CC BY
9
Температурный тест вполне оправдывает себя в климатических условиях большей части нашей страны.
В условиях жаркого климата устойчивость кишечной палочки к температуре 43° не может служить целям санитарной диференциации. На юге штаммы, давно находящиеся вне организма, приспособляясь к высокой температуре окружающей среды, приобретают устойчивость и к температуре 43°. Вопрос об их санитарной диференциации еще требует своего решения.
Из сказанного видно, что способы идентификации и учета кишечной палочки, изложенные в ряде стандартов, являются разноречивыми и не соответствуют современным представлениям о санитарной значимости группы кишечной палочки. Необходимо точно регламентировать состав бактерий этой группы, подлежащих учету, и принять единообразные признаки для их идентификации.
Считаем возможным внести следующие предложения:
1. Принять для учета во всех ОСТ и ГОСТ единообразный состав группы кишечной палочки, а именно: учитывать все разновидности В. coli commune, В- coli citrovorum, В. aärogenes и В. paracoli.
2. Для идентификации палочек группы coli, показательных в санитарном отношении, считать достаточными признаки, положенные в основу определения кишечной палочки в ГОСТ 5216-50 (вода). Этими признаками являются: типичная морфология с отрицательным отношением к окраске по Граму, способность давать на элективных лактозных средах характерные колонии, способность к росту и сбраживанию глюкозы при 43°.
-А- -¿г *
Е. В. Дианова, А. А. Ворошилова
Метод обнаружения патогенных бактерий с помощью биологических антисептиков
Из Научно-исследовательского санитарного института имени Эрисмана
Трудности обнаружения патогенных бактерий в окружающей среде и пищевых продуктах обусловливаются рядом факторов, среди которых большое значение имеет присутствие сопутствующей микрофлоры-.
Для обнаружения патогенной микрофлоры в исследуемых объектах обычно применяют диференциальные или элективные питательные среды, которые, частично подавляя сопутствующую микрофлору, неблагоприятно отражаются и на патогенных бактериях. Элективность питательных сред до настоящего времени создается применением различных химических «антисептиков», обладающих в значительной мере универсальным воздействием на микробов.
Характерное свойство антибиотиков и бактериофагов — избирательное действие их на микробы — открывает новые возможности для направленного воздействия на отдельные группы микроорганизмов и позволяет выдвинуть проблему использования этих ценных свойств в создании элективных условий для выделения различных групп бактерий, в том числе и патогенных.
Для выяснения возможности применения антибиотиков и бактериофагов при выделении патогенных бактерий кишечной группы из воды нами были проведены ориентировочные опыты. Объектами исследования
■3*
35
служили представители кишечно-тифозной группы — брюшной тиф, паратиф В, дизентерия Флекснера и сапрофитные бактерии из реки* Москвы.
Действие фагов было испытано в отношении кишечной палочки и протея, которые служат постоянной помехой при выделении патогенных бактерий кишечной группы и в то же время обладают большой резистентностью к антибиотикам.
Коли-фаг, примененный нами, был адаптирован к 16 штаммам коли; из 28 штаммов В. coli, выделенных из воды и сточной жидкости, хо рошо лизировался этим фагом 21 штамм.
Протей-фаг был адаптирован к 10 штаммам; из 45 штаммов протея хорошо лизировалось этим фагом 33 штамма.
Ввиду того что начало лизиса и возможное появление вторичного роста культуры еще не всегда поддается нашему управлению, наиболее целесообразно, как показали наши опыты, применение фагов в твердой среде.
Эффект действия коли-фага и протей-фага в мясо-пептонном агаре на гомологическую культуру коли и протея виден из табл. 1.
Т а б-л и ц а 1. Действие коли-фага и протей-фага в мясо-пептонном агаре на гомологическую культуру кишечной палочки и протея
Показатели Кишечна я палочка 11ротей
контроль без фага -}-коли-фа г контроль без фагз 4 - протей-фа г
1°/о 5о/о 10°/о 5% 10% 15% 20%; 1
Абсолютное
количество
бак!ерий в
1 мл 7 458 000 189 00Э 263 000 205 000 910 760 590 700 60
Процент остаю-
щихся ки-
шечных па-
лочек 100 2,5 3,5 2,7 100 84 65 77 «
Полученный результат показывает перспективность применения фагов вообще и, в частности, коли-фага и протей-фага для подавления кишечной палочки и протея.
Из антибиотиков мы определяли действие грамицидина С и пенициллина (натриевая соль). Для опытов мы вносили разбавленную односу-точную бульонную культуру патогенных бактерий в среду с антибиоти ком. Сапрофиты из воды реки Москвы предварительно подвергались концентрированию на мембранном фильтре. Контролем служили те же культуры в средах без антибиотиков. После инкубации опытного материала при 37° в течение заданного времени степень антибактериального действия антибиотиков учитывали путем количественного определения в нем бактерий на мясо-пептонном агаре.
