CC BY
21
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Экспериментальные модели Experimental models
личий между группами оценивали с помощью критерия наименьшей значимой разницы (LSD-тест) Фишера.
Результаты и обсуждение. Установлено, что ВЕ угнетал продукцию про-(ГИР) и противовоспалительных (Ш-10) факторов, наиболее выражено — в нестимулиро-ванных культурах за 1 час до выведения животных из эксперимента. Так, введение ВЕ за 1 час до выведения животных из эксперимента приводило к угнетению только спонтанной продукции ГЬ-ф макрофагами в дозах 100, 0.01, 0.0005 мкг/кг. Аналогичный эффект пептид оказывал в отношении спонтанной секреции Ш-10, активными оказались дозы 1 и 0, 01 мкг/кг. При введении пептида за 6 часов до забоя активность проявила дозировка 1 мкг/кг, которая приводила к угнетению продукции ГЬ-ф и Ш-10 в стимулированных культурах макрофагов. В культурах, стимулированных Кон А наблюдалось усиление продукции Ш-4 — как через 1 ч, так и через 6 ч после инъекции ВЕ. На спонтанную продукцию Ш-4 спленоцитами ВЕ не оказывал значимого влияния. В работе не было выявлено эффекта пептида на Кон А — индуцированную продукцию Ш-2, независимо от времени введения. В то же время было зарегистрировано разнонаправленное влияние ВЕ на уровни Ш-2 в спонтанных культурах макрофагов: в группе животных, которым пептид вводили за 1 час до забоя, наблюдалось угнетение секреции ГЬ-2, а через 6 ч после введения — стимуляция. Продукция ШЫу как в спонтанных, так и в стимулированных клеточных культурах статистически значимо не изменялась под воздействием ВЕ. Было отмечено, что концентрация корти-костерона в плазме крови интактных мышей под воздействием ВЕ не изменяется как в ранние, так и в поздние сроки после введения пептида, что, в свою очередь, свидетельствует об отсутствии опосредованности эффекта пептида через продукцию кортикостерона. Таким образом, ВЕ играет важную роль в регуляции функций клеток адаптивного и врожденного иммунитета и, независимо от времени воздействия, усиливает продукцию спленоцита-ми ГЬ-4, угнетает продукцию ГЬ-ф и Ш-10 макрофагами перитонеальной полости. С другой стороны, направленность эффектов ВЕа на секрецию Ш-2 зависит от продолжительности действия пептида. Данные эффекты не связаны с изменением уровня кортикостерона в плазме крови экспериментальных животных.
РОЛЬ ЦИТОКИНОВ И ХЕМОКИНОВ В ТРАНСЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ МИГРАЦИИ NK-КЛЕТОК ПРИ БЕРЕМЕННОСТИ
Баженов Д.О.1, Соколов Д.И.1, 2, Сельков С.А.1
1ФГБНУ «Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта», Санкт-Петербург, Россия 2 ГБОУ ВПО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия
NK-клетки являются ведущей популяцией иммунных клеток в зоне маточно-плацентарного барьера. Они обладают фенотипическими и физиологическими особенностями, поэтому их выделяют в отдельную субпопуляцию — децидуальных NK-клеток. Ряд данных указывает на то, что пул этих клеток формируется из NK-клеток периферической крови, которые мигрируют в зону маточ-но-плацентарного кровотока. Однако до сих пор остается малоизученным вопрос о том, какие факторы направляют миграцию NK-клеток.
Цель. Изучить миграцию NK-клеток через эндотелий в присутствии цитокинов и секреторных продуктов плацент (СПП) 1-го и 3-го триместров.
Материалы и методы. Клетки линии EA.hy 926 вносили в верхнюю камеру поликарбонатной вставки (диаметр пор 8 мкм) для 24-луночных планшетов, инкубировали 24 часа. Затем в верхнюю вносили NK-клетки линии NK-92MI. В нижнюю камеру вносили кондиционированные среды из-под плацент и цитокины: IL-10 (100 E/мл), SDF-1 (100 Е/мл), инкубировали 24 часа. Затем NK-клетки из нижней и верхней камеры обрабатывали антителами к CD45. Абсолютный подсчет количества мигрировавших в нижнюю камеру NK-клеток измеряли на проточном цитофлуориметре FACSCantoII (BD, США).
