CC BY
4
а) хлороформ; б) «нолевая» проба; виг) исследуемые пробы. При этом под «нолевой» пробой имеют в виду пробу, приготовленную, как указано выше, но вместо раствора ПАВ добавляют дистиллированную воду. Оптическую плотность «нолевых» проб достигают применением свежеперегнан-ного хлороформа и промыванием всей посуды и кювет перед серией опытов хромовой смесью, а между опытами ополаскиванием разбавленной серной кислотой, 0,01 М однозамещенным фосфорнокислым калием, спиртом и дистиллированной водой.
Методика определения остаточных количеств анионных ПАВ на посуде заключается в следующем. Мытье посуды моющими средствами, содержащими анионные ПАВ, с ополаскиванием производят в соответствии с существующими инструкциями или требованиями эксперимента. Посуду оставляют в вертикальном положении для стекания остатков ополаскивающих жидкостей. Для промывания остаточных количеств ПАВ вымытую посуду (по 1 предмету) погружают поочередно в определенный объем дистиллированной воды (например, 16 фарфоровых химических чашек в 2 л воды). Отбирают пробы по 50 мл и анализируют, как указано выше. При применении этой методики для контроля за качеством мытья химических фарфоровых чашек, фарфоровых и пластмассовых тарелок после пользования моющими средствами на основе АБС найдены остаточные количества ПАВ (6—10 мкг на 1 предмете).
ЛИТЕРАТУРА
Климова В. А. Основные микрометоды анализа органических соединений. М., 1967, с. 115. — Н е в о л и и Ф. В. Химия и технология синтетических моющих средств. М„ 1964, с. 272. — Н о г а С е k J., Csl Hyg. Analyst, 1966, т. 11, с. 377. - Long-well J„ Maniece W., Analyst, 1955, v. 80, c. 167. — Standard Methods for Examination of Water and Wastewater. New York, 1960, c. 246. —den T о n к e 1 а а г W., В e r g -s h о f f G., Water Res., 1969, v. 3, c. 31.
Поступила 29/VII 1971 r.
УДК 6)6-008.849.5:615. 285.71-074
МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАЛЫХ КОЛИЧЕСТВ РЕПЕЛЛЕНТОВ В БИОЛОГИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛАХ
В. В. Маркина, канд. хим. наук Н. А. Каменное
Всесоюзый научно-исследовательский институт дезинфекции и стерилизации Министерства
здравоохранения СССР, Москва
Практика показала, что для защиты открытых участков кожи от насекомых по целому ряду причин лучше всего использовать репелленты в виде различных косметических форм (кремы, лосьоны и др.). Одним из серьезных недостатков большинства применяемых форм является то, что их отпугивающее действие кратковременно; это в известной мере обусловлено быстрым всасыванием репеллента в организм человека через кожу. Поэтому решение вопроса о продлении действия таких форм, а также исследование токсичности вновь синтезируемых репеллентов связаны с изучением их всасываемости через кожу. Для этого необходимо располагать достаточно достоверными методиками микроколичественного определения репеллентов в различных биологических материалах, которые могли бы быть легко использованы в экспедиционных условиях при широких испытаниях на людях тех или иных препаративных форм.
Smith и соавт. использовали с этой целью спектрофотометрический метод, однако при всех его положительных свойствах он требует специального громоздкого оборудования. Более простой метод потенциометрическо-го титрования мало специфичен и малочувствителен, особенно для исследования сложных биологических материалов. Учитывая сложность соста-
в
о
г
ва анализируемых объектов (кровь, моча, смывы с кожи), мы в основу метода положили тонкослойную хроматографию на не- я закрепленном слое окиси алюминия ч (А. А. Ахрем и А. И. Кузнецова; А. В. Ле-щеев) с последующим проявлением хрома-тограммы в парах йода.
