CC BY
11
5. Считать целесообразным уменьшить высоту подоконников от пола до 60 см для обеспечения отдыха аккомодации и возможности использования зрения вдаль.
Из этих же соображений следует запретить строить сплошные и большой высоты заборы, а рекомендовать низкие, озелененные кустарником, газонами или решетчатые ограды.
ЛИТЕРАТУРА
Кон Г., Гигиена глаз в школах, Полтава, 1887.—Herrn heiser J„ Die Refraktionsentwicklung des menschlichen Auges, Ztschr. f. Heilk., 1892, Bd. 13, S. 342—347,— Koppe O., Ophtalmoskopisch-ophtalmologische Untersuchungen aus dem Dorpater Gymnasium Inaug-Dissert., Dorpat, 1876 (цит. по Кону).—S о г s b у A.. The normal refraction in infansy and its bearing on the development of miopia, Annal Report London Country Coucil for 1933, vol. 4, part. 3, 1935 (цит. по E. Ж- Трону) .—S t e i g e г А., Entstehung der spärischen Refraktionen des menschlichen Auges, Berlin, 1913.
Поступила 28/V 1955 r.
-¿r -Ar -iür
ПРИМЕНЕНИЕ АНТИБИОТИКОВ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ПАТОГЕННЫХ БАКТЕРИЙ КИШЕЧНОЙ ГРУППЫ ИЗ РЕЧНОЙ ВОДЫ И ДРУГИХ ОБЪЕКТОВ
Старший научный сотрудник Е. В. Дианова, старший научный сотрудник А. А. Ворошилова
Из Научно-исследовательского санитарного института имени Эрисмана
В предварительном сообщении 1 мы указывали, что большим препятствием для обнаружения патогенных бактерий в объектах внешней среды является сопутствующая микрофлора. Для ее подавления, при выделении патогенных бактерий, обычно применяются различные химические вещества, обладающие в значительной степени универсальным воздействием на микроорганизмы.
Разрабатываемый нами метод выделения патогенных бактерий кишечной группы из объектов внешней среды, пищи и т. д. с применением антибиотиков базируется на ценном свойстве избирательного действия антибиотиков на бактерии. Это свойство может быть использовано для создания элективных условий, ведущих к подавлению сопутствующей микрофлоры и не оказывающих действия на патогенную группу бактерий.
Принимая во внимание различный спектр действия антибиотиков, их способность действовать только на растущие клетки или на покоящиеся, инактивироваться в белковых средах, повышать свою активность в присутствии некоторых активаторов и т. д., при выборе антибиотиков и при работе с ними необходимо учитывать все их специфические особенности. Для получения нужного эффекта следует выбрать оптимальную среду, установить продолжительность контакта бактерий с антибиотиком и дозировку антибиотика, бактерицидную для сапрофитов и нейтральную для бактерий кишечнотифозной группы.
Трудность подавления сопутствующей микрофлоры антибиотическими веществами обусловливается тем, что она представляет смесь грампо-ложительных и грамотрицательных бактерий. Поэтому лучший эффект в подавлении ее даст антибиотик с широким спектром действия или комбинация нескольких антибиотиков.
1 Гимена и санитария, 1954, № 5.
В настоящее время поступают в продажу антибиотики, обладающие антибактериальным действием в отношении патогенных бактерий, и нам приходится экспериментировать только с ними, используя лишь разрыв в-бактерицидной дозировке антибиотика в отношении патогенной и непатогенной группы бактерий.
Предварительные испытания, проведенные с грамицидином в мясо-пептонном бульоне показали, что доза грамицидина, равная 25 т/мл,, при контакте 1—2 часа снижала количество сапрофитных бактерий водьг на 80%, а бактерий тифа — лишь на 16%, дизентерии Флекснера — на-40%. Та же доза грамицидина в среде Шефера при контакте 2—4 часа-снижала количество сапрофитов на 75—78%, а бактерий брюшного тифа — от 0 до 3%.
Выявление разрыва в бактерицидной дозе грамицидина в отношении сапрофитной микрофлоры воды и бактерий тифа подтвердило предпосылки к возможности применения антибиотиков для выделения патогенной микрофлоры из объектов внешней среды.
Дальнейшие исследования были направлены на изыскание антибиотиков и их смесей с более высоким бактерицидным эффектом в отношении сапрофитных бактерий и более низким в отношении бактерий тифа' и дизентерии.
Мы проводили эксперименты с грамицидином, пенициллином, стрептомицином, альбомицином, микроцидом, биомицином, саназином, лизо-цимом и экмолином.
