CC BY
9
78
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
потенциал, аналогичный КМ-МСК. Способность к диф-ференцировке ИМ-МСК отличалась от КМ-МСК. Клоны ИМ-МСК не реагировали на индукторы адипогенной дифференцировки, 67% из них дифференцировались в сторону остеогенной линии. Остальные клоны не дифференцировались. Часть клонов ИМ-МСК содержала ЭРР. ИМ-МСК экспрессировали гены С-МУС и ЫЕБ значительно выше, чем КМ-МСК, в то время как экспрессия 0СТ4 была ниже. По-видимому, в состав ИМ-МСк входит субпопуляция, обладающая некоторыми свойствами эмбриональных стволовых клеток. Таким образом, КМ-МСК обнаруживали функциональную гетерогенность после имплантации под капсулу почки. Повторный перенос мезенхимных стромальных клеток-предшественников, вероятно, активировал дремлющую субпопуляцию стволовых клеток. Можно заключить, что популяция КМ-МСК состоит из мезенхимных клеток-предшественниц различной степени дифференцировки, в том числе и из стволовых клеток. Эти недавно открытые свойства КМ-МСК мини пигов требуют дальнейшего изучения, поскольку они открывают новые возможности и ограничения манипуляций с ними.
МАТРИКСЫ ИЗ ФИБРОИНА, СШИТОГО
ДЖЕНИПИНОМ, ДЛЯ ТКАНЕВОЙ
ИНЖЕНЕРИИ: ПОЛУЧЕНИЕ, ИЗУЧЕНИЕ
И ОЦЕНКА IN VITRO
М.Г. Дроздова1, В.Н. Бирюкова1, Н.А. Сажнев2,
Н.Р. Кильдеева2, Е.А. Марквичева1
1 ГНЦ ФГБУН Институт биоорганической химии им. Шемякина-Овчинникова РАН, Москва, Россия
2 ФГБОУН ВО Российский государственный университет им. А.Н. Косыгина, Москва, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: тканевая инженерия, фиброин, дженипин,
фибробласты L929, мезенхимальные стволовые клетки.
Фиброин (Фб) — перспективный материал для тканевой инженерии (ТИ), благодаря хорошим механическим свойствам, биосовместимости и биоразлагаемости. Однако матриксы из регенерированного Фб водорастворимы. Использование химической сшивки для предотвращения растворимости Фб может оказаться неэффективным из-за низкого содержания первичных аминогрупп в его структуре. Поскольку растворимость Фб зависит от конформационного состояния: водорастворимые а-спирали и нерастворимые ß-складчатые структуры, создание условий для конформационного перехода а ^ ß при образовании гидрогеля из Фб позволяет влиять на его растворимость.
Целью исследования было получение матриксов на основе Фб, сшитого дженипином (Дж), и изучение их структуры, физико-химических свойств, а также оценка биосовместимости in vitro.
Для получения пористых матриксов растворы Фб (20 и 30 масс. %) замораживали при -10°С и лио-филизовали. Полученные матриксы сшивали инкубацией в растворе Дж (10 масс. %) в этаноле в течение 24 часов. С помощью конфокальной лазерной микроскопии (КЛМ) было показано, что матриксы образуют систему с открытыми порами средним размером 149 ± 7 мкм и 355 ± 14 мкм для матриксов Фб-20 (20 масс.%) и Фб-30 (30 масс.%) соответственно. Отсутствие растворимости обеспечивалось как переводом Фб в ß-конформацию, так и химической сшивкой Дж в спиртовой среде.
Цитотоксичность Фб матриксов изучали с помощью экстракт теста с использованием мышиных фибробластов 1_929 в качестве модельных клеток. Жизнеспособность клеток определяли методом МТТ. После инкубации клеток в неразбавленных экстрактах происходило некоторое снижение их жизнеспособности, однако изменений в морфологии не наблюдали. После разбавления экстрактов жизнеспособность клеток повышалась. Распределение и морфологию клеток _929 и имморта-лизованных мезенхимальных стволовых клеток человека (ИТЕРТ-МБС) оценивали с помощью КЛМ через 7 дней культивирования в матриксах. Для этого клетки окрашивали витальным красителем Кальцеин АМ. Клетки сохраняли жизнеспособность, имели характерную веретенообразную морфологию и образовывали плотный клеточный монослой на матриксах Фб. Таким образом, макропористые матриксы Фб являются перспективными для ТИ. Работа выполнена при финансовой поддержке Российского научного фонда (грант № 22-13-00261).
КЛЕТОЧНАЯ МОДЕЛЬ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ МЕХАНИЗМОВ БОЛЕЗНИ ПАРКИНСОНА, АССОЦИИРОВАННОЙ С МУТАЦИЕЙ В ГЕНЕ GBA
Е.С. Дроздова1, 2, Е.В. Григорьева2,
С.В. Павлова2, С.П. Медведев2, Д.А. Сорогина1, 2,
А.Е. Копытова3, Г.В. Байдакова4,
Е.Ю. Захарова4, С.Н. Пчелина3, С.М. Закаян2
1 Новосибирский государственный университет, Новосибирск, Россия
2 ФГБНУ ФИЦ Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск, Россия
3 ФГБУ Петербургский институт ядерной физики им. Б.П. Константинова Национального исследовательского центра Курчатовский институт, Гатчина, Россия
4 ФГБНУ Медико-генетический научный центр, Москва, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: инуцированные плюрипотентные стволовые клетки, болезнь Паркинсона, дофаминергические нейроны, глюкоцереброзидаза, мутация p.N370S, амброксол.
Вторым по распространенности нейродегенератив-ным заболеванием является болезнь Паркинсона (БП) — хроническая патология, поражающая дофаминергические (ДА) нейроны черной субстанции. Одна из причин развития БП — мутации в гене GBA, которые приводят к снижению уровня мРНК GBA и белка глюкоцеребро-зидазы (GCase). Снижение активности GCase приводит к накоплению липидного продукта метаболизма, способствующего формированию нейротоксичных агрегатов белка а-синуклеина.
Для изучения механизмов мультифакторных заболеваний и поиска способов их лечения необходимо создавать адекватные модели, что является достаточно нетривиальной задачей, особенно в случае нейро-дегенеративных патологий: работа с образцами клеток мозга пациентов лимитирована постмортальными материалами, а использование животных моделей для тестирования новых лекарственных препаратов ограничивается из-за различий в метаболизме ксенобиотиков. Решением данных проблем стали индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (ИПСК), способные
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
