CC BY
30
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 41
99 % по ложнозитивным результатам 2-го рода (истинно ли на жидкостном хромато-масс-спектрометре LCMS ложнопозитивным результатам) Причины, приводящие 20—20 (Shimadzu, Япония) без разделения на колонке. к появлению ложнопозитивных результатов 1-го рода, Тип ионизации — электроспрей. Масс-анализатор квадру-многообразны и связаны с возмущениями иммунной сис- польный (Q). Диапазон измеряемых массовых чисел от 10 темы вследствие острых воспалительных (инфекционных) до 2000 m/z. Разрешение масс-анализатора — 0,6. Элюент — заболеваний, аллергических проявлений, острого стресса ацетонитрил/вода в соотношении 1:1. и ряда других факторов. Наблюдающееся различие в уров- Результаты. В системе протекают следующие процессы: не ИЦ для больных и условно здоровых доноров, вероятно, 1) диссоциация ТНКЖ на 2 молекулы ДНИКтио; 2) моле-связано с многократно отмечавшимся в литературе эффек- кула ДНИКтио взаимодействует с молекулой ФЕП с обратом активации натуральных киллеров лимфогенактивиро- зованием [ФЕП-ДНИКтио], появляется промежуточный ванными киллерами, приводящим к значительному (в ра- продукт — молекулярный ион с массовым числом 318 m/z. зы) увеличению их цитотоксического потенциала. Далее от этого соединения отсоединяются поочередно Заключение. Полученные результаты указывают на прин- группы NO и, наконец, [SO3]—. Образуется продукт реак-ципиальную возможность использования предложенного ции [S-Fe-ФЕП]; 3) ион [O3S-S-Fe]—, являющийся частью способа для диагностики онкологических заболеваний ДНИКтио и образовавшийся по мере диссоциации ТНКЖ, различной нозологии на ранних стадиях развития. Необ- вступает во взаимодействие с ФЕП с образованием того же ходимы дальнейшие исследования на расширенном спект- промежуточного продукта реакции [O^-S-Fe-ФЕП], ста-ре нозологий на увеличенных выборках пациентов для оп- билизирующегося в виде [S-Fe-ФЕП]. ределения реальной чувствительности метода. Заключение. В результате реакции между ФЕП и ТНКЖ образуется новое соединение за счет образования связи А.А. Занина1, Е.А. Саратовских2, Б.Л. Психа2, Н.А. Санина2 железо—кислород. С помощью масс-спектрометрии уста-ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ НИТРОЗИЛЬНЫХ новлены массы продуктов реакции. Предложены гипоте-КОМПЛЕКСОВ ЖЕЛЕЗА — ДОНОРОВ NO тическая схема протекания реакции и строение образую-С ФОСФОЕНОЛПИРОВИНОГРАДНОЙ КИСЛОТОЙ щихся продуктов реакции. Факультет фундаментальной физико-химической инженерии ФГАОУ ВО «МГУ им. М.В. Ломоносова», Москва Н.А. Зефиров, И.В. Кузнецова, А.А. Алексеев, Г.А. Шипунов, 2ФГБУНИПХФ РАН, Черноголовка, Московская область Ю.А. Пикулина, Е.В. Нуриева, О.Н. Зефирова Введение. На основе нитрозильных комплексов желе- АНАЛОГИ ^(7-АДАМАНТ-2-ИЛОКСИ-7-за - NO-доноров могут быть созданы потенциальные ле- ОКСООКТАНОИЛ)-^ДЕЗАЦЕТИЛКОЛХИЦИНА карственные препараты, обладающие способностью на- (ТУБУЛОКЛАСТИНА) С ВАРИАЦИЯМИ ЛИНКЕРА правленной доставки NO к биологическим мишеням. И КАРКАСНОЙ ГРУППИРОВКИ Известно, что NO инактивирует глицеральдегид-3-фосфат- ФГАОУ ВО «МГУ им. М.В. Ломоносова», Москва дегидрогеназу, блокируя этим гликолитический синтез Введение. Колхицин (алкалоид Colchicum speciosum) аденозинтрифосфата и клеточное, митохондриальное ды- обладает высокой противоопухолевой активностью за счет хание. Поскольку раковые клетки обладают ускоренным взаимодействия с определенным доменом белка тубулина. темпом гликолиза по сравнению со здоровыми, для нахо- Ранее авторами получено производное колхицина — N-(7-ждения путей его торможения исследуют метаболизм фос- адамант-2-илокси-7-оксооктаноил-^дезацетилколхицин фоенолпировиноградной кислоты (ФЕП) и гликолитиче- (тубулокластин), проявившее высокую цитотоксичность (конских ферментов. Установлено, что ФЕП является мощным центрация полумаксимального ингибирования (IC50) = 6—8 нМ) ингибитором ферментов гексокиназы, фосфоглюкоизоме- по