CC BY
9
АФА-В-10. Воздух аспирировали со скоростью 1 л в минуту. Некоторые данные о поглощении формамида представлены в таблице.
Как видно из таблицы, формамид в основном поглощается в 1-м поглотительном приборе; в поглотительных приборах обнаружено продукта значительно больше, чем в смывах с фильтра. Однако не исключена возможность образования аэрозоля конденсации. Отмечается получение значительно больших количеств формамида в тех случаях, когда впереди поглотительных приборов фильтр не помещали (пробы 2, 4, 6, 9, 10, 11).
С учетом полученных результатов важно было установить полноту извлечения формамида из фильтров АФА-В-10. Для этого на фильтры наносили стандартный раствор формамида, содержащий 20, 30, 60, 100, 200, 600 и 1000 мкг. Фильтр обрабатывали несколько раз дистиллированной водой и определяли в смыве содержание по гидроксамовой реакции. Выяснили, что большие концентрации формамида извлекаются из фильтра примерно на 50%, а меньшие количества — примерно на 80%. В связи с изложенным в дальнейшем поглощение формамида мы проводили в поглотительные приборы с пористой пластинкой.
Результаты исследования позволяют нам рекомендовать для определения формамида в воздухе метод, основанный на поглощении его в дистиллированную воду с последующим анализом по гидроксамовой реакции.
Отбор пробы воздуха проводят в 2 последовательно соединенных поглотительных прибора с 6 мл дистиллированной воды в каждом. Для анализа к 3 мл пробы из каждого поглотительного прибора прибавляют по 1 мл 10% раствора гидроксиламина, по 0,2 мл 1 н. раствора щелочи и ставят на 15 мин. в кипящую водяную баню. После охлаждения добавляют по 0,5 мл 10% раствора хлорида окисного железа, приготовленного на 0,1 н. растворе соляной кислоты, и через 30 мин. устанавливают оптическую плотность раствора при длине волны 495 ммк в кювете 10 мм. Для количественного определения пользуются градуировочным графиком, полученным при измерении оптических плотностей шкалы стандартов. Шкалу стандартов готовят от 5 до 100 мкг формамида с интервалом 10 мкг. Можно также визуально измерить интенсивность окрашивания пробы с одновременно приготовленной шкалой стандартов.
ЛИТЕРАТУРА
Дюжев а Ю. В. Гиг. и сан., 1962, № 1, с. 47. — Кузьмичева М. Н. Гиг. труда. 1961, №5, с. 58.— Русских А. А. Там же, 1965, №9, с. 59. — М a s s-mann W., Arch. Gewerbepath. Gewerbehug., 1955, Bd 12, S. 91.
Поступила 25/IX 1967 г.
УДК 576.858.07
МЕТОДИКА КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИРУСА В ВОЗДУХЕ И НА ПОВЕРХНОСТЯХ ПРИ АЭРОЗОЛЬНОМ МЕТОДЕ ИХ ОБСЕМЕНЕНИЯ
Г. И. Карпухин, А. В. Слободенюк, В. К. Слободенюк Институт вирусных инфекций Министерства здравоохранения РСФСР, Свердловск
Большинство авторов, сравнивая методы выделения вирусов из воздуха, отмечают высокую улавливающую способность приборов, основанных на принципе сифонирования жидкости струей аспирируемого воздуха (В. В. Влодавец с соавторами; А. Ф. Визитиу1; X. Л. Галикеев;
С. Я. Гайдамович и В. В. Влодавец; К. С. Кичатова, и др.). Однако до настоящего времени методика количественного обнаружения вирусов в воздухе практически не разработана. Отрицательной стороной применяемых методов количественного определения вируса на различных объектах (нанесение вируссодержащей жидкости на различные объекты в виде капель по 0,2—0,8 мл) является неравномерное распределение вирус-содержащего материала на поверхности (А. А. Беляев; Е. К. Серебрякова; Dress). Поэтому данные, полученные авторами в примерно одинаковых условиях опыта, разноречивы и трудно сравнимы.
Нашей целью была отработка методов количественного определения вирусов в воздухе и на объектах внешней среды. Для методики количественного исследования вирусов в воздухе были найдены оптимально-минимальные дозы распыляемого вируссодержащего материала на 1 м3 воздуха, количество улавливающей жидкости (адсорбента) и объем воздуха, в котором вирус улавливался бы прибором Речменского в достаточно высоких титрах.
