики Татарстан, установили, что широкое распространение имели грибы рода Aspergillus, Penicillium sp. и Trihoderma sp., но наиболее распространённым было поражение кормов грибами рода Fusarium. Это было спровоцировано погод-но-климатическими условиями 2017 г. Общее число грибов составляло от 1х102 до 5х103 (КОЕ/г корма), что не превышает ПДК, однако изоляты Fusarium выделенные в: Апастовском, Елабужском, Актанышском и Кукморском районах, показали высокий токсиген-ный потенциал - продуцировали микотоксины Т-2 и ДОН. Что в последующем подтвердилось вспышками микотоксикозов в ряде хозяйств Рт.
Литература
1. Микотоксины (в пищевой цепочке): монография / К.Х.Папуниди, М.Я.Тремасов, В.И.Фисинин [и др.]. - 2-е изд., доп. - Казань: ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», 2017. - 158 с.
2. Микотоксикозы животных (этиология, диагностика, лечение, профилактика) / А.В.Иванов, М.Я.Тремасов, К.Х.Папуниди, А.К.Чулков. - М.: Колос, 2008. - 140 с.
3. Актуальные проблемы ветеринарной токсикологии / М.Я.Тремасов, К.Х.Папуниди, Э.И.Семенов, Е.Ю. Тарасова // Вестник ветеринарии. - 2012. - № 4 (63). - С. 16-18.
4. Оценка токсичности кормов по регионам Российской Федерации / С.А.Семенова, Р.М.Потехина, Э.И.Семенов [и др.] // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. - 2015. - Том 224. - С. 196-199.
5. Смирнов, У. С. Микотоксины: фундаментальные и прикладные аспекты / У.С.Смирнов, Ф.М.Зайченко, И.Г.Рубежняк // Современные проблемы токсикологии. - 2000. - № 1. - С. 2-12.
6. Грибы продуценты афлатоксина В1 в Поволжье / А.В.Иванов, С.А.Танасева, О.К.Ермолаева, Э.И. Семенов // Успехи медицинской микологии. - 2014. - Том. 13. - С. 347-349.
7. Фузариоз зерновых культур / Т.Ю.Гагкаева, О.П.Гаврилова, М.М.Левитин, К.В.Новожилова / Защита и карантин растений. - 2011. - № 5. - С. 2-3.
8. A European database of Fusarium graminearum and F.culmorum trichothecene genotypes / M. Pasquali [et al.] // Frontiers in Microbiology. - 2016. - Vol. 7, APR. - P. 00406.
9. Effect of abiotic stressors on T-2-producing environmental isolates of Fusarium sporotrichioides / G.M.Yumangulova [et al.] // Journal of Pharmacy Research. - 2017. - Vol. 11, Issue. 10. - P. 1226-1229.
10. Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса свиней при афлатоксикозе / Л.Е.Матросова, Э.И.Семенов, С.А.Танасева, С.Ю.Смоленцев // Мясная индустрия. 2015. - № 5. С. 51-52.
11. Методические рекомендации по диагностике, профилактике и лечению микотоксикозов животных / Э.И.Семенов [и др.]; утв. Минсельхозoм России 19.10.2016. - М., 2016.
12. Сравнение методов выявления в зерне токсинопродуцирующих грибов рода Fusarium / Т.Ю.Гагкаева, О.П.Гаврилова, А.С.Орина [и др.] // Микология и фитопатология. - 2017. - Том. 51, № 5. - С. 292-298.
mycological assessment of feed in the republic of tatarstan
Potekhina R.M. - Candidate of Biological Sciences; Ermolaeva O.K. - Candidate of Biological Sciences;
Sagdeeva Z.Kh. - Junior Researcher, Semenov E.I. - Candidate of Biological Sciences.
Federal Center for Toxicological, Radiation and Biological Safety, Kazan (e-mail: vnivi@mail.ru).
A mycological analysis of the feed of the Republic of Tatarstan was conducted in the period of 2017-2018 years. The wide distribution of fungi Aspergillus, in particular A. flavus and A.fumigatus, Penicillium sp, Trihoderma sp., in particular Trihoderma veride was determined. The most widespread were the fungi of the genus Fusarium and especially F.graminearum. That is connected with climatic specific features - a wet and cool summer of 2017. No dangerous isolates of Stachyobotrys alternans and Dendrodochium toxium were found. The total number of fungi ranged from IxlO2 to 5x10 (CFU/g feed), which did not exceed the permissible level. However, isolates of the genus Fusarium, isolated in: Apastovsky, Elabuzhsky, Aktanyshsky and Kukmor districts, showed a high toxigenic potential - T-2 toxin and deoxynivalenol (DON) mycotoxins were produced. It was established that 8.1% of the samples on the test object Stilonykhia showed marked toxicity, 2.7% of the samples showed weak toxicity. In white mice, toxicity was not recorded, the skin test on rabbits was