отношению к различным типам опухолевых клеток разы, фосфофруктокиназы и альдолазы. и способное в низких дозах приводить к значимому и до-Цель исследования — изучение реакционной способ- стоверному увеличению продолжительности жизни мышей ности потенциального лекарственного препарата онколо- с трансплантированным лимфолейкозом Р388. В экспери-гической направленности — тионитрозильного комплекса ментах in vitro была обнаружена способность тубулокласти-железа (ТНКЖ), донора монооксида азота, в отношении на и некоторых его аналогов вызывать образование класте-ФЕП. ров тубулина уникальной морфологии. Материалы и методы. Использовали ФЕП чистоты 99 % Цель исследования — синтез новых аналогов тубуло-производства фирмы Sigma, без дополнительной очистки. кластина с разнообразными вариациями линкера и ада-Комплекс ТНКЖ общей формулы Na2 [Fe2 (S2O3) 2 (NO) 4] -4H2O мантановой группировки, изучение их цитотоксичности синтезирован согласно методике Н.А. Саниной и соавт. и эффекта на микротубулярную сеть по отношению к клет-[Координационная химия 2005;31(5):323]. В реакции ис- кам карциномы легких человека А549. пользовали эквимолярные (10—2 М) растворы ФЕП и ТНКЖ Материалы и методы. Методом амидирования моно-в бидистиллированной воде. Электронные спектры реги- эфиров двухосновных кислот с замещенными каркасными стрировали на спектрофотометре Perkin Elmer UV—VIS или мостиковыми спиртами N-дезацетилколхицином (син-Spectrometer Lambda EZ 210 (США). Инфракрасные спек- тезированным в 3 стадии из колхицина) в присутствии тры регистрировали на инфракрасном Фурье-спектроме- ^этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидрохинолина полу-тре FT-IR ALPHA (4000—500 см—1) (Bruker, Германия). Из- чена серия из 15 аналогов тубулокластина. Определение мерения выполняли в водных растворах в капле между цитотоксичности проведено в стандартном колориметри-стеклами ZnSe при 20 °С на воздухе. Масс-спектры снима- ческом тесте с 3-(4,5-диметилтиазолил-2)-2,5-дифенил-2Н-
№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
42 МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
тетразолилбромидом (МТТ) по отношению к культуре Цель исследования — разработка мышиного гомологич-клеток карциномы легких человека А549 (CCL-185). Эф- ного биспецифичного анти-СВ3-анти-СВ19-антитела и его фект на микротубулярную сеть тех же клеток определен характеристика in vitro. иммунофлуоресцентным методом с использованием мо- Материалы и методы. Дизайн гена гомолога выполнен ноклональных антител мышей к а-тубулину (Sigma, США) в соответсвии с дизайном гена биспецифичного антитела и флуоресцентно меченных AlexaFlour488 козьих вторич- GNR-047. Все работы, связанные с получением образца ных антител к иммуноглобулинам мышей (Invitrogen, Гер - гомологичного антитела, выполняли в соответствии с вну-мания). тренними операционными процедурами. Связывание го-Результаты. Аналоги тубулокластина с модифициро- мологичной молекулы с рецепторами CD3 и CD19 на по-ванным адамантановым фрагментом проявляют цитоток- верхности клеток мышиных линий Bcl-1 и ТК-1, клеток сичность в наномолярном интервале концентраций, при- крови и селезенки мышей контролировали методом прочем большинство из них более активны (IC50 = 6 — 21 нМ), точной цитометрии. Специфическую активность гомолога чем колхицин (IC50 = 27 ± 2 нМ). Гидрофобные и объемные определяли в тесте антителозависимой клеточно-опосре-заместители в адамантане независимо от их расположения дованной цитотоксичности (ADCC). мало влияют на величину цитотоксичности, которая оста- Результаты. При использовании последовательностей ется во всех случаях высокой. Уменьшение активности антител, специфичных к мышиным рецепторам CD3 производного аминоадамантана (IC50 = 400 ± 20 нМ), по- и CD19, проведен дизайн гена гомологичного биспеци-видимому, связано с высокой степенью его ионизации фичного антитела. Сконструированы экспрессионные и низкой способностью