Результаты. Установлено, что цитокин IL-10 увеличивал количество мигрировавших NK-клеток через монослой эндотелия в 1,2 раза. Хемокин SDF-1 увеличивал количество мигрировавших клеток в 2.5 раза. В присутствии кондиционированных сред плацент 1-го и 3-го триместров количество мигрировавших NK-клеток снижалось в 2,2 и 1,9 раза соответственно.
Выводы. SDF-1 может выступать в качестве хемоат-трактанта для NK-клеток. IL-10, концентрация которого в зоне маточно-плацентарного контакта возрастает, также усиливает миграцию NK-клеток.
МАРКЕРЫ ПОВРЕЖДЕНИЯ НЕРВНОЙ ТКАНИ И ВОСПАЛЕНИЯ ПРИ ТРАНЗИТОРНОМ НАРУШЕНИИ КРОВООБРАЩЕНИЯ СЕТЧАТКИ: ВОЗМОЖНОСТИ МЕДИКАМЕНТОЗНОЙ КОРРЕКЦИИ
Балацкая Н.В., Киселева Т.Н., Чудин А.В., Андрюшин А.Е.
ФГБУ«Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им. Гельмгольца» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
Введение. Ретинальная ишемия — частая причина значительного снижения и потери зрения, развивающаяся на фоне сосудистых заболеваний (оптические нейропа-тии, окклюзии ретинальных сосудов, диабетическая ретинопатия, глаукома и т. д.). Транзиторные нарушения кровообращения глаза включают два периода — отсутствие кровотока (ишемия) и его восстановление (репер-фузия), которые являются частью одного патологического процесса — ишемии-реперфузии (И/Р). Известно, что активные формы кислорода, образующиеся в результате И/Р, запускают каскад воспалительных иммуномедиато-ров, миграцию лейкоцитов в очаг воспаления, способствующих дальнейшему повреждению тканей. Поэтому фармакологическая модуляция реперфузии может улучшить функциональное состояние сетчатой оболочки и последующее клиническое течение. В настоящее время в качестве одного из возможных терапевтических агентов рассматривается антиоксидант ресвератрол, терапевтический эффект которого уже был продемонстрирован в ряде экспериментальных работ.
Цель. Анализ динамики маркеров повреждения нервной ткани и воспаления в раннем и позднем постишеми-ческом периоде в ходе терапии ресвератролом при моделировании И/Р сетчатки в эксперименте.
Материалы и методы. Исследование проведено на 15 крысах (30 глаз) породы Wistar (в возрасте от 3 до 5 мес.) при общей (принятой в лабораторной практике), а также местной анестезии 0,4% р-ром оксибупрокаина. Моделирование односторонней И/Р сетчатки проводилось путем однократного субконъюнктивального введения в левый
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
глаз 0,2 мл 4*10-6 М раствора эндотелина-1фосфатном буфере (0,05 М, рН = 7,4 по ранее предложенному нами методу. Животных, которым моделировали одностороннюю И/Р, разделили на две группы: I-ю группу составили 5 крыс (10 глаз), II-ю — 5 животных (10 глаз), получавших ресве-ратрол с питьевой водой (сут. доза — 20 мг/кг) в течение 30 дней. III-я — контрольная группа включала 5 грызунов (10 глаз). Материалом иммунологического исследования служили образцы сыворотки крови (СК; n = 20) и тканевые гомогенаты комплекса сетчатка-хориоидея (ТК; n = 20) крыс. Содержание глиального кислого фибриллярного белка (GFAP), моноцитарного хемоаттрактантного про-теина-1 (МСР-1) в тест — пробах определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) помощью тест-систем, разработанных Cloud-CloneCorp. (США), произведенных USCN Life Science Inc. (КНР) на спектрофотометре — ридере для микропланшет Labsystems Multiskan® PLUS (Финляндия) при длине волны 450 нм.
Результаты. Анализ GFAP и MCP-1 представлен в таблице. В группе животных на 3 сутки ИР наблюдалось статистически значимое повышение уровня МСР-1 в ТК и СК (р < 0,05) с максимальным усилением воспалительного ответа к 7 суткам (повышение содержания в ТК в 5,5 раз (р < 0,001) и незначительным снижением концентрации цитокина к 30 суткам И/Р. Динамика GFAP в системном кровотоке была аналогична таковой MCP-1 и свидетельствовала о повышении проницаемости гема-тоофтальмического барьера, а выявленные повышенные концентрации GFAP соответствовали данным исследований апоптоза, указывали на деструктивные процессы в нервной ткани. Применение ресвератрола в суточной дозе 20 мг/кг в течение во II группе грызунов способствовало снижению уровня маркёра воспаления МСР-1 в ТК и концентрации GFAP в СК в раннем и позднем пости-шемическом периоде (р < 0,05).