Действие этих антибиотиков испытывалось на сапрофитных бактериях речной воды, молока и на бактериях брюшного тифа и дизентерии. К. В. Хомутова определяла действие антибиотиков на бактерий группы салмонелл Бреслау и Гертнера.
В настоящем сообщении мы приведем данные, касающиеся только-сапрофитов речной воды и бактерий брюшного тифа и дизентерии.
Мы проводили испытания в жидкой среде (мясо-пептонный бульон, среда Шефера) при определенной продолжительности контакта бактерий с антибиотиком с последующим высевом культур на агар Эндо и в агаре Эндо, куда высевали испытуемый материал.
Так как эффект действия антибиотиков может колебаться в зависимости от густоты микробной взвеси, опыты проводили с разным количеством бактерий. Опыты с сапрофитами ставили преимущественно с густой взвесью микробов. Патогенные бактерии вносили в среду с антибиотиками из разбавленной односуточной бульонной культуры в меньшем количестве. Контролем служили те же среды, но без антибиотика.
Из 9 испытанных антибиотиков наиболее отвечающими нашим требованиям оказались грамицидин и стрептомицин.
В жидкой среде грамицидин давал, как было указано выше, хороший-эффект в дозе 25 ц /мл. В агаровой среде для получения такого же эффекта концентрацию грамицидина пришлось повысить до 75—100 7/мл;: в этих условиях количество сапрофитных бактерий снижается на-75—97%, бактерий тифа — на 0—24%; для бактерий дизентерии эта концентрация велика.
Стрептомицин в мясо-пептонном бульоне и в среде Шефера дает недостаточный разрыв в бактерицидной дозировке в отношении сапрофитов воды и бактерий кишечно-тифозной группы. Стрептомицин в агаре Эндо-в дозе 10 ед/мл снижает количество сапрофитов на 79%, бактерий брюшного тифа — на 4% и дизентерии — на 24%. Но эта доза стрептомицина уменьшает размеры колоний брюшного тифа и дизентерии, поэтому ее пришлось снизить до 6 ед/мл. Такая концентрация стрептомицина в агаре Эндо не оказывает бактерицидного действия на бактерии брюшного тифа, количество дизентерийных бактерий иногда снижается на 20%, иногда остается на уровне контроля, количество сапрофитов снижается на' 60—80%.
3 Гигиена и санитария, № 11
33
В дальнейшем мы перешли к изучению совместного действия грамицидина и стрептомицина. Их комбинацию испытывали в среде Шефера и агаре Эндо.
В среде Шефера грамицидин испытывали в дозе 25 у/мл, а стрептомицин— в дозах 25 и 12,5 ед/мл, т. е. в дозах, как нами было установлено раньше, наиболее безобидных для патогенной микрофлоры и бактерицидной для сапрофитов. При продолжительности контакта, равной 2 часам, количество сапрофитов снижается на 62—94%, количество бактерий тифа остается без изменения, а бактерий дизентерии Флекснера снижается иногда на 50—77%. Следовательно, комбинация грамицидина со стреп-
Таблица I
Бактерии брюшного тифа, дизентерии и сапрофиты речной воды на агаре Эндо и на агаре Эндо с антибиотиками
■ Культура Число колоний
-41« штаммов на агаре Эндо на агаре Эндо+ 100 •f/мл грамицидина и 6 ед/мл стрептомицина процент
абсолютное абсолютное
Брюшной тиф 723 1 380 1 253 91
547 482 88
309 297 96
276 261 95
153 132 86
28 40 100
56 45 80
ч 6 5 83
Дизентерия 40-57 564 380 67
Флекснера 495 400 81
430 307 71
58 50 86
49 39 80
47 25 53
Сапрофиты во- 4 670 163 3
ды реки Мос- 3 500 289 8
квы 2 520 518 20
2 135 156 7
1 200 30 3
980 67 7
766 2) 3
525 65 12
430 19 4
230 7 3
82 3 4
65 4 6
I I
томицином в указанных дозах может быть применена в среде Шефера только для обнаружения бактерий брюшного тифа. Для выделения дизентерии в качестве контактной среды лучше применять бульон с желчью. В агаре Эндо совместное действие антибиотиков испытывалась с дозами 1рамицидина 100—75—50 у/мл и с дозами стрептомицина от 1,5 до 20 ед/мл. Наиболее благоприятный эффект дает сочетание грамицидина в 100 ?/мл с 6 ед/мл стрептомицина (табл. 1). Такая дозировка этих антибиотиков снижает количество сапрофитов воды на 97—80% (из 12 опытов), ко-тичество бактерии брюшного тифа (штамм № 723) —на 0—20%
(из 8 опытов) и количество бактерий дизентерии Флекснера — на 14—47% (из 6 опытов).