Для обеспечения оптимальных результатов в разделении репеллентов от различ-ных метаболитов организма человека произведен подбор систем растворителей для §Г диетилтолуамида (ДЭТА), бензимина и 1 карбоксида. В состав систем введены «фоновые» растворители (неполярные или слабополярные) и «элюирующие» (сильно по-лярные). В качестве «фоновых» растворите- « лей использованы хлороформ, бензол, то- я луол, гексан и гептан, а в качестве «лю-ирующих»— этилацетат, метанол и этанол. 3 Испытуемые растворы репеллентов в виде спиртовых и ацетоновых растворов с помощью микропипетки наносили на линию й старта хроматографической пластинки параллельно со стандартными растворами репеллентов в ацетоне. После подсушива-ния на воздухе в камере производили разделение с помощью различных систем, составленных из указанных выше раство- м рителей, далее подсушивали и проявляли хроматограмму в парах йода. В результате испытания установлено, что наиболь- а. шее значение получается для ДЭТА в ж системе бензолметанол (19 : 1), бензимина в системе этилацетат — гептан (1 : 1) и карбоксида в той же системе при соотношении 2:1. Чувствительность метода составляет 0,5 мкг в пробе. Для повышения чув- ^ ствительности метода при сравнении ин- < тенсивности окраски хроматографических ^ пятен проб со стандартными можно использовать ультрахемископ. 2
Для анализа биологических материа-лов, таких, как кровь и моча, предварительно проведены исследования по подбору растворителей и экстрагентов, с помощью которых можно было бы с достаточной полнотой извлечь содержащиеся в них репел- | ленты. В качестве экстрагентов исполь-зованы хлороформ, бензол и гексан, в ка- = честве растворителей — этиловый спирт и ацетон. В пробы свежеотобранной крови и мочи вводили определенное количество репеллента в смеси с экстрагентом или растворителем. После встряхивания из экстр-агентов или растворов микропипеткой отбирали пробы и наносили на пластинку. Параллельно с пробами наносили экстракты крови и мочи, не содержащие репеллен-
е=1
из крема \п о о ШТп\Т\ иосотоо
карбоксида иьоп си 00001П1П —Г м-" — еч +1 +1 +1 +1 II +1 со оо со со ^ сч СО ч** ^ СО ОО
из крови 0100100.0 СО — СО — •ч*' +1 +1II +1IIII 00 о> ст> оо -г <3> СО СО ""Г СО
из крема оо_о_о_о_о_ со"-* со*со" ю" —' II II II II II II О — СЧ О сч <55 СО Г^ ОО СО 05
бензимина из мочи юооооо —Г—Г ««ЯП II IIII II И II о о о сч ^ оо ^ СО со ^ со 00
из крови 1С ю о о о ю с4*СО СЧ*" —СО*" — II II II II II II ОЭ СО о Г*» О со СО СО Ю Ю СО ОО
из крема сч ю о о^ю о — — СЧ~СО~—V II II II II II II сч 05 оо —« о О со С4- Г-- ^ о
ДЭТА из мочи ю о^о о о о — сч"ю со — — II II II II II II СО оо о о «о со со со с- оо
из крови юоююо о^ со сч" со" —" сч" II II II II II II ЮОООЯОО Ю ¡О СО ОО
Растворитель ° ■ Гексан ........... Бензол ........... Этиловый эфир ....... Хлороформ......... Этиловый спирт....... Ацетон...........
3*
67
та, а также стандартные растворы его в ацетоне. После проведения всех операций размер и окраску полученных пятен сравнивали со стандартными. Результаты испытаний представлены в табл. 1.
Судя по результатам исследования, наиболее полное извлечение репеллентов из крови и мочи достигается при использовании ацетона.
Величины для различных репеллентов (ДЭТА, бензимин, карбок-сид) при исследовании крови, мочи и смывов с кожи приведены в табл. 2.
Таблица 2
Значение величины репеллентов при исследовании биологических материалов
Репеллент Система подвижных растворителей Величина Я,
кровь моча смывы с кожи
ДЭТА Бензол — метанол (19:1) 0,47 0,43 0,51
Бензимин Гептан — этилацетат (1:1) 0,64 0,62 0,66
Карбоксид Гептан — этилацетат (2:1) 0,39 0,36 0,42
Из этих данных следует, что границы для ДЭТА составляют 0,43—0,51 (0,47+0,04), для бензимина — 0,62—0,66 (0,64 + 0,02) и для карбоксида — 0,36—0,42 (0,39+0,03), что находится в пределах допустимых ошибок.
Результаты определения оптимального времени, необходимого для максимального извлечения малых количеств репеллента (на примере ДЭТА) из исследуемого объекта (кровь, моча, смывы, крем), представлены в табл. 3.
Опыты показали, что извлечение репеллента из исследуемых объектов достигается через 30 мин.
В результате исследований предлагается следующая методика определения содержания малых количеств репеллентов в крови, моче и смывах с кожи.
В качестве стандартного раствора используют раствор того или иного репеллента в водном ацетоне (3 части ацетона и 1 часть воды по объему), для чего навеску репеллента с точностью до 0,0001 г помещают в мерную колбу с притертой пробкой емкостью 100 мл и доводят до метки водным ацетоном.
