CC BY
16
материалы конференции «отечественные противоопухолевые препараты» 31
Предложено изучение его цитотоксических свойств индиви- на сеть микротрубочек клеток карциномы легких человека дуально и в комбинации с платиновыми комплексами. А549. Цель исследования. Исследование влияния ТГСА на Материалы и методы. Методом амидирования моноэ-жизнеспособность опухолевых и нормальных фиброблас- фиров двухосновных кислот с адамантановыми спиртами топодобных клеток, а также на цитотоксические свойства N-дезацетилколхицином в присутствии N-этоксикарбо-комплексов платины. нил-2-этокси-1,2-дигидрохинолина синтезирована серия Материалы и методы. Объектом исследования являет- аналогов #(7-адамант-1-илокси-7-оксогептаноил)-#-де-ся гидроксамовая производная винной кислоты ТГСА. зацетилколхицина. Определение антипролиферативной В качестве платиновых комплексов были выбраны циспла- активности проведено в стандартном колориметрическом тин и аминонитроксильные комплексы платины (IV) е-ам- тесте с 3- (4,5-диметилтиазолил-2)-2,5-дифенил-2Н-тетра-мин^-(4-амино-2,2,6,6-тетраметилпиперидин-1-оксил)-а, золилбромидом (МТТ) по отношению к культуре клеток /-бис(ацетат)-6, с-дихлороплатина (IV) и е-аммин-d- карциномы легких человека А549 (CCL-185), а также в экс-(4-амино-2,2,6,6-тетраметилпиперидин-1-оксил)-а,/-бис перименте по прямому подсчету клеток под микроскопом. (пентаноат)-б, с-дихлороплатина (IV). Эксперименты про- Эффект на сеть микротрубочек клеток А549 определен водили на опухолевых клетках M-HeLa (эпителиоидная иммунофлуоресцентным методом с использованием монокарцинома шейки матки человека), а в качестве модели клональных антител мышей к ß-тубулину (Sigma, США) нормальных клеток использовали клетки FetMSC (фибро- и флуоресцентно меченных AlexaFlour488 козьих вторич-бластоподобные клетки костного мозга раннего эмбриона). ных антител против иммуноглобулинов мышей (Invitrogen, Исследование цитотоксичности проводили с помощью Германия). МТТ-теста. Определение концентрации IC50 проводили Результаты. Все полученные вещества проявили цито-через 24 и 72 ч после нанесения соединений. токсичность в низком наномолярном интервале концент-Результаты. При 72-часовой экспозиции в диапазоне раций и оказались в 3—6 раз более активны, чем колхицин концентраций от 200 мкМ и выше ТГСА проявляет силь- (IC50 = 30 ± 2 нМ), а 2 конъюгата — более активны, чем со-ное цитотоксическое действие на опухолевые клетки. Жиз- единение-лидер (IC50 = 11 ± 1 нМ). Показано, что умень-неспособность нормальных фибробластоподобных клеток шение длины линкера в структурах конъюгатов приводит не нарушается при аналогичных концентрациях ТГСА. к повышению их цитотоксичности, а позиция сложноэ-Кроме того, выявлено, что ТГСА увеличивает цитотокси- фирной связи не оказывает заметного влияния на актив-ческие свойства платиновых препаратов. ность. Все соединения серии вызывают деполимеризацию Заключение. Гидроксамовая кислота ТГСА обладает тубулина, проявляют сильный кластеризующий эффект высокой избирательной токсичностью по отношению и обладают способностью вызывать апоптоз клеток А549. к опухолевым клеткам. ТГСА обладает способностью зна- Заключение. Цитотоксичность 2 аналогов N-^-ада-чительно усиливать цитотоксический эффект платиновых мант-1-илокси-7-оксогептаноил)-^дезацетилколхицина комплексов. (с меньшей длиной линкера и/или изменением позиции сложноэфирной группы) по отношению к клеткам карци-Н.А. Зефиров, H.A. Чернышов, О.Н. Зефирова номы легких А549 сравнима с таковой для клинически НОВЫЕ КОНЪЮГАТЫ КОЛХИЦИНА используемого препарата таксола. С АДАМАНТАНОМ: АНТИПРОЛИФЕРАТИВНАЯ Работы поддержаны грантом РФФИ № 18-03-00524. АКТИВНОСТЬ И ЭФФЕКТ НА СЕТЬ МИКРОТРУБОЧЕК КЛЕТОК КАРЦИНОМЫ А549 Е. С. Иванова1. В.