Экспериментальные исследования проводили в герметизированной камере объемом 11 м3. Температуру и относительную влажность постоянно регистрировали приборами, установленными внутри камеры. Движение воздуха (0,3 м/сек) создавал специально установленный вентилятор. В качестве экспериментальной модели использовали вирусы респираторной аденовирус типа 3 с титром 107>2 ТЦД5о/Мл) и энте-ральной (поливирус типа 3 с титром 107-4 ТЦД50/Мл и вирус Коксаки В1 с титром 106'3 ТЦДзо/мл) групп. Распыляли минимальные количества вируссодержащей жидкости до аэрозольного состояния распылителем, создававшим до 80% частиц величиной 3—5 мк. Пробы воздуха забирали через определенное время со скоростью 10 л/мин. Адсорбентом служила среда № 199 с добавлением по 100 ЕД пенициллина и стрептомицина. Количественное определение вируса проводили на культуре клеток НЕр-2. Титр вируса определяли по методу Рида и Менча. Окончательные результаты учитывали на 7-е сутки.
Предварительные теоретические расчеты показали, что при распылении вируссодержащей жидкости с титром 107-0 ТЦД50/Мл в условиях взятого объема камеры (11 м3) вирус должен выделяться из 1 л протянутого воздуха в титре 103'0 ТЦД5о/Мл- Однако фактическое количество уловленного вируса имело расхождение с тем, которое предусматривали теоретические данные, поскольку последние не учитывали седиментацию частиц аэрозоля, инактивацию вируса в воздухе и коэффициент эффективности прибора.
Исследования были начаты с распыления минимальных количеств вируссодержащего материала, при которых по теоретическим расчетам вирус должен постоянно выделяться из аэрозоля. Результаты опытов по выделению полиовируса типа 3 из воздуха через 30 мин. после создания аэрозоля представлены в табл. 1. Как видно из табл. 1, при создании аэрозоля из 0,005 мл вируссодержащей жидкости на 1 м3 объема камеры и пропускании 10—100 л воздуха вирус удавалось обнаружить лишь в неразведенном адсорбенте. Увеличение количества распыляемой вируссодержащей жидкости до 0,01 мл/.м3 позволило выделить вирус в титре 1020 ТЦДбо/мл из объема воздуха 50 л и 102-5 ТЦД50/Мл из объема 100 л. Увеличение дозы распыляемого вируссодержащего материала до 0,08 мл/м3 не оказывало заметного влияния на титр выделенного вируса. И только десятикратное увеличение дозы распыляемой вируссодержащей жидкости позволило выделить вирус в титре Ю3>0-3'5 ТЦД5о/Мл. Пяти-десятикратное увеличение объема вируссодержащей суспензии за счет добавления к ней среды № 199 при одной и той же дозе не влияло на титр выделенного вируса.
1 Кандидатская диссертация. Кишинев, 1962.
Таблица 1
Зависимость количества выделенного вируса полиомиелита
типа 3 от объема протянутого воздуха и количества распыляемой вируссодержащей жидкости (при ¿=20—22° и относительной влажности 59—63%).
Объем протянутого воздуха (в л) И ю 3 д 5 "С с* Средний титр выделенного вируса (в 1вТЦД5п/лм) в зависимости от количества распыляемой вируссодержащей жидкости (в мл/м* воздуха)
0,005 0,01 0,02 0,04 0,08 0.1 1.0
10 25 50 100 7,0 7,0 7,0 7,0 н/Р1 Не п[ н/Р1 н/Р1 Не п юводил 2,0 2,5 эоводи. ось 2,0 2,5 10СЬ 2,5 3,0 2,5 3,0 н/Р1 1.2 3,0 3,5 н/р» 2,0 4,0 4,2
• Вирус выделен только из неразведенной улавливающей жидкости.
Установлена прямая зависимость между титром выделенного вируса и объемом пропускаемого воздуха. Увеличивая объем пропускаемого воздуха через аппарат с 10 до 100 л, мы смогли в несколько раз повысить количество выделенного вируса при использовании 5—2,5 мл адсорбента (среда № 199). При уменьшении адсорбента до 1,5 мл количество улавливаемых вирусных частиц заметно снижалось.
