CC BY
8
3. Высокий уровень ФАЛК в покое и снижение активности после нагрузок с отсутствием восстановления на 30-й минуте отдыха характеризуют снижение функциональных возможностей организма и свидетельствуют о чрезмерности выполняемой физической нагрузки.
4. Изменение показателей ФАЛК может быть использовано при гигиеническом нормировании одноразовых физических нагрузок, применяемых в подготовке юных спортсменов.
ЛИТЕРАТУРА. КендышИ. Н. — «Успехи совр. биол.», 1972, т. 73, вып. 3, с. 342. — Летунов С. П., МотылянскаяР. Е. — «Теор. и практ. физ. культуры», 1971, № 12, с. 29—35.—Нарциссов Р. П. Цитохимия ферментов лейкоцитов в педиатрии. Автореф. дис. докт. М., 1970.—Сухарев А. Г. Гигиенические принципы нормирования двигательной активности школьников. Дис. докт. М., 1972.—ЯковлевН. Н.—«Теор. и практ. физ. культуры», 1962, №7, с. 25-29.
¡Поступила 18/VI 1976 г.
УДК в 12.015.34:547.281.11-087.4
Е. Ф. Малыгина, В. А. Цендровская
МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СВОБОДНОГО ФОРМАЛЬДЕГИДА В БИОСРЕДАХ С ПРИМЕНЕНИЕМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Всесоюзный научно-исследовательский институт гигиены токсикологии пестицидов полимерных и пластических масс, Киев
Для определения свободного формальдегида в биосредах существует 2 метода: первый, описанный ЫазИ, применяется для определения формальдегида (НСОН) в печени подопытных животных; второй, основанный на способности формальдегида восстанавливать окраску бесцветного раствора фуксинсернистой кислоты (П. А. Розенберг и Н. К. Бялко), рекомендуется для обнаружения НСОН в органах животных^ Однако эти методы оказались недостаточно чувствительными при определении НСОН в органах подопытных животных, подвергавшихся длительной затравке НСОН на уровне, соответствующем его выделению из полимерных материалов. Нами разработан метод, в основу которого положена реакция взаимодействия НСОН с димедоном (5,5-диметилдигидрорезорцином), приводящая к образованию устойчивого соединения — формдимедона (Е. А. Перегуд). Отделение форм-димедона от непрореагированного димедона и примесей, извлекаемых из органов, осуществляли с помощью тонкослойной хроматографии.
Синтез формдимедона проводят следующим образом: в стакан с 5 мл 4% раствора формальдегида добавляют 0,5 мл 5% спиртового раствора димедона, подкисляют несколькими каплями 0,1 н. раствора НС1 в присутствии бромфенолового синего. Затем прибавляют несколько капель 0,1 н. раствора ЫаОН до изменения окраски на красно-фиолетовую и 5 мл буферного раствора. Содержимое стакана оставляют на 12 ч, после чего фильтруют через стеклянный фильтр с пористой пластинкой № 4. Осадок промывают бидистиллированной водой до отрицательной реакции на ион хлора (проба с раствором AgNOз) и сушат до постоянной массы в течение 4,5 я при температуре 100°. Чистый продукт синтеза формальдегида с димедоном (форм-димедон) используют для приготовления стандартного раствора с содержанием 500 мкг/мл. В качестве растворителя используют этиловый спирт. Разработаны условия хроматографирования формдимедона в тонком слое сорбента.
Оказалось, что формдимедон можно хорошо отделить от непрореагированного димедона на слое силикагеля марки КСК.
Пластины для хроматографии готовят следующим образом: 14 г силикагеля и 1 г гипса, просеянных через сито с частотой ячеек 100 меш, смешивают с 50 мл дистиллированной воды и интенсивно встряхивают в плоско-
донной колбе в течение 20 мин. Однородную массу наносят на 10 пластинок размером 9x12 см и встряхиванием добиваются равномерного распределения слоя на поверхности каждой пластины. Затем стеклянные пластины сушат на воздухе и в дальнейшем хранят в эксикаторе.
При использовании в качестве элюента хлороформа димедон дает пятно на старте, а формдимедон — с #f=0,4—0,5. В качестве проявляющего раствора использовали иод-крахмальный реактив (0,005% раствор йода в хлороформе и 1 % раствор крахмала).
Чувствительность метода — 0,2 мкг на пластине.
Извлечение формальдегида проводили по описанному в литературе способу (П. А. Розенберг и Н. К. Бялко): 0,5 г печени (почки, легкие, мозг) подопытного животного тщательно растирают в ступке, желательно с кварцевым песком. Затем прибавляют 3 мл 5% трихлоруксусной кислоты, перемешивают и переносят в пробирку. Чашку дважды ополаскивают 2 мл воды и смывы также переносят в пробирку. Содержимое пробирки центрифугируют, жидкость над осадком осторожно сливают в пробирку с притертой пробкой и к фильтрату по каплям прибавляют 20% раствор NaOH до нейтральной реакции (проба с лакмусовой бумажкой). Далее прибавляют 0,2 мл раствора димедона и проводят синтез формдимедона так, как описано выше. Пробу после выдерживания в течение 12 ч при комнатной температуре переносят в испаритель, упаривают под вакуумом до объема 0,2—0,3 мл.
В период обработки органов, проведения синтеза формдимедона, упаривания растворов возможно попадание формальдегида в пробу из воздуха. Для контроля в той же постановке опыта проводят анализ соответствующего органа животного, которое не подвергалось затравке. Результаты анализа учитывают при окончательном расчете.
Контроль и пробу переносят на пластину. Во избежание потерь стенки испарителей аккуратно ополаскивают спиртом и смывы переносят в те же точки, куда были нанесены проба и контроль. Слева и справа наносят пятна стандартного раствора формдимедона в количестве (большем или меньшем), определенном в предварительных опытах.
Разделение вещества производят в камере с насыщением, на дно которой наливают хлороформ с добавлением ацетона — примерно V40 объема хлороформа. После подъема растворителя на высоту 10 см пластину вынимают, сушат на воздухе и опрыскивают хлороформенным раствором йода. На пластине появляются желтые пятна. После годсушивания пластины и обработки ее раствором крахмала пятна становятся синего цвета. Количество вещества в пробе определяют, сравнивая площадь пятен пробы с площадью пятен стандартных растворов. Количество определяемого формальдегида в органе определяется по формуле:
с,—сг . g = 05 мкг/г.
где сх — количество формальдегида в органе подопытного животного; сг — количество формальдегида в органе контрольного животного.
Метод был применен для определения формальдегида в моче, печени и почках подопытных животных.
ЛИТЕРАТУРА. Перегуд Е. А. Санитарная химия полимеров. Л., 1967, с. 60. — Р о з е и б е р г П. А., Бялко Н. К. Химические методы исследования биологических субстратов в лрофпатологии. М., 1969, с. 171—173. —Nash Т. — «Biochem J.», 1953, v. 55, p. 416.
Поступила 6/IV 1976 г.
