CC BY
21
ВЫЖИВАЕМОСТЬ ВИРУСА ПОЛИОМИЕЛИТА И ДРУГИХ
ЭНТЕРОВИРУСОВ НА ОВОЩАХ
Младший научный сотрудник Г. А. Багдасарьян
Из Института общей и коммунальной гигиены имени А. Н. Сысина АМН СССР
и Института полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН СССР
•
Многочисленными зарубежными исследованиями [Альбано, Бонетти (Albano, Во-netti, 1957); Келли (Kelly, 1957); Келли и др., 1957; Пол, Трэск и Гард (Paul, Trask, Gard, 1940); Родес и др. (Rhodes, 1950)] установлено частое присутствие вируса полиомиелита и других энтеровирусов (Коксаки, ECHO) в сточных водах как во время эпидемий, так и в межэпидемические периоды. В сточной воде и в осадке сточных вод вирус полиомиелита выживает до 4 месяцев. Гоулет и др. (Goulet, 1960) экспериментальным путем установили, что экстракты из некоторых растений избирательно подавляют действие ряда вирусов из группы ECHO. Так, экстракт гриба Cal-vatia gigantea подавляет токсичность ЕСНО-4 и ЕСНО-11, экстракт из цветка орхидеи Cattleya — вирус ЕСНО-2. Е. Н. Левкович и M. Н. Суховой (1957) удалось установить, что на огурцах, загрязненных выделениями мух, вирус полиомиелита сохраняет свою жизнеспособность до 10 суток.
В настоящее время на земледельческих полях орошения получает распространение использование сточных вод. При этом возможно попадание энтеровирусов из сточных вод в почву орошаемых полей и обсеменение выращиваемых ими сельскохозяйственных растений.
Целью настоящего исследования явилось изучение длительности выживания энтеровирусов на овощах в процессе хранения последних в домашних условиях.
Исследование проводили с 5 штаммами вирусов: патогенным штаммом Луговской и аттенуированым штаммом LS с 2ав типа 1, ЕСНО-7а, ЕСНО-9а, Коксаки В-3. Изучение выживаемости указанных штаммов на овощах — помидорах, огурцах, салате, редисе — проводили в домашних условиях. Овощи сохраняли при комнатной температуре (от 18 до 22°) и в холодильнике (от 6 до 10°). Выбор овощей был обусловлен тем, что многие из них употребляются в пищу обычно в свежем виде, без предварительной термической обработки, и почти все в процессе роста и созревания соприкасаются с почвой, в которую при орошении сточной водой могут быть внесены те или иные энтеровирусы. Кроме того, были поставлены опыты по выживаемости вируса полиомиелита (патогенный и аттенуированный штаммы типа 1) в свежеприготовленном морковном соке, так как последний широко применяется в детском питании.
Длительность каждого опыта была небольшой — 10—15 дней, так как практически в домашних условиях указанные овощи более длительное время не хранятся. Однако в отдельных опытах этот срок был увеличен до 20—22 дней, а в одном опыте— до 68 дней с тем, чтобы можно было проследить динамику падения титра вируса полиомиелита и других энтеровирусов в процессе хранения овощей. Всего было обработано и исследовано на присутствие энтеровирусов 510 проб овощей.
Тщательно вымытые овощи взвешивали по 50 г. Так как овощи не разрезали, то вес отдельных проб иногда достигал 60—70 г. В таких случаях количество вируса, которым заражали пробу, соответственно увеличивали. Навески овощей помещали в стерильные химические стаканы емкостью 150—200 мл. Подготовленные пробы заражали из расчета 1 мл соответствующего разведения вируса на 100 г пробы овощей. В различных опытах использовали неразведенную взвесь вирусов или разведения их 1 : 10 и 1 : 100 в физиологическом растворе. В 5 опытах (по одному на каждый вирус) пробы огурцов, хранившихся при температуре холодильника, заражали взвесью, при готовленной разведением вирусов 1 : 1000. Использовавшиеся для заражения проб овощей взвеси вирусов имели следующие титры lg ТЦД50/мл1: LS с 2ав — 6,7;.штамм Луговского — 7,7, ЕСНО-7а — 8,4, ЕСНО-9а — 5,5, Коксаки В-3 — 7,04.