Путем последовательного разведения 1 объема полученного стандартного раствора равными объемами водного ацетона получают стандартные растворы, содержащие различное количество репеллента.
Проведение анализа для биологических материалов состоит в следующем. 0,2 мл свежеотобранной крови или 2 мл мочи помещают в склянки с притертой пробкой емкостью 5—10 мл и приливают соответственно 0,3 и 3 мл ацетона. Пробы встряхивают в течение 30 мин.; после отстаивания из осветленной части раствора микропипеткой отбирают по 0,01 мл пробы. Ее наносят на линию старта хроматографической пластинки, одновременно на линию старта наносят в том же объеме стандартные растворы с различным содержанием в них репеллента. Нанесенные пробы подсушивают на воздухе в течение 30 мин., после чего пластинку помещают в камеру, где производят хроматографирование проб с помощью систем растворителей. Для ДЭТА — бензол — метанол (19 : 1), для бензимина — гептан — этилацетат (1 : 1) и для карбоксида — гептан — этилацетат (2:1). Процесс хроматогрифирования продолжают до тех пор, пока линия фронта не дой-
Таблица 3
Влияние времени на полноту извлечения репеллента (ДЭТА) из биологических материалов
Время экстракции (в минутах) Иевлечение репеллента (в %)
из- крови из мочи из крема
5 50—2,0 30—3,5 25—5,0
15 68—3,0 46^4,0 40—3,5
30 100—1,2 96—2,3 98—2,8
60 100—0,5 97— 1,6 99— 1,1
Примечание. Приведена полнота извлечения репеллента из проб с учетом степени извлечения, приведенной в табл. 1.
дет до 2 см от верхнего края окиси алюминия. Далее пластинку сушат при комнатной температуре до полного удаления растворителей (отсутствие запаха) и проявляют в эксикаторе в парах йода (30 мин.). Репеллент в пробе устанавливают по наличию пятна на хроматограмме с соответствующим Количество репеллента в пробе определяют сравнением размера и интенсивности окраски полученного пятна со стандартным. Для повышения точности определения интенсивность окраски пятен рекомендуется сравнивать при просвечивании на ультрахемископе.
При исследовании смывов с кожи или какой-либо другой поверхности пробу, снятую ватным тампоном (0,5 г), заливают 5 мл ацетона и из полученной вытяжки отбирают пробу для хроматографирования по описанной выше методике.
Содержание репеллента в пробе (в мг):
д А-Б-К 4 0,01 »
где А — объем ацетонового раствора биологического материала смыва (в мл)\ Б — содержание репеллента в стандартном пятне, размер и окраска которого соответствуют исследуемой пробе (в мг)-, К — степень извлечения репеллента.
ЛИТЕРАТУРА
А х р е м А. А., Кузнецова А. И. Тонкослойная хроматография. М., 1964.
Поступила 15/1V 1971 г.
УДК 615.91.015.35.076.9
ОБ ОПРЕДЕЛЕНИИ ПОРОГОВ ТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ МЕТОДОМ «ЖИВЫХ ЭЛЕКТРОДОВ»
Канд. биол. наук С. В. Сперанский
Научно-исследовательский санитарный институт, Новосибирск
Определение порога однократного действия ядов при ингаляционных затравках является важным элементом токсикологического эксперимента. Около 2 десятилетий наиболее универсальным методом установления порога токсического действия был метод, предложенный Е. И. Люблиной (по изменению характеристик сгибательного рефлекса у кроликов). Он апробирован на громадном экспериментальном материале. В 1962 г. нами был предложен метод определения периферической двигательной возбудимости с помощью «живых электродов».
Многочисленные исследователи и, в частности, Ю. Н. Уфлянд отмечают чрезвычайную вариабельность порогов раздражения двигательных нервов и мышц электрическим током. Подобная вариабельность в значительной мере объясняется трудностью соблюдения постоянства условий при обычном способе измерения возбудимости, когде электроды (или же один активный электрод) располагаются в «двигательной точке», в непосредственной близости от возбудимого объекта. В этом случае даже небольшие перемещения электродов, изменения степени их прикасания, влажности и т. п. резко меняют условия прохождения тока именно в районе раздражения, что приводит к симуляции значительных (иногда в десятки раз) колебаний возбудимости.
Идея предложенного нами метода заключается в том, что для уменьшения возможности артефактов следует не искать двигательные точки, а напротив, удаляться от них, с тем чтобы силовые линии электрического тока сами находили путь к возбудимому объекту в соответствии со стабильными анатомическими особенностями животного. Метод разработан на кроли-