В. Татарский1. A.A. Зейфман2, МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия О.В. Строганов2, В.С. Стройлов2, И.Ю. Титов2, Введение. Тубулокластин ^(7-адамант-2-илокси-7- Ф.Н. Новиков2, A.A. Калинина1, В.Ю. Шульгина2, оксогептаноил)-^дезацетилколхицин представляет собой Г.Г. Чилов2, A.A. Штиль1 конъюгат колхицина с присоединенным через линкерную МЕХАНИЗМЫ ГИБЕЛИ КЛЕТОК ХРОНИЧЕСКОГО цепь адамантановым фрагментом. Это соединение обладает МИЕЛОИДНОГО ЛЕЙКОЗА ПРИ ДЕЙСТВИИ высокой антипролиферативной активностью (IC50 <10 нМ) PF-114 — НОВОГО ИНГИБИТОРА по отношению к различным типам опухолевых клеток. ТИРОЗИНКИНАЗЫ BCR-ABL Введение тубулокластина (в низких дозах) эксперимен- 1ФГБУ«НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» тальным животным с трансплантированным лимфолейко- Минздрава России, Москва, Россия; зом Р-388 приводит к значимому и достоверному увеличе- 2ООО «Фьюжн Фарма», Москва, Россия нию продолжительности жизни животных. Тип действия Введение. Резистентность к ингибиторам тирозинки-тубулокластина и его аналога с узловым присоединением назы Bcr-Abl 1-2-го поколений — одна из главных проблем адамантана ^-(7-адамант-1-илокси-7-оксогептаноил)-Ж- при лечении пациентов с хроническим миелоидным лей-дезацетилколхицина] in vitro отличается от такового козом (ХМЛ). С использованием метода молекулярного для свободного колхицина способностью вызывать обра- моделирования разработан ингибитор Bcr-Abl 3-го поко-зование тубулиновых кластеров необычной морфологии. ления PF-114, показавший эффективность в доклиниче-Цель исследования. Синтез гомологов ^(7-адамант- ских исследованиях при ХМЛ с наиболее частой мутацией 1-илокси-7-оксогептаноил-^дезацетилколхицина с лин- T315I. кером меньшей длины и/или изменением позиции сложно- Цель исследования. Изучение механизмов гибели кле-эфирной группы, изучение их цитотоксичности и эффекта ток ХМЛ при действии PF-114.
Спецвыпуск / том 17 / 2018 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
32
материалы конференции «отечественные противоопухолевые препараты»
материалы и методы. В качестве модели использована линия К562 с химерной тирозинкиназой Bcr-Abl.
результаты. Гибель клеток К562 происходит при действии наномолярных или субнаномолярных концентраций PF-114. Для линий Bcr-Abl-отрицательных лейкозов PF-114 значительно менее активен. Гибели клеток К562 предшествует задержка клеточного цикла в фазе G1. Даже кратковременное (2 ч) воздействие PF-114 на клетки К562 приводило к снижению доли клеток с фосфорилирован-ным CrkL — важнейшим субстратом Bcr-Abl. Через 24 ч воздействия регистрировали нарушение фосфорилирова-ния транскрипционных факторов семейства STAT и изменение активности митогенактивируемых протеинкиназ. Апоптоз, вызываемый PF-114, сопровождается активацией каспаз 3 и 9, а также протеолитическим расщеплением поли(АДФ-рибоза)полимеразы.
Заключение. PF-114 преимущественно токсичен для клеток ХМЛ, проявляет высокую специфичность к патогенетически важной внутриклеточной мишени и активирует каскады гибели клеток. Эти результаты, наряду с установленным ранее подавлением мутантных форм Bcr-Abl и благоприятными фармакологическими характеристиками, обусловили возможность проведения I фазы клинического исследования пациентов с Ph+ ХМЛ в хронической фазе или фазе акселерации с резистентностью к предшествующей терапии хотя бы одним ингибитором Bcr-Abl 2-го поколения, с непереносимостью одобренных ингибиторов Bcr-Abl или с наличием мутации T315I в гене Bcr-Abl (NCT02885766). Предварительные данные говорят об активности препарата в целевой группе пациентов, включая ХМЛ с мутацией T315I, а также о благоприятном профиле безопасности.