Выводы. Данные исследования динамики маркеров повреждения нервной ткани и воспаления GFAP и МСР-1 в раннем и позднем постишемическом периодах в ходе терапии ресвератролом демонстрируют защитные и противовоспалительные свойства антиоксиданта в отношении тканей глаза (ретинопротекторные, нейропотекторные) при моделировании И/Р в эксперименте у крыс.
ТАБЛИЦА. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ДИНАМИКА GFAP И ПРИЕМА (I ГРУППА), НА ФОНЕ ПРИЕМА РЕСВЕРАТРОЛА (II (К ТЕЗИСАМ БАЛАЦКОЙ Н.В. И ДР.)
ВЛИЯНИЕ СОСТАВА ПИТАТЕЛЬНОМ СРЕДЫ НА СИНТЕЗ КАПСУЛЬНОГО ПОЛИСАХАРИДА STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE 3 СЕРОТИПА
Барановская С.А., Токарская М.М., Елкина С.И.
ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова» РАН, Москва, Россия
Для профилактики пневмококковой инфекции применяют конъюгированные пневмококковые вакцины, созданные на основе капсульного полисахарида (КПС). Поскольку серотиповой пейзаж S. pneumoniae на различных территориях отличается, то при разработке современных иммунобиологических препаратов необходимо учитывать данные эпидемиологических исследований. Известно, что 3 серотип пневмококка был актуален для территории нашей страны с начала изучения серотипово-го пейзажа, и до сих пор его наиболее часто (до 18% случаев) высевают при острых средних отитах, самой распространенной форме пневмококковой инфекции у детей до 5 лет (Харит С.М. и соавт., 2011). Качество препаратов, на основе которых будут в дальнейшем созданы иммунобиологические препараты, является ключевым моментом, поскольку от него зависит протективный эффект вакцин. Так как КПС получают из культуральной жидкости, то необходимо, чтобы питательная среда обеспечивала максимальную скорость роста и высокий уровень синтеза КПС, а также не содержала продукты животного происхождения и высокомолекулярные соединения, которые осложняют очистку КПС. Поэтому целью данного исследования являлась оценка накопления КПС штаммом S. pneumoniae 3 серотипа при выращивании в полусинтетических питательных средах, различного состава. Для достижения данной цели поставлены был подобран состав питательной среды, обеспечивающий высокий выход КПС, определена динамика роста штамма и накопление им КПС.
В работе использовали штамм S. pneumoniae серотипа 3 (№ 10196), предоставленный лабораторией микробиологии НЦЗД МЗ РФ. В ранее проведенных исследованиях показано, что данный штамм является продуцентом КПС. Посевную культуру выращивали в течение 16 часов при 37 °C на плотной питательной среде с 5% CO2. В ка-
MCP-1 ТК И СК У КРЫС ПРИ МОДЕЛИРОВАНИИ И/Р: БЕЗ ГРУППА) И ГРУППЫ ИНТАКТНЫХ ЖИВОТНЫХ (М±т)
Группы Показатели Срок наблюдения
3 суток 7 суток 30 суток
I (И/Р; n = 5) MCP-1 (ng/mL) TK 0,317±0,005* 1,73±0,16* 0,75±0,09*
CK 0,404±0,06* 0,32±0,01 0,332±0,01
GFAP (pg/mL) ^ 334,12±190,4 810,9±269,3* 720,5±29,8*
II (И/Р + ресвератрол; n = 5) MCP-1 (ng/mL) TK 0,303±0,004** 0,31 ±0,02** 0,34±0,002**
CK 0,33±0,013** 0,31 ±0,04 0,339±0,005
GFAP (pg/mL) ^ 27,56±5,4** 112,6±28,4** 96,33±37,4**
III (контрольная; n = 10) MCP-1 ( TK ng/mL) 0,30±0,002
CK 0,31 ±0,005
GFAP (pg/mL) ^ 267,9±27,2
Примечание. п — количество тест-проб; *- достоверно относительно показателей контрольной группы; ** — достоверно относительно 1-й группы (* ** — р < 0,05).
