CC BY
19
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
нием ВП и 24 ребенка — с ВП, осложненной плевритом. Длительность заболевания составила 3-5 дней в обеих группах и статистически не различалась. Проводилась оценка продукции клетками цельной крови интерлей-кинов: IL-1, интерферон-гамма (IFNy), фактор некроза опухолей (TNFa), сосудистый фактор роста эндотелия (VEGF) и др. Для определения спонтанной выработки цитокинов в пробирку с 1,0 мл крови добавляли 0,3 мл среды RPMI 1640. Для определения индуцированной выработки цитокинов клетки крови стимулировали микроорганизмом S. рneumonае (серотип 7, 11; штаммы 7С и 11AD). Содержание уровня цитокинов в суперна-танте спонтанной и индуцированной S. pneumoniae крови проводили иммуноферментным методом с помощью наборов ЗАО Вектор-БЕСТ (Россия, г. Новосибирск). Статистическая обработка материала проведена c применением пакета STATISTICA для Windows (версия 10.0). Учитывая, что распределение вариант выборки отличалось от нормального, для характеристики распределения вариант использовались медиана (Ме) и 25-75 квартили. Для оценки различий применялся непараметрический критерий Манна—Уитни «U-тест». Для определения взаимосвязей между показателями использовался коэффициент корреляции Спирмена. Был рассчитан индекс индуцированной активности цитокиновой продукции (ИИАЦ): отношение уровня митогениндуцированной продукции цитокинов к уровню спонтанной продукции цитокинов. Различия считали достоверными при уровне значимости р < 0,05.
У детей с ВП с неосложненным течением заболевания при поступлении спонтанная продукция VEGF составила 19,71 пг/мл (7,23-35,35), индуцированная — 23,37 пг/мл (16,46-35,96; р < 0,05). ИИАЦ составил 1,18. У детей с ВП, осложненной плевритом, уровень VEGF при поступлении был в 5,9 выше, чем в группе детей с неосложненным течением заболевания и составил 115,7 пг/мл (44,99-186,51), индуцированная продукция — 174,48 пг/мл (105,26-224,7), р < 0,05. ИИАЦ равнялся 1,5. Возможно, клетки, испытывающие больший дефицит кислорода при осложненном течении ВП, стимулируют повышение выделения VEGF. Полученные данные соотносятся с данными исследователей о том, что физиологические функции VEGF зависят от определенных уровней VEGF и защитными свойствами обладают низкие уровни VEGF. На сегодняшний день VEGF рассматривают как мультифункциональный цитокин, продуцирующийся различными типами клеток — макрофагами, фибробла-стами, лимфоцитами, полиморфноядерными клетками. Активация рецепторов на клетках ведет к включению многочисленных внутриклеточных пострецепторных сигнальных каскадов, запускающих ангиогенез и индуцирующих провоспалительные реакции. Так, корреляционный анализ выявил отрицательную взаимосвязь между концентрацией IL-1 и VEGF у детей с неосложненным течением заболевания (г = -0,46, р < 0,05) при отсутствии такой связи у детей с осложненным течением ВП и положительную зависимость между содержанием спонтанного уровня INFy и VEGF у детей с неосложненным течением ВП (г = 0,28, р < 0,05) и у детей с плевритом (г = 0,42, р < 0,05).
Таким образом, у детей с осложненной ВП индуцирование иммунокомпетентых клеток цельной крови приводит к увеличению секреции VEGF. Выявленные различия концентрации спонтанного и митоген-индуцированного синтеза позволяет рассматривать его как перспективный
маркер формирования осложненного течения ВП у детей для совершенствования ранней диагностики течения заболевания.
ПОКАЗАТЕЛИ СОДЕРЖАНИЯ МОНОЦИТАРНОГО ХЕМОАТТРАКТАНТНОГО ПРОТЕИНА 1 (MCP-1) У ДЕТЕЙ С ПЛЕВРИТОМ
Ефименко М.В., Евсеева Г.П., Холодок Г.Н.
Хабаровский филиал Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания — НИИ охраны материнства и детства, Хабаровск, Россия
Весьма актуальной становится задача поиска современных механизмов ранней диагностики осложненного течения внебольничной пневмонии у детей, когда первичные симптомы при неосложненной и осложненной пневмонии идентичны. В последние годы одним из ведущих направлений в диагностике заболеваний является исследование молекулярных маркеров повреждения, одним из которых можно считать моноцитарный хемоа-трактантный протеин-1 (МСР-1). Под действием хемо-таксических цитокинов осуществляется миграция лейкоцитов в очаг воспаления.