Вирус по возможности равномерно распределяли по поверхности овощей, в пробах салата — как по поверхности пробы, так и между отдельными листиками. Зараженные пробы оставляли в боксе, если предполагалось хранение их при комнатной температуре, или помещали в холодильник.
Первый отбор проб в каждом опыте производили через час после заражения, затем через 2, 4, 6 и т. д. суток. Сроки отбора проб в различных опытах варьировали в зависимости от температуры, при которой осуществлялось хранение данных проб, и от общего количества проб в опыте. При отборе проб зараженные навески овощей стерильными пинцетами переносили в стерильные химические стаканы, куда добавляли физиологический раствор из расчета 100 мл на 100 г пробы овощей. Пробу тщательно встряхивали, смыв переносили пастеровской пипеткой в инсулиновый флакон. Для подавления роста микрофлоры в смыв добавляли пенициллин и стрептомицин из расчета по 2000 ЕД на 10 мл смыва и микостатин — 500 ЕД на 10 мл смыва. Наличие и концентрацию вирусов в смывах определяли путем титрования по цитопатогенному дейст-
1 ТЦД50/мл — доза вируса, дающая цитопатогенное действие в культурах ткани в 50% случаев.
7 Гигиена и санитария, № 3
97
вию на культуре почечной ткани обезьян (по 4 пробирки на разведение), заражение производили по 0,2 мл смыва; контакт — один час при температуре бокса, без слива. Титр вирусов вычисляли по методу Рида и Менча.
Предварительно проведенные заражения культуры клеток почечной ткани обезьян смывами со всех видов овощей показали отсутствие токсического действия смывов на клеточную культуру. Вирулицидного действия смывов на изучавшиеся энтерови-русы также не было отмечено.
Кроме того, были поставлены опыты по выяснению возможного вирулицидного действия морковного сока на вирус полиомиелита типа 1 (патогенный штамм Лугов-ской и аттенуированный штамм ЬБ с 2ав). К свежеприготовленному морковному соку добавляли неразведенную взвесь указанных штаммов и их разведения 1 : 10 и 1 : 100 («з расчета 0,5 мл соответствующего разведения вируса на 4,5 мл морковного сока. Контакт вируса с морковным соком продолжался в течение Р/2 часов при 20 и 37°. Контролем служили соответствующие разведения вируса в физиологическом растворе и питательной среде (раствор Эрля с лактозой, рН = 7,2) при той же температуре.
Результаты выживаемости штаммов энтеровирусов на помидорах при хранении их в холодильнике и при комнатной температуре показали определенную зависимость падения титра вирусов (^ ТЦДзо¡мл) от температуры, при которой хранились зараженные овощи. Если при температуре холодильника на 10-й день хранения помидоров падение титра у всех энтеровирусов происходит в пределах 1, то при хранении помидоров при комнатной температуре за тот же срок титр вирусов падает приблизительно на 2. Аналогичные результаты были получены при анализе данных о выживаемости энтеровирусов на огурцах. Так, на 11-й день хранения последних при комнатной температуре происходит падение титра у всех энтеровирусов примерно на 2, а титра, вируса ЕСНО-7а — на 2,5.
В опытах по выживаемости энтеровирусов на листьях салата отмечается значительное падение титра вирусов (до 2) при хранении его как при комнатных условиях,, так и в холодильнике. Зависимость падения титра вирусов от температуры в этих, опытах значительно менее выражена и определяется разницей примерно 0,5 на 11-е сутки. На 15-е сутки хранения эта разница почти совсем исчезает. Некоторое отличие результатов выживаемости энтеровирусов на листьях салата, возможно, объясняется имевшим место некоторым различием в способе заражения салата по сравнению с огурцами и помидорами. Помидоры и огурцы заражали по возможности равномерно по всей поверхности, нанесение же вируса на пробы салата производили как на поверхность пробы, так и между отдельными листьями; возможно, при этом создавались иные условия для переживания вирусов внутри пробы (изменения влажности и температуры в пробе).
Вирус полиомиелита типа 1 (патогенный штамм Луговской) выживал на редисе при хранении последнего в холодильнике при температуре от б до 10° в течение 68 дней — срок, который, безусловно, превышает все возможные сроки хранения редиса в домашних условиях. На 68-й день опыта титр вируса был равен 2,7 (500 тканевых инфекционых доз вируса в 1 мл смыва). Представленные данные свидетельствуют о том, что при попадании на овощи вируса полиомиелита последний выживает на них длительное время — более 2 месяцев.