Уточненная методика количественного определения вирусов из воздуха проверена в максимально стандартных условиях опыта [одинаковые дозы распыляемой вируссодержащей жидкости (1 мл), объемы
пропущенного через аппарат воздуха (50 л) и оптимальные количества адсорбента (2,5 мл)] на моделях представителей респираторной и кишечной групп вирусов. Количество выделенного вируса устанавливали в различные сроки после распыления. Сравнительная количественная характеристика выделенного вируса в зависимости от исходного титра и времени после распыления представлена в табл. 2.
Из табл. 2 видно, что
количество выделенного вируса находится в прямой зависимости от величины исходного титра вируссодержащей жидкости. Наибольшее количество вируса выделялось через 30—60 мин.; в более поздние сроки титр его постепенно снижался, а через 6 часов вирус удавалось обнаружить только в неразведенном адсорбенте.
Изложенная нами методика позволяет не только выделить вирус из воздуха, но и получить его в достаточно высоком титре (Ю3'°—103'5 ТЦДбо/мл). Эту методику можно использовать в экспериментах по изучению эффективности действия различных вирулицидных
Таблица 2
Количественное определение вирусов в в зависимости от исходного титра и времени отбора проб из воздуха
О- 3 Средний титр выделенного
|- * я вируса (в 1в ТЦ.Д54/ЛЛ)
н - 1Д в пробах воздуха, взятого
Вирус 1 3 в различные сроки
ч О
О >»00 6 ча-
х а.— £1« 30 мин. 1 час 3 часа сов
Полиомиелит
тип 3 ... 7,2 3,2 3,2 3,0 н/Р1
Аденовирус Н/Р1
тип 3 ... 7,4 3,3 3,2 3,0
Коксаки В
тип 1 ... 6,3 2,2 2.2 2,0 Н/Р1
1 Вирус выделен только из неразведенной улавливающей жидкости.
средств и динамики отмирания вирусов во внешней среде, отработке методов аэрозольного заражения экспериментальных животных и в других случаях работы с вирусными аэрозолями.
Для обоснования методики количественного определения вируса на поверхностях при аэрозольном методе их обсеменения были найдены следующие показатели: минимальная доза вируссодержашего материала для обсеменения поверхностей, при которой можно провести количественную индикацию вируса; оптимальная экспозиция; наименьшая площадь и минимальное количество смывной жидкости, необходимое для снятия вируса с единицы поверхности в высоком титре.
Жидкость, содержащую вирус (адено-, полиовирус и вирус Кокса-ки В1), распыляли до аэрозольного состояния в герметической камере объемом 0,5 м3. Для создания аэрозоля использовали 2 типа распылителей, из которых один давал 80% частиц размером 1—20 мк, а другой— 75—80% частиц размером 20—30 мк. Образцы исследуемых поверхностей (стекло, крашеное дерево, линолеум, полихлорвинил) размерами 10x10, 5x5 и 3x3 см укладывали в кассеты на дно камер. Через определенные сроки после распыления вируссодержашего материала кассеты с поверхностями извлекали из камеры. Вирус с поверхностей смывали средой № 199 с добавлением антибиотиков. При распылении жидкости, содержащей полиовирус в объеме 10 мл/м3, распылителем, дающим мелкодисперсный аэрозоль, вирус постоянно обнаруживали на исследуемых поверхностях. Уменьшение объема вируссодер-жащей жидкости до 6 мл/м3 не позволило выделить вирус, поэтому в дальнейшем был использован распылитель, дающий частицы большей величины (20—30 мк). В этом случае вирус выделяли с поверхностей в десятикратных разведениях при распылении 6—3 мл вируссодержа-щей жидкости на 1 м3 воздуха. Максимальный титр выделенного вируса не превышал 104'0 ТЦДбо/мл- Дальнейшее уменьшение распыляемого вируссодержашего материала по 2 мл/м3 позволило выделить вирус с поверхности только в неразведенной смывной жидкости.
В опытах была выбрана 10-минутная экспозиция обсеменения поверхностей. Уменьшение времени экспозиции обсеменения сказывалось на количестве выделяемого вируса.
Для выбора минимальных размеров площадей, с которых вирус снимался бы в высоком титре, были взяты поверхности размерами 10X10, 5X5 и 3X3 см.