Для понижения антибактериального действия смеси грамицидина со стрептомицином на бактерии кишечно-тифозной группы мы снизили дозу грамицидина со 100 до 80 у/мл, оставив стрептомицин в дозе 6 ед/мл. Эффективность бактерицидного действия таких доз грамицидина со стрептомицином испытывали на образцах речной воды в разные сезоны (табл. 2).
Таблица 2
Сапрофмты речной воды на агаре Эндо и на агаре Эндо с антибиотиками
Процент оставшихся бактерий
Месяц Число опы-т®в Число колоний на агаре Эндо на агаре Эндо-4-80 7/мл грамицидина и 6 ед/мл стрептомицин!
в среднем колебания
Декабрь ...... 9 1 300 — 4 000 22 6-37
Январь ..... 6 360 — 8 200 25 5—50
Февраль ... 5 70 - Р00 29 18 - 41
Март...... 4 620 — 2 000 56 35 - 65
Апрель ..... 4 1 000 — 4 000 34 19 — 48
Май....... 10 700 — 4 000 40 8 — 65
Октябрь..... 4 40 - 1 900 7 4 — 11
Ноябрь ..... 4 130 - 1 ?00 26 12 — 33
Количество сапрофитов, вырастающее на среде с антибиотиками, колеблется главным образом в зависимости от наличия большего или меньшего количества кишечной палочки, на которую применяемые нами дозы антибиотиков не оказывают бактерицидного действия/ В связи с этим бактерицидное действие антибиотиков на сапрофитов речной воды сильнее всего проявляется на образцах воды зимнего и осеннего периода и слабее — на образцах в весенние месяцы, когда речная вода изобиловала кишечной палочкой. В большинстве образцов воды (35 из 46) количество сапрофитных бактерий на среде с антибиотиками снижалось на 60—96%.
Испытание этой среды с антибиотиками в отношении патогенной микрофлоры мы проводили с 5 штаммами брюшного тифа и с 15 штаммами дизентерии Флекснера, Зонне, Шига и Ньюкестля. Чтобы дать сравнительную оценку этой среды со средой висмут-сульфит-агар и бакго-агар Ж, посевы брюшного тифа делали одновременно на среду с антибиотиками и на среду висмут-сульфит-агар, посевы дизентерии — на среду с антибиотиками и на среду бактоагар Ж- Данные этих опытов проводятся в табл. 3.
На среде с антибиотиками, во-первых, мы получаем развитие колоний брюшного тифа через одни сутки, а на среде висмут-сульфит-агар — через 2 суток; во-вторых, ингибиторные свойства среды с антибиотиками.
слабее, чем среды висмут-сульфит-агар; из 5 обследованных штаммов брюшного тифа 4 штамма дают большее количество колоний на среде с антибиотиками и только один штамм (№—90) дал больше колоний на
Таблица $
Бактерии брюшного тифа на различных питательных средах
Процент остающихся бактерий
№ штамма Число опытов Число колоний на агаре Эндо-)-80 -(/мл грамицидина и 6 ед/мл стрептомицина на среде висмут-сульфит-агар
в среднем колебания в среднем колебания
62 4 20—1 600 93 71-100 47 24—71
91 2 25-260 73 63-83 52 16-88
319 4 4-530 91 65-100 75 28-100
90 * 2 55-350 60 46-74 79 68-90
723 1 23 100 — 52 — ■
среде висмут-сульфит-агар. Следует отметить, что некоторые серии среды висмут-сульфит-агар настолько угнетают бактерии брюшного тифа, что при посеве даже очень большого количества микробных тел (тыся-
Таблица 4
Бактерии дизентерии на различных питательных средах
Культура дизентерии № штамма Число опытов Число колоний на агаре Эндо Процент остак на агаре Эндо-|- вО^/мл грамицидина и 6 ед/мл стрептомицина )щихся бактерий на среде бактоагар Ж
в среднем колебания в среднем колебания
Флекснера 26 5 50-1 600 98 77—>100 22 0-60
170 5 60-1 100 75 50- 100 36 20-70
3 803 5 50-1 300 82 40-100 31 2-798
1 924 4 30—420 80 70—100 14 0-447
• 7 650 6 40-3 000 92 73->100 10 0-0
Зонне 725 2 280 - I 900 80 74-85 15 14-17
1 448 2 200 - 900 75 70-80 0,3 0-0,6
1 170 2 80-660 61 52-70 0 0
4 231R 5 10-1 800 82 72->100 0 0
4231S 2 120-700 90 88-92 0 0
9 127 5 80-2 100 0 0 0 0
Ньюкестля 1 316 2 50-460 88 75-100 20 0-39
1 516 2 100—820 62 54-70 0
чи) вырастает лишь 1—14% от контроля.