При продолжительном контакте (20 часов) сапрофитов с грамицидином С в бульоне отмечается сильное развитие их при всех испытанных концентрациях — от 1,3 до 250 *[ в 1 мл, что связано с развитием грами-цидиноустойчивых форм. При сокращении контакта до 30—60 минут эф фект антибактериального действия грамицидина наблюдается уже при небольших концентрациях'антибиотика; в этих условиях значительная часть чувствительных бактерий за этот срок погибает, а устойчивые виды не успевают размножиться.
то я 90
70
? во
ч
¡И
4 30-
: 10
\
1 г з
\
\
\
\
\
\
\
12.5 25
Дозы грамицидина (В ц/мл) Процент остающихся бактерий
50
после
Рис. 1.
1 часа контакта с различными дозами грамицидина С (в мясо-пепгонном бульоне).
1 — сапрофиты; 2 — бактерии брюшного тифа; 3 — бактерии дизентерии.
Эти же концентрации оказывают незначительное действие на группу кищечно-тифозных бактерий. Результаты данного опыта приведены на рис. 1.
В дальнейшем было испытано действие грамицидина С в отношении 5 штаммов брюшного тифа, 5 штаммов паратифа В, одного штамма дизентерии и в отношении сапрофитов 5 образцов еоды из реки Москвы.
Результаты этих опытов (рис. 2) показывают, что имеется определенный разрыв в дозировке антибактериального действия грамицидина С на сапрофитные бактерии и на бактерии кишечно-тифозной группы, который и может быть использован для подавления сопутствующей микрофлоры при выделении представителей кишечно-тифозной группы.
Очень существенным условием, определяющим эффект антибактериального действия антибиотика, является, как известно, среда, в которую добавляется антибиотик.
Хороший результат дает грамицидин С в сочетании с тетратионатовой средой накопления (Шефер) при условии непродолжительного контакта. Тетратионат натрия задерживает развитие сапрофитов и бактерий кишечно-тифозной группы, но на сапрофитов его действие сказывается сильнее. При добавлении грамицидина С это воздействие на сапрофитов усиливается, почти не отражаясь на бактериях кишечно-ти-фозной группы, в результате чего количественное соотношение бактерий брюшного тифа к сапрофитам в этой среде изменяется в желательную для нас сторону, т. е. увеличивается.
Опыт с испытанием действия грамицидина в тетратионатовой среде мы проводили раздельно с сапрофитами реки Москвы и с бактериями брюшного тифа. Наблюдения за изменением количества бактерий велись одновременно в мясо-пептонном бульоне, в тетратионатовой среде без грамицидина и в тетратионатовой среде с добавлением грамицидина в дозах 25 и 12,5-[/мл. Количество бактерий после 2, 4, 6 и 24 часов инкубации культур при 37° определяли путем посева из каждой пробирки на мясо-пептонный агар.
Изменение соотношения количества бактерий брюшного тифа к сапрофитам в зависимости от среды и присутствия грамицидина дается в табл. 2.
50 75
Дозы грамицидина (0 х/ мл)
Рис. 2. Влияние грамицидина С в мясо-пептонном бульоне на различные группы бактерий. Контакт 1 час.
1 — сапрофиты речной воды; 2 — бактерии брюшного тифа; 3 — бактерии дизентерии Флекснера; 4 — бактерии паратифа В.
Как видно из приведенных данных, применение грамицидина наиболее целесообразно в дозе 25 -¡/мл в тетратионатовой среде.
Для подавления сопутствующей микрофлоры следует применять пенициллин в условиях, неблагоприятных для развития патогенных микроорганизмов и благоприятных для развития метатрофов, поскольку пенициллин действует только на растущие клетки.
Таблица 2. Изменение соотношения бактерий брюшного тифа и сапрофитов
Среда
Продолжительность опыта мясо-пеп- тетратионат тетратионат-)-грамицидин (в 7/мл)
(в часах,) бульон 25 12,5
2 0,9 1,5 6,6 2
4 1,1 2,8 8 3,1
6 1,3 3,8 12,8 4,8
24 0,5 0,04 0,04 0,1
Такие условия мы осуществляли, употребляя питательную среду Строгова.
В настоящее время в Советском Союзе широко развернуты работы по изысканию и применению антибиотиков исключительно в отношении патогенных микроорганизмов.
Мы испробовали только эти антибиотики и притом только небольшую часть их. Результаты этих ориентировочных опытов позволяют, как нам кажется, подтвердить правильность предложенного принципа; методическая рецептура требует дальнейшей разработки.
Проблема использования антибиотиков для подавления сапрофитной микрофлоры при обнаружении и выделении патогенных бактерий ставит перед нами новую задачу изыскания антибиотиков в отношении сапрофитов.
По всей вероятности, некоторые из уже полученных антибиотиков, вероятно, даже частично забракованных из-за их токсичности для организма человека, могут быть успешно применены для наших целей.
Помимо бактериофагов и антибиотиков, хорошие результаты могут дать фитонциды, а также лизины, получаемые в результате насильственного антагонизма микробов.
Поиски этих биологических «антисептиков» чрезвычайно облегчаются тем, что их следует применять только in vitro, что освобождает нас от обязательного получения препарата в чистом виде и от ограничивающих факторов, связанных с введением антибиотика в организм человека.
тk Ъ Я