Исследования показали, что вирус ЕСНО-9а при исходном титре 3,5 выживает на огурцах и помидорах при комнатной температуре в течение 3—5 суток. В то же время тот же вирус с исходным титром 2,5, но в условиях холодильника выживает на овощах более 15 суток. Аналогичные результаты были получены и в отношении вируса Коксаки В-3. Последний при исходном титре 5 выживал при комнатной температуре на огурцах и помидорах в течение 5 суток, а при исходном титре в 10 раз меньшем (4), но при температуре холодильника выживал более 13 суток.
Важно подчеркнуть, что это были единственные опыты, в которых можно было констатировать гибель вируса на зараженных овощах. Во всех остальных случаях вирусы были выделены из смывов с зараженных овощей на протяжении всего срока опытов. Приведенные данные показывают, что при попадании на овощи вируса полиомиелита и других энтеровирусов последние могут сохранять жизнеспособность дли-, тельное время, особенно при хранении овощей в условиях пониженной температуры,
Опыты, поставленные нами с морковным соком, показали отсутствие падения титра вируса полиомиелита типа 1 штаммов ЬБ с 2ав и Луговской при разведении последних 1 : 10 и 1 : 100 свежеприготовленным морковным соком по сравнению с разведением их в питательной среде и физиологическом растворе (контроль).
Полученные данные свидетельствуют об отсутствии вирулицидного действия морковного сока при испытании указанного штамма вируса полиомиелита при описанных условиях опыта (длительность контакта и температура хранения).
Выводы
1. Установлено, что вирус полиомиелита и другие энтеровирусы (ЕСНО-7а, ЕСНО-9а и Коксаки В-3) могут длительно выживать на овощах. В частности, при температуре холодильника (от 6 до 10°) вирус полиомиелита типа 1 патогенный штамм: Луговской может выживать на овощах (редис) более 2 месяцев.
/
2. Температурные условия хранения овощей оказывают влияние на быстроту падения титра энтеровирусов в процессе хранения. Если при температуре холодильника (от б до 10°) на 10—11-й день хранения помидоров и огурцов, зараженных энтерови-русами, падение титра (ТЦД5оМл) последних происходит в пределах 1, то при хра± нении этих овощей при комнатной температуре (от 18 до 22°) за тот же срок титр вирусов падает приблизительно на 2.
3. В практических условиях хранения овощей вирусы не теряют своей жизрш-способности в течение всего срока хранения. Таким образом, загрязненные овощи могут явиться источником заражения вирусом полиомиелита и другими энтеровирусными инфекциями.
4. Морковный сок не обладает вирулицидным действием в отношении вируса полиомиелита типа 1 аттенуированного штамма ЬБ с 2 ав <и патогенного штамма Лу-говской при длительности контакта 1 !/г часа при 20 и 37°.
ЛИТЕРАТУРА
Левкович Е. Н., Сухова М. Н. Мед. паразитол. и паразитарн. бол., 1957, 3, стр. 343.— Alba по А., В о n е ft i F., Boll. 1st. sieroter. Milan, 1957, v. 36, p. 9t 468. —Goulet N. R., Cochran K. W., Brown G. C., Proc. Soc. exp. Biol. (N. Y), 1960, v. 103, p. 96.— Kelly S., Acta med. scand., 1957, v. 159, p. 63. —Kelly S, Winsser J.. Winkelstein W., Am. J. publ. Hlth., 1957, v. 47, p. 72. — M e 1 n i с k JL Am. J. Hyg., 1949, v. 49, p. 8. — P a u I J. R., Trask J. D, Gard S.t J. exp. Med. 1940, v. 71, p 765. — Nack W. N.. Ma 11 ma nn W. L., Bloom H. N. et al., Sewagl. Industr. Wastes, 1958, v. 30, p. 957. —Rhodes A. J., Clark E., Knowles D. S., Canad. J. publ. Hlth., 1950, v. 41, p. 248.
Поступила 26/V 1961 r.
N
Ъ Ъ Ъ
в