Цель. Изучение уровней спонтанной и митоген-инду-цированной продукции МСР-1 у детей с ВП, осложненной плевритом, и с неосложненным течением ВП.
Было проведено комплексное обследование 108 детей, госпитализированных по поводу внебольничной пневмонии. Из них 84 ребенка с неосложненным течением ВП и 24 ребенка — с ВП, осложненной плевритом. Длительность заболевания составила 3-5 дней в обеих группах и статистически не различалась. Проводилась оценка продукции клетками цельной крови интерлейки-нов, в том числе моноцитарного хемоатрактантного про-теина-1 (monocyte chemoattractant protein-1, МСР-1). Для определения спонтанной выработки цитокинов в пробирку с 1,0 мл крови и добавляли 0,3 мл среды RPMI 1640. Для определения индуцированной выработки ци-токинов клетки крови стимулировали микроорганизмом S. рпеитопае (серотип 7, 11; штаммы 7С и 11AD). Содержание уровня цитокинов в супернатанте спонтанной и индуцированной S. pneumoniae крови проводили иммуноферментным методом с помощью наборов ЗАО Вектор-БЕСТ (Россия, г. Новосибирск). Статистическая обработка материала проведена c применением пакета STATISTICA для Windows (версия 10.0). Учитывая, что распределение вариант выборки отличалось от нормального, для характеристики распределения вариант использовались медиана (Ме) и 25-75 квартили. Для оценки различий применялся непараметрический критерий Манна—Уитни «U-тест». Для определения взаимосвязей между показателями использовался коэффициент корреляции Спирмена. Был рассчитан индекс индуцированной активности цитокиновой продукции (ИИАЦ): отношение уровня митогениндуцированной продукции цитокинов к уровню спонтанной продукции цитокинов. Различия считали достоверными при уровне значимости р < 0,05
Результаты. У детей с ВП с неосложненным течением заболевания при поступлении спонтанный уровень МСР1 составил 225,36 пг/мл (130,11-324,52), индуцированный - 245,19пг/мл (153,24-477,01), р > 0,05. ИИАЦ составил 0. У детей с ВП, осложненной плевритом, уровень МСР-1 при поступлении был в 3,5 выше, чем в груп-
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммунологические проблемы в педиатрии Immunological problems in pediatrics
пе детей с неосложненным течением заболевания и составил 789,32 пг/мл (405,94-1176,0), индуцированный — 1332,1 пг/мл (982,33-1682,0), р < 0,001. ИИАЦ составил 1,7. Установлена прямая корреляция МСР-1 со стимулированным уровнем провоспалительного цитокина IL-17 (г = 0,77, р < 0,05) при неосложненной ВП. При осложненной ВП у детей определены взаимосвязи IL-17 как со спонтанным показателем МСР-1 (г = 0,46, р < 0,05), так и стимулированным уровнем (г = 0,41, р < 0,05) и отрицательная корреляция МСР-1 со стимулированным уровнем противовоспалительного цитокина IL-4 (г = -0,7, р < 0,05). Высокое значение МСР-1 у детей с плевритом может быть, с одной стороны, маркером активации защитных сил иммунной системы, с другой — возможным триггером запуска осложненного течения заболевания. Полученные данные соответствуют исследованиям о роли хемокина МСР-1 в иммунопатогенезе как белка острой фазы — свидетеля и участника иммунного ответа. Высокие концентрации MCP-1 в крови больных в течение длительного времени, по-видимому, можно расценивать как маркер напряженности иммунной системы.
Таким образом, у детей с осложненной ВП индуцирование иммунокомпетентых клеток цельной крови приводит к увеличению концентрации MCP-1. Выявленные различия концентрации спонтанного и митоген-инду-цированного синтеза позволяет рассматривать его как перспективный маркер формирования осложненного течения ВП у детей для совершенствования ранней диагностики течения заболевания.
ФЕНОТИП И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ ИММУННЫХ КЛЕТОК В ПУПОВИННОЙ И ВЕНОЗНОЙ КРОВИ НОВОРОЖДЕННЫХ ПЕРВЫХ СУТОК ЖИЗНИ
Жукова А.С., Ванько Л.В., Тимофеева Л.А.
ФГБУ«Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. В.И. Кулакова» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
Развитие плода в условиях низкой антигенной стимуляции обусловливает незрелость его иммунной системы. В то же время, сразу после рождения ребенка кожа и слизистые дыхательной и пищеварительной систем заселяются микрофлорой, что ведет к активации и дифференциров-ке иммунных клеток. Однако в настоящее время недостаточно данных о различиях в состоянии иммунной системы у плода и новорожденного. Целью данного исследования была оценка субпопуляционного состава иммунокомпе-тентных клеток, функциональной активности фагоцитов и концентрации ряда цитокинов, хемокинов и ростовых факторов в пуповинной и периферической венозной крови новорожденных детей первых суток жизни.
