CC BY
14
Проф. Л. И. МАЦ.
Обзор статей, поступивших в редакцию, по вопросам санитарной бактериологии, эпидемиологии и дезинфекции
Канд. биолог, наук М. Д. Б о г о п о ль с к и й. Выделение коли-бактерий при санитарно-рекогносцировочных исследованиях воды и почв избирательной элективной средой.
Автор предлагает следующую синтезированную среду для выделения коли-бактерий: лактоза—1,0 (N1-14)2501 — 0,3, ЫаНСОз — 0,1, №С1 — 0,3, ^аНРСи — 0,2, А^504 — 0,1, агар — 2,0 (1,5—2,5) (в зависимости от качества агара), Ац. ёеэШ.— 100,0, рН среды — 7,2.
В данной среде лактозу можно заменить молочной сывороткой из следующего расчета: дестиллированная вода — 75 см3, молочная сыворотка — 25 см3, остальные вещества — в указанном выше количестве (на 100 см3 элективной среды).
Молочная сыворотка приготовляется следующим образом. Снятое молоко нагревают при 75°, свертывают добавлением 5°/о НС1, фильтруют через несколько слоев марли, подщелачивают 20% N301-1 до рН = 8,0, фильтруют бумзжным фильтром и стерилизуют текучим паром.
Автор считает, что прибавление к этой среде пептона или мясо-пептонного и тому подобного бульона лишает ее элективных свойств для коли-бактерий.
Автором экспериментально установлен удовлетворительный рост] на данной среде коли-бактерий, которые используют сернокислый аммоний как источник азотного питания. А^БО! способствует развитию, коли-бактерий. Данная среда не изменяет биологических свойств этих бактерий. Последние при высеве на тзкой среде постоянно дают типичный рост. По мнению эвторз, элективность среды для коли-бзктерий на-столько высокз, что чзшки Петри со средой,! оставленные открытыми в течение 1—2 часов, давзли характерный рост бактерий при последующем посеве.' Воздушная микрофлора вовсе не обнзруживзлэ роста или давзлз рост кэрликовых колоний нз вторые-третьи сутки. То же самое наблюдзлось и при использовании для посевов нестерилизован-ной посуды.
Колонии коли-бактерий на данной стекловидно-прозрачной, бесцветной, плотной среде имеют молочный оттенок с голубоватым отливом.
К указэнной среде можно прибавить и различные индикаторы: бромтимолблау, эозинметилблау и др., а также фуксино-сернистую смесь по Эндо. По автору, на этой среде можно уже через б—8 часов роста при 43° микроскопией обнаружить развитие колоний коли-бактерий. Автор находит возможным применять эту среду в сочетании с мембранными фильтрами. Для сточных вод, отбросов и других загрязненных объектов можно рекомендовать микрометод рекогносцировочного, ускоренного прямого исследования путем определения общего количества бактерий по Виноградскому (в препаратах на предметном стекле, окраска карболовым эритрозином с последующим подсчетом бактерий микроскопом) и установления количества коли-бактерий проращиванием их на предметном стекле в данной элективной прозрачной среде с последующей микроскопией колоний. Для этого из определенного объема исследуемой воды либо почвенной взвеси наносят стерильной измерительной пипеткой 2—3 капли (0,1 см3) на чистое, обезжиренное, фломбированное на огне предметное стекло, петлей равномерно распределяют жидкость по поверхности стекла, помещают
его в приоткрытой стерильной чашке Петри в термостат на 15—20 минут и на поверхность теплого стекла препарата добавляют тонким слоем данную элективную среду. Посев можно также делать по поверхности застывшей на предметном стекле элективной среды с последующим осторожным растиранием костыльком капель и подсушиванием препарата. Выращивание производят во влажной камере (чашке Петри) и учитывают при этом развившиеся колонии -микроскопией. Дополнительно применяется окраска <карболовым эритрозином либо водным раствором эозина, фиксированного высушиванием препарата. Колонии становятся еще более различимыми в микроскопе, лупой и, до определенной ■ степени, даже макроскопически..
Л. И. Шустова и Н. И. Г а м о в а-К а ю к о в а. К методике выделения патогенных микробов кишечнотифозной группы из пищевых продуктов. (Из центральной гигиенической лаборатории Москвы.