Таблица 3
Выделение полиовируса типа 3 с поверхности I в зависимости от объема смывающей жидкости
Вируссодержащую жидкость распыляли из расчета 3 мл на 1 м3 воздуха. Смывную жидкость наносили на поверхность пипеткой и через 3 мин. собирали во флакон. Таким способом поверхность промывали 3—5 раз. Результаты опытов представлены в табл. 3. Как видно из табл. 3, наиболее пригодными для исследования оказались поверхности размерами 10X10 и 5X5 см. Так как поверхность 10x10 см трудно смывать малыми количествами жидкости, а при уменьшении объема титр вируса снижается, то оптимальной является поверхность размером 5X5 см при объеме смывающей жидкости 1,5 мл. Данные опытов с другими вирусами подтвердили указанный вывод.
Размер поверхности (В см) Условия опыта Титр выделенного вируса (в 10 тцДд в зависимости от объема смывающей жидкости (В МЛ)
5 3 1.5
10X10 5X5 3X3 Объем распыляемой вируссодержащей жидкости 3 мл/м3 Экспозиция 10 мин. 3.0 3,0 2,0 3,3 3,3 2,3 3,5 3,3 2,3
Таким образом, вирус в достаточно высоком титре постоянно обнаруживали в смывах с поверхностей 5x5 см при распылении 3 мл вирус-содержащей жидкости на 1 м3 воздуха и 10-минутной экспозиции обсеменения.
Стандартность выбранных условий проверена на различных указанных выше покрытиях. Достоверности различий в количестве выделенного вируса найти не удалось.
Описанная методика испытана также с вирусом Коксаки В1 (исходный титр Ю6-5 ТЦД50/мл) и аденовирусом типа 3 (исходный титр Ю7-2 ТЦД50/мл). Титр выделенного с поверхностей вируса Коксаки В1 колебался в пределах Ю2-5-3-0 ТЦД5о/Мл, аденовируса типа 3 — в пределах 103-3—104 0 ТЦД50/мл.
Выводы
1. Распыляемая вируссодержащая (Коксаки В1, аденовирус типа 3 и полиовирус типа 3) жидкость с титром 106,5—107,0 ТЦД50/Мл в объеме 0,1 мл на 1 м3 воздуха является минимальной дозой, при которой вирусы выделяли с помощью прибора Речменского в титре 103>° ТЦД50/мл при пропускании через прибор 50 л воздуха.
2. Оптимальным количеством адсорбента (среда № 199) является 2,5—3 мл на 1 аппарат Речменского.
3. Количественное определение вируса в воздухе герметизированных помещений при соблюдении указанных выше условий возможно в течение 30—180 мин.
4. Объем распыляемой в,ируссодержашей жидкости 3 мл/м3 воздуха камеры с исходным титром 10'-0 ТЦД50/ мл является минимальным, при котором вирус выделяется с поверхности в титре 103'0 ТЦД50/мл с площади 5x5 см в 1,5 мл среды № 199.
ЛИТЕРАТУРА
Беляев А. А. Труды Центрального научно-исслед. дезинфекционного ин-та. М., 1963, т. 16, с. 67. — Влодавец В. В.. Га Адамович С. Я., Обухова В. Р. Вопр. вирусол., 1960, № 6, с. 670. — Гайдамович С. Я., В л о д а в е ц В. В. Там же, 1963, № 3, с. 349. — Г а л и к е е в X. Л. Врач, дело, 1956, № 7, с. 751.— К и ч а т о в а К. С. Лабор. дело, 1961, № 3, с. 40. — Серебрякова Е. К- Труды Центрального научно-исслед. дезинфекционного ин-та. М„ 1965, т. 17, с. 53.— Dress О., Zbl. Bakt., I Abt. Orig., 1958, Bd 173, S. 539.
Поступила 20/11 1968 г.
УДК 617-001.28-036.12-092.9-032:611.31]-07:616.155.3-07в.5
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ЦИТОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА КЛЕТОК БЕЛОЙ КРОВИ ПРИ ИЗУЧЕНИИ ВЛИЯНИЯ МАЛЫХ ДОЗ УРАНА НА ЖИВОТНЫЙ ОРГАНИЗМ
Канд. мед. наук Л. Ф. Родионова
Ленинградский научно-исследовательский институт радиационной гигиены Министерства здравоохранения РСФСР
Изучая состояние 'периферической крови в условиях длительного поступления в организм белых крыс через рот раствора азотнокислого уранила в дозе 1,88Х10~8 г/г (врасчетема уран), примерно соответствующей действующей ПДК природного урана в водоемах (0,6 мг/л), мы