Исследование проведено на образцах крови 17 здоровых доношенных детей: из вены пуповины и периферической вены детей в возрасте 1 суток. Клинический анализ крови выполнен на анализаторе Sysmex XT-2000i (Япония), фенотипирование проводили методом проточной цитометрии на приборе FACSCalibur (BD Biosciences, США), используя флуоресцентно меченные моноклональные антитела к поверхностным маркерам. Функциональную активность нейтрофильных гранулоцитов и моноцитов оценивали методом люми-нол-зависимой хемилюминесценции по способности продуцировать активные формы кислорода (АФК) при индукции опсонизированным зимозаном (ОЗ). Содержание цитокинов определяли мультиплексным мето-
дом с применением коммерческого набора, согласно протоколу (BioRad, США). Статистическую обработку данных проводили, используя пакет программ MedCalc (Бельгия). Проверку нормальности распределения данных осуществляли с применением критерия Шапиро— Уилка. Для оценки различий применяли непараметрический критерий Вилкоксона, различия считали значимыми при р < 0,05. Данные представлены как медиана (25-й — 75-й процентили). Наличие корреляционных связей оценивали, исходя из показателей коэффициента корреляции Спирмена. Исследование одобрено этическим комитетом ФГБУ «НЦАГиП им. В.И. Кулакова» Министерства здравоохранения РФ.
Определено, что в крови новорожденных в возрасте 1 суток относительное и абсолютное содержание нейтрофильных гранулоцитов выше, чем в пуповинной крови (Р < 0,05). Установлено, что интенсивность экспрессии (MFI) CD16 на нейтрофильных гранулоцитах в периферической крови незначительно снижена, а CD64 на моноцитах — повышена по сравнению с пуповинной: 804,9 (612,04-945,81) против 979,6 (816,48-1169,92) и 427,8 (316,77-492,04) против 358,3 (289,73-410,93) соответственно. Выявлена более низкая экспрессия анти-ген-презентирующей молекулы HLA-Dr на клетках периферической крови детей по сравнению с пуповинной: 119,9 (113,74-159,06) против 148,6 (136,06-221,51). При анализе субпопуляционного состава лимфоцитов отмечено более высокое относительное содержание NK-клеток в крови новорожденных 1-х суток жизни по сравнению с пуповинной: 14,9 (10,54-21,04) и 9,2 (4,93-10,40) соответственно. Количество клеток различных субпопуляций, в том числе CD3+CD4+Т-хелперных, CD3+CD8+Т-цитотоксических, CD4+CD25+CD127-/lowТ-регуляторных, СБ3+СБ16,СБ56+ЖТ-клеток, СБ19+СБ5+В1-, СБ19+СБ5В2-лимфоцитов, CD19+CD27+B-клеток памяти в пуповинной и периферической крови новорожденных не различалось. Интенсивность ОЗ-индуцированной внеклеточной и суммарной продукции АФК в первые часы после рождения значимо повышалась. Обнаружена прямая корреляционная зависимость между интенсивностью люминол-зависимой хемилюминесценции и содержанием нейтрофильных гранулоцитов: г = 0,802 Р < 0,0001 в пуповинной крови и г = 0,741 Р = 0,006 в периферической детской крови. По-видимому, усиление интенсивности индуцированной хемилюминесценции может быть связано с физиологическим нейтрофилезом, развивающимся у новорожденных в течение первых часов жизни вследствие активного взаимодействия пищеварительной и дыхательной систем с антигенами внешней среды. Исследование содержания цитокинов выявило значимо более высокий уровень TNFa, ГЬ-1р, Ш-7, ГЬ-8, Ш-10, ГЬ-4 и ГМ-КСФ в периферической крови по сравнению с пуповинной (Р < 0,05 во всех случаях). Концентрация Ш-6, МСР-1 и М1Р-1Р в плазме периферической крови детей была выше более, чем в два раза, по сравнению с аналогичными значениями в пуповинной крови (Р < 0,01). Повышение содержания цитокинов и хемокинов может быть обусловлено активным заселением слизистых оболочек иммунными клетками и их взаимодействием с антигенами. Содержание ростовых факторов Г-КСФ и Ш-2, провоспалительных цитокинов ШЫу, ГЬ-12, Ш-5 и противовоспалительного ГЬ-13 изменялось незначительно (Р > 0,05).
Исходя из полученных данных, можно заключить, что иммунная система новорожденного в отличие от иммунной системы плода имеет признаки умеренного системного воспаления.