Авторы на основании критического анализа литературного материала, разбора действующих элементов тетратионатовых сред и своих собственных экспериментальных наблюдений предлагают для выделения микробов кишечно-тифозной группы тетратионатовую среду следующего состава (модификация основной среды Мюллера-Шустовой). К Ю мл расплавленного и остуженного до 40—45° питательного агара (Архангельского) добавляют 0,5 мл 2% раствора лактозы и сахарозы (пополам) и 2 капли 1,5% спиртового раствора бромтимолблау. Приготовляют 509/о раствор гипосульфита натрия (стерилизация производится текучим паром) и йодный раствор (25 г иода + 20 г йодистого калия + 100 мл воды). Все три составные части смешивают в различных концентрациях тетратионата. Для этот к агару добавляют по 1 мл гипосульфита, но с различными количествами иодистого раствора, а именно в одну пробирку добавляют 0,2 мл иодистого раствора, в другую — 0,1 мл, в третью — 0,05. Содержание тетратионата соответственно составит 0,5, 0,25 и 0,125%.
В эти среды с разной концентрацией тетратионата засевается эмульсия, приготовленная по Скородумову из исследуемых пищевых продуктов. Просмотр роста через 24 часа с высевом в микропестрый ряд в подогретые пробирки (по Казакову), дающий биохимическую характеристику микробов уже через 4—5 часов, делает возможным получение ответа через 24—26 часов с достаточной серологической и биохимической характеристикой.
Посевы на среды с неодинаковыми концентрациями тетратионата позволяют выделить разных представителей кишечно-тифозной группы. Авторы исследовали на предложенной ими среде с различным содержанием тетратионата, а также параллельно на средах Эндо, Шефера и Эйкмана ряд пищевых продуктов и рвотные массы, присланные в связи с пищевыми отравлениями. Наиболее удачными, средами оказались тетратионатовые в их модификации. Из 31 объекта, исследованного на среде Эндо, только в 8 (26%) удалось обнаружить микробов кишечно-тифозной группы, на среде Шефера — только в 6 из 31 (16%), на среде Эйкмана — в 6 из 24 (25%), а на тетратионатовых средах — в 6 из 24 (25%).
'Канд. мед. наук М. М. К а д е н и Е. С. Д об к и н а. Испытание бульонной среды как заменителя среды Эйкмана при определении фекального загрязнения воды. (Из эпидемиологического отдела Института инфекционных заболеваний им. Мечникова, Москва).
Авторы проверили мясопептонный бульон, а также бульон Хоттин-гера, который имеет то преимущество перед мясопептонным, что готовится даже без пептона и, следовательно, более доступен для широкого использования при определении коли-титра (по Ре^ивсЬка и РиэсИ).
В первой серии опытов в пробирки с различным количеством бульона добавлялось по 1 см3 водопроводной воды, в вторую, по стандарту, было прибавлено определенное количество микробных тел кишечной палочки (от 5 до 50 000). Пробирки с посевом выдерживались в термостате 18 часов, после чего высевались на чашки Левина. Контролем служил посев того же количества микробных тел в разведенную среду Эйкмана.
Оказалось, по данным авторов, что кишечная палочка, даже в количестве 5 особей, растет в одинаковой мере как на бульоне, разведенном водопроводной водой, так и на среде Эйкмана. При этом в бульоне Хоттингера, разведенном водой в пропорции 1 : 4 (0,25 см3 бульона + 1 см3) воды), культура дает такой же пышный рост на чашках после высева, как и высев со среды Эйкмана.
Получив удовлетворительные результаты в предварительных опытах, авторы приступили к параллельным исследованиям воды на среде Эйкмана, на мясопептонном бульоне и на бульоне Хоттингера. Изучались только пробы, взятые из грунтовых колодцев, рек и прудов, потому что водопроводная вода чаще определялась титром коли большими объемами (300—500 мл) и для сравнительной оценки метода была бы мало удобна. Для посева 100 см3 воды брали 25 см3 бульона, для 10. см3 — 2,5 сма и для 1 см3 — 0,25 см3 среды.