Сопоставление роста бактерий группы дизентерии на агаре с антибиотиками и на среде бактоагар Ж приводится в табл. 4.
На среде с антибиотиками колонии дизентерии Флекснера вырастают через одни сутки при любом количестве внесенной культуры (от тысячи до десятков). На среде бактоагар Ж при внесении небольшого количества бактерий дизентерии (десятков) развитие отсутствует полностью; при внесении большого количества на среде бактоагар Ж колонии дизентерии развиваются, но в меньшем количестве, чем на среде с антибиотиками.
Из 6 обследованных штаммов дизентерии Зонне только один штамм — № 9127 не дает развития на среде с антибиотиками. На среде бактоагар Ж 4 штамма не дают совершенно развития, а 2 штамма (725 и 4231 1^) дают развитие при засеве только большого количества бактерий (тысячи и сотни); при меньшем количестве и эти 2 штамма никакого развития на среде бактоагар Ж не дают.
Из 2 штаммов дизентерии Ньюкестля оба штамма дают развитие на среде с антибиотиками в количестве 62—88%; на среде бактоагар Ж растет только один штамм в количестве 40%.
Из 2 испытанных штаммов дизентерии Шига на среде с антибиотиками дает развитие один штамм, но только в виде очень мелких колоний; на среде бактоагар Ж эти штаммы не растут совсем.
Приготовление питательных сред с антибиотиками не встречает никаких затруднений. Грамицидин и стрептомицин отличаются большой устойчивостью и длительно сохраняют свою активность.
Наша работа является только первым шагом в области применения антибиотиков для создания элективных питательных сред. Полученные данные, нам кажется, говорят о том, что этот путь может привести к еще лучшим результатам, поскольку изучение антибиотиков и область их применения расширяются и ассортимент выпускаемых антибиотиков возрастает.
Выводы
1. Из 9 испытанных антибиотиков — грамицидина, пенициллина, стрептомицина, альбомицина, биомицина, саназина, микроцида, экмолина и лизоцима — наилучшие результаты дают грамицидин С и стрептомицин.
2. Для выделения бактерий брюшного тифа и дизентерии из речной воды можно применять: стрептомицин в агаре Эндо в дозе 6 ед/мл; грамицидин в дозе 25-(7мл и стрептомицин в дозе 20—25 ед/мл мясо-пептон-ного бульона с 30% желчи при 2-часовом контакте при 37°; грамицидин в дозе 80у/мл и стрептомицин в дозе 6 ед/мл в агаре Эндо.
3. Для выделения бактерий брюшного тифа можно применять: грамицидин в среде Шефера в дозе 25 т /мл при продолжительности контакта 2—4 часа при 37°; грамицидин в агаре Эндо в дозе 80—100",'/мл; грамицидин в дозе 25 -¡-/мл и стрептомицин в дозе 12—25 ед/мл в среде Шефера при продолжительности контакта 2—4 часа при 37°.
4. Параллельные посевы бактерий брюшного тифа на среду висмуг-сульфит-агар и на агар Эндо с 80 у/мл грамицидина и 6 ед/мл стрептомицина показали, что на среде с антибиотиками вырастает большее количество колоний, чем на висмут-сульфит-агаре, и колонии развиваются уже через одни сутки вместо 2 на висмут-сульфит-агаре.
5. Параллельные посевы бактерий дизентерии Флекснера, Зонне, Шига, Ньюкестля на агар Эндо с антибиотиками и на среду бактоагар Ж показали, что среда с антибиотиками обладает в меньшей степени ингибиторными свойствами в отношении бактерий дизентерии, чем среда бактоагар Ж.
6. Среда с применяемыми антибиотиками не изменяет морфологии колоний патогенных бактерий, их биохимических и серологических свойств и лишь немного уменьшает размер колоний тифа и дизентерии.
т!г Поступила 19/УП 1954 г.