проникновения в клетку. Все со- векторы с синтетическим целевым геном. Образец мыши-единения данной серии проявляют сильный кластеризую- ного гомолога соответствующего качества получен в ре-щий эффект. Цитотоксичность производных тубулокласти- зультате хроматографического выделения из культуральной на с модифицированным линкером зависит от числа жидкости стабильно трансфицированных клеток CHO. метиленовых групп в различных фрагментах цепи. Показано связывание гомолога с рецепторами CD3 и CD19 Заключение. Для ряда аналогов тубулокластина с вари- на поверхности клеток мышиных линий Bcl-1 и ТК-1, лим-ациями каркасной группировки продемонстрировано уси- фоцитов и спленоцитов мышей. Гомологичное мышиное ление цитотоксичности по отношению к клеткам карци- антитело обладает соответствующей разрабатываемому номы легких А549 по сравнению с колхицином. препарату высокой ADCC-активностью при использова-Работа поддержана грантами РФФИ (№ 15-03-04894) и РАН нии спленоцитов мыши в качестве эффекторных клеток. (ОХНМ 9). Заключение. Получен и охарактеризован образец мышиного биспецифичного анти-CD3-анти-CD19-антитела. С.В. Иванов, В.М. Симонов, Р.Л. Анисимов, Данные проведенных исследований свидетельствуют, о том, А.А. Пискунов, Г. Н. Порошин, Е. В. Сазонова, что полученное гомологичное биспецифичное антитело по сво-И.П. Фабричный, С. Г. Аббасова, А. П. Карпов им in vitro характеристикам соответствует о том, что разраба-РАЗРАБОТКА ГОМОЛОГИЧНОЙ МОЛЕКУЛЫ тываемому препарату GNR-047 и может быть использовано ИННОВАЦИОННОГО ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ для проведения токсикологических исследований на мышах. БИСПЕЦИФИЧНОГО АНТИТЕЛА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ В-КЛЕТОЧНЫХ ЛИМФОМ С ЦЕЛЬЮ ПРОВЕДЕНИЯ А.В. Ивличев, Д.А. Мудрак, Н.А. Наволокин, ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ Г.А. Афанасьева, С.А. Тычина, М. О. Корчаков, НА МЫШАХ Н.В. Полуконова, А.Б. Бучарская, Г.Н. Маслякова ООО «МБЦ«Генериум», Москва АКТИВНОСТЬ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ Введение. Несмотря на достигнутые успехи в лечении ЛИПИДОВ ПРИ ПЕРОРАЛЬНОМ ВВЕДЕНИИ В-клеточных лимфом, потребность в разработке новых ФЛАВОНОИДСОДЕРЖАЩЕГО ЭКСТРАКТА препаратов и подходов для их лечения остается довольно БЕССМЕРТНИКА ПЕСЧАНОГО НА ФОНЕ острой. Инновационный отечественный препарат нового по- ПЕРЕВИВАЕМОГО РАКА ПЕЧЕНИ РС-1 коления GNR-047 на основе биспецифичных моноклональ- ГБОУ ВПО «Саратовский ГМУ им. В. И. Разумовского» ных антител открывает новые перспективы для успешного Минздрава России, Саратов лечения В-клеточных лимфом, устойчивых к стандартной Цель исследования — изучить влияние флавоноидсо-таргетной терапии. Препарат GNR-047 связывается с ре- держащего экстракта бессмертника песчаного на актив-цептором CD3 Т-клеток и с рецептором CD19 опухолевых ность перекисного окисления липидов (ПОЛ) в экспери-В-клеток, что приводит к их физическому сближению, менте in vivo на лабораторных крысах с перевитым раком в результате которого формируется иммунологический си- печени. напс, приводящий к лизису опухолевых CD19+-клеток. Материалы и методы. Сырье собрано на территории Ввиду отсутствия релевантного вида животного, необхо- Саратовской области, экстракт бессмертника получен ав-димого для проведения токсикологических исследований торским способом (патент № 2482863). Дизайн экспери-антитела GNR-047, была инициирована разработка его мента: животные с перевитым раком печени РС-1 были мышиного гомолога. Настоящая работа посвящена полу- разделены на 2 группы. Первая — группа сравнения с опу-чению образца биспецифичного антитела, связывающего- холью без воздействия экстракта; вторая группа — экспе-ся с мышиными рецепторами CD3 и CD19, и изучению его риментальная с однократным пероральным введением свойств in vitro. экстракта бессмертника песчаного через 1 мес после пере-
№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