Из 20 проб, параллельно исследованных методами Эйкмана и на мясопептонном бульоне, полное совпадение результатов у авторов получено в 18 случаях, из них в 17 коли-титр определялся в 100 и больше 100 мл и в одном случае он равнялся 1 мл. Хотя в двух пробах результаты и не совпадали и среда Эйкмана оказалась более чувствительной, нежели бульон, но при учете коли-титра по стандарту данные окончательного учета в одном случае совпали полностью, а во втором были почти аналогичны (105 и больше 100). Таким образом, у авторов при определении коли-титра в воде на мясопептонном бульоне и на среде Эйкмана получены тождественные результаты.
Из 27 проб воды, исследованных на среде Эйкмана и на бульоне Хоттингера, в 14 пробах показатели полностью совпали, в 7 случаях более чувствительной оказалась среда Эйкмана и в б — бульон Хоттингера. Детальное рассмотрение этих 6 случаев выявило, что хотя при посеве на бульоне Хоттингера вода дала несколько худшие показатели, но при определении коли-титра по стандарту результаты получаются почти одинаковые и оценка воды обоими методами по существу является тождественной.
Что касается 7 других случаев, где среда Эйкмана оказалась чувствительнее бульона, то в 5 пробах воды результаты были также почти аналогичны. Только в 2 случаях мы имеем резкую разницу в пользу среды Эйкмана (меньше 0,4 по Эйкману и 43 и больше 100 на бульоне), но и здесь трудно исключить элемент случайности. Так как в большинстве опытов авторы получили полное или почти полное совпадение цифр, а в 6 случаях бульон оказался даже несколько более чувствительным по сравнению со средой Эйкмана, авторы считают возможным рекомендовать бульон Хоттингера, а тем более мясопептон-ный как заменитель среды Эйкмана при исследовании воды на коли-титр.
Проф. Л. И. М а ц. Среда Мюллера-Шефера для выделения салмо-нелл. (Из Центрального.санитарного института им. Эрисмана, Москва.)
Большие затруднения представляет выделение салмонелл из пищевых продуктов. Практика лаборатории Института им. Эрисмана! показала пригодность для этого среды Мюллера с тетратионатом. Элек-тивность сред с тетратионатом в отношении микробов брюшного тифа
и салмонелл основана на различном тормозящем действии гипертонических растворов тетратионата на микробов. Мюллер доказал, что тетратионат заглушает рост кишечной палочки, протея, Вас!. ГаесаНв а1саН§епез, многих кокков и др. При 0,4% содержания тетратионата рост кишечной палочки совершенно прекращается, в то время как палочка брюшного тифа выдерживает до 1,2% тетратионата.
В лаборатории Института им. Эрисмана д-р Скородумов, д-р Тука-левская и д-р Меклер доказали, что различные виды салмонелл по-разному относятся к концентрации тетратионата и что, вариируя концентрацию тетратионата в среде Мюллера-Шефера, можно добиться роста тех или других салмонелл.
В своих опытах автор в среду Мюллера-Шефера с различными концентрациями тетратионата засевал смеси из микробов кишечной палочки, брюшного тифа и салмонелл. Соотношение микробов кишечной палочки к палочкам брюшного тифа или салмонелл составляло 1 000: 1. Инкубация засеянной смеси в среде Мюллера-Шефера происходила в течение 24 часов при 37° с последующим пересевом на среду Эндо. Через 24—28 часов производился подсчет выросших на среде Эндо колоний. Концентрации тетратионата в среде Мюллера-Шефера вари-ировались добавлением' иода, так как в среде Мюллера тетратионат натрия получается в самый момент приготовления среды
гКагБаОз + Л = + ИагБЮв
(тиосульфит натрия) (тетратионат натрия)
Йодный раствор готовился по следующей прописи: иода—12 г, иодистого калия—10 г, дестиллированной воды—100 мл. Растворив иодистый калий в 30 мл воды, растворяют иод и доливают водой до объема 100 мл.
По данным автора, добавление 0,5 мл йодного раствора в пределах от 0,5 до 3 мл на 100 мл среды Мюллера не прекращает роста салмонелл, и только при добавлении 5 мл йодного раствора к 100 мл среды она становится элективной лишь в отношении палочек брюшного тифа.
Таким образом, вариируя в среде Мюллера-Шефера содержание тетратионата при помощи добавления различного количества йодного раствора, создают элективную среду для роста не только микробов брюшного тифа, но и салмонелл.