Н.И. Игнатова, И.Н. Дружкова, В.В. Дуденкова, М.М. Лукина, Е.В. Загайнова
изучение структуры коллагена в опухолях колоректального рака и модельных системах in vitro
ФГБОУ ВО НижГМА Минздрава России, Нижний Новгород, Россия
введение. Структурирование волокон коллагена, основного компонента матрикса опухолей, ведет к изменению механических свойств опухоли и ее прогрессии. Однако роль стромальных клеток при формировании опухолевого матрикса не до конца установлена.
Цель исследования. Изучение структуры коллагена в образцах колоректального рака (КРР), полученных от пациентов, и разработка трехмерной in vitro модели опухоли для понимания роли взаимодействия стромальных и опухолевых клеток в процессе формирования специфической структуры опухолевого матрикса.
материалы и методы. В работе использованы образцы колоректальной опухоли, полученные от пациентов в ходе операции (первичного очага и метастазов в печень). Эксперименты in vitro проводились на культурах клеток КРР человека, также были исследованы клетки нормальных тканей человека (фибробласты) и опухольассоциирован-ные фибробласты. Клетки выращивали в условиях моно-и кокультур. Была разработана трехмерная модель опухо-
ли на основе коллагенового геля с использованием культур клеток КРР человека и фибробластов. Структуру коллагена исследовали посредством генерации второй гармоники (ГВГ), позволяющей оценить степень анизотропии коллагена (лазерный сканирующий микроскоп LSM-710, Carl Zeiss, Германия, и установки MPT-flex, GenLab, Германия).
результаты. Анализ ГВГ-изображений депарафиниро-ванных срезов опухолей кишки и метастазов КРР в печень показал, что в опухоли ГВГ-сигнал выше, волокна коллагена имеют большую толщину и протяженность, наблюдается выраженная линейная упорядоченность коллагеновых волокон с преобладанием выделенного направления. На границе опухоли и нормальной ткани сохраняется выраженная линейная упорядоченность, однако направление волокон меняется. В нормальной ткани (слизистая кишки, печень) ГВГ-сигнал ниже, волокна коллагена тоньше и расположены хаотично. Показано, что монокультура опухолевых клеток in vitro практически не способна структурировать коллагеновый гель, регистрируется низкий ГВГ-сигнал, структура геля не визуализируется. Монокультура стромальных клеток и кокультура опухолевых и стро-мальных клеток способны структурировать коллагеновый гель, однако образуемые ими структуры различаются. При совместном культивировании опухолевых и стромальных клеток волокна коллагена собирались в пучки большого диаметра и протяженности, при этом были ориентированы в одном направлении, в то время как в монокультуре стромальных клеток волокна имели меньший диаметр и формировали сеть. Для объективной оценки различий в структуре коллагена были выбраны математические статистические параметры, позволяющие проводить количественный анализ ГВГ-изображений.
Заключение. Установлено, что структура коллагена в опухолях КРР отличается. Волокна коллагена в опухоли и на границе имеют большую толщину и линейную упорядоченность, чем в нормальной ткани слизистой и паренхимы. Разработана трехмерная модель опухоли на основе коллагенового геля, позволяющая проследить динамику структурирования коллагена и оценить его оптические свойства. Установлено, что для эффективного структурирования коллагена необходимо взаимодействие опухолевых и стромальных клеток.
Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ,
грант № 17-00-0019.
Е.В. Игнатьева, И.В. Ярцева, М.В. Дмитриева, З.С. Шпрах
определение содержания инкара в моделях инъекционной лекарственной формы после стерилизующей фильтрации
ФГБУ«НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия
введение. Инкар — соединение класса гликозилиндо-локарбазолов, впервые синтезированное в ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России. По механизму биологического действия соединение относится к ингибиторам протеинкиназы-С и представляет интерес для терапии злокачественных новообразований.
Спецвыпуск / том 17 / 2018
